結(jié)晶紫結(jié)合作為細胞毒性的測量是檢測細胞活力或藥物細胞毒性的一種公認方法。結(jié)晶紫是一種三芳基甲烷染料，能與DNA等含有核糖的分子結(jié)合。通常，死細胞從細胞培養(yǎng)板上分離，并在洗滌步驟中去除。使用結(jié)晶紫來量化剩余粘附細胞群的DNA允許通過監(jiān)測其在570nm處的吸光度來快速測量細胞活力。 ? AkrivisBio?的結(jié)晶紫細胞毒性試驗是一種簡單、靈敏的研究細胞增殖、活力或細胞毒性的試驗。該測定提供了細胞存活的定量測量，并可用于評估各種治療或化合物的細胞毒性作用。 ? 艾美捷AkrivisBio?結(jié)晶紫細胞毒性測定： Catalog: CPT-0102 Size: Includes reagents for 1000 wells Sample Type: Adherent Cells Species: Non specific Method of Detection: Colorimetric, OD 570 nm Assay Type: Quantitative Application: To study cell proliferation, viability or cytotoxicity. Range: Recommended 5000-20000 cells/well Storage Conditions: -20°C Shipping Temperature: Gel Pack Shelf Life: One year from the date of delivery ———————————————————— 目錄：CPT-0102 尺寸：包括1000#試劑 樣品類型：粘附細胞 物種：非特定 檢測方法：比色法，OD 570 nm 化驗類型：定量 應(yīng)用：研究細胞增殖、活力或細胞毒性。范圍：推薦5000-20000個細胞/孔 儲存條件：-20°C 運輸溫度：凝膠包裝 保質(zhì)期：一年 ? AkrivisBio?結(jié)晶紫細胞毒性測定組成： 結(jié)晶紫染色40 ml NM CPT-0102-A Wash濃縮液115 ml NM CPT-0502-B 溶解液100 ml WM CPT-0102-C Doxorbicin 100μl紅色CPT-0102-D ? 將未開封的試劑盒儲存在-20°C的溫度下。在打開之前，對所有小瓶進行短暫離心。 水晶紫染色：使用前加熱至RT。用11 ml 100%甲醇重新配制?；厥掌孔樱瑩u晃并靜置15分鐘。在-20°C下儲存。濃縮洗滌液：將1份濃縮洗滌液加入9份去離子水中，制成洗滌液。儲存于4°C。 溶解溶液：使用前置于室溫下?？梢栽赗T或與其他組件一起存儲。阿霉素（20mM）：使用前進行RT。在-20°C下儲存。 ? 測定方案： 1、細胞培養(yǎng)：將粘附細胞培養(yǎng)至約80%的融合度。將細胞進行胰蛋白酶化并在500 X g下離心。加入5 ml生長培養(yǎng)基以分散細胞。使用血細胞儀測定細胞密度。如有必要，將細胞濃度調(diào)整至25000–100000/ml。將200μl細胞懸浮液添加到96孔透明平底板中，以播種5000-20000個細胞/孔。讓細胞沉淀過夜并粘附在培養(yǎng)板上。 2、處理：使用二甲基亞砜作為溶劑制備挑戰(zhàn)化合物。保持化合物濃度足夠高以使DMSO在細胞培養(yǎng)物中保持在0.5%以下。向井中添加化合物。準(zhǔn)備DMSO載體對照和僅包含生長培養(yǎng)基的背景對照）。作為抑制劑對照，向含有細胞的孔中加入1μl 20 mM阿霉素。將平板在細胞培養(yǎng)條件下（37°C，加濕培養(yǎng)箱，5%CO2）培養(yǎng)72小時 3、結(jié)晶紫染色：去除培養(yǎng)基。用200μl洗滌溶液洗滌細胞。洗滌應(yīng)盡可能輕柔。取出盡可能多的洗滌液。向每個孔中加入50μl Crystal Violet Stain甲醇溶液，在室溫下等待20分鐘。培養(yǎng)后，取出甲醇染色溶液。用200μl洗滌液洗滌4次。第4步洗滌后，盡可能多地去除洗滌液，并將盤子風(fēng)干。 4、增溶：向每個孔中加入100μl增溶溶液。在RT.5下?lián)u動平板20分鐘。 5、測量：在570nm處測量外徑。 6、計算：從所有讀數(shù)中減去背景控件的外徑。使用以下公式計算細胞毒性百分比：

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