細(xì)胞死亡或細(xì)胞毒性通常通過評(píng)估質(zhì)膜損傷的程度來評(píng)估。乳酸脫氫酶（LDH）是一種細(xì)胞內(nèi)酶，在細(xì)胞損傷或裂解時(shí)釋放到細(xì)胞外介質(zhì)中，使其成為細(xì)胞毒性作用的有用指標(biāo)。 ? AkrivisBio?的LDH細(xì)胞毒性測(cè)定試劑盒用于評(píng)估細(xì)胞膜完整性并測(cè)量細(xì)胞死亡或細(xì)胞毒性。該檢測(cè)利用WST，一種四氮唑檢測(cè)試劑，對(duì)受損細(xì)胞的LDH釋放進(jìn)行快速、高靈敏度的測(cè)量。顏色的強(qiáng)度與受損細(xì)胞的數(shù)量直接相關(guān)。 ?

艾美捷AkrivisBio?LDH基于細(xì)胞毒性的測(cè)定： Catalog：CPT-0101 Size：Includes reagents for 500 reactions Sample Type：Cells Species：Non specific Method of Detection：Colorimetric, OD 450 nm Assay Type：Quantitative Application：For the detection of LDH released from damaged cells. Range：20000-100000 cells/100 μl in wells of a 96-well plate Storage Conditions：4°C Shipping Temperature：Gel Pack Shelf Life：One year from the date of delivery ———————————————————— 目錄：CPT-0101 尺寸：包括500個(gè)反應(yīng)的試劑 樣本類型：?jiǎn)卧?物種：非特定 檢測(cè)方法：比色法，OD 450 nm 化驗(yàn)類型：定量 應(yīng)用：用于檢測(cè)受損細(xì)胞釋放的LDH。范圍：20000-100000個(gè)細(xì)胞/100μl，在96孔板的孔中 儲(chǔ)存條件：4°C 運(yùn)輸溫度：凝膠包裝 保質(zhì)期：一年 ? AkrivisBio?LDH基于細(xì)胞毒性的測(cè)定組成： WST檢測(cè)試劑1 ml透明NM MA-0109-A 含量測(cè)定緩沖液50 ml NM MA-0109-B 細(xì)胞裂解液5 ml琥珀色NM MA-0109-C 停止溶液5 ml藍(lán)色NM MA-0109-D LDH（陽性對(duì)照）~1 U紅MA-0109-E ? 染色方案： 1、收集細(xì)胞（粘附或懸浮液），用新鮮培養(yǎng)基洗滌一次，然后將2-10 x 104個(gè)100μl的細(xì)胞加入96孔板的孔中，如下所示： a.背景對(duì)照：每孔100μl無細(xì)胞培養(yǎng)基，一式三份。這允許校正由于試劑或來自培養(yǎng)基血清的LDHbackground引起的任何顏色。必須從所有其他值中減去背景值。 b.低對(duì)照組：每孔100μl細(xì)胞，一式三份。 c.高對(duì)照組：每個(gè)孔100μl細(xì)胞，一式四份，每個(gè)孔加10μl細(xì)胞裂解液并混合。為了校正對(duì)合組的差異，可以在步驟4（如下）中使用11μl培養(yǎng)基。 d.測(cè)試樣品：每個(gè)孔100μl細(xì)胞，一式三份，再將測(cè)試物質(zhì)添加到每個(gè)孔中并混合。 注： ?胰蛋白酶或其他更溫和的方法可用于分離粘附細(xì)胞。 ?每個(gè)孔使用的細(xì)胞數(shù)取決于細(xì)胞類型。為了優(yōu)化測(cè)定，每個(gè)孔使用2、4和8 x 104個(gè)細(xì)胞進(jìn)行快速測(cè)試，然后按照測(cè)定方案確定應(yīng)使用的細(xì)胞數(shù)。用10%細(xì)胞裂解液處理30分鐘后，高對(duì)照應(yīng)為~2OD450 nm。在約30分鐘時(shí)，低對(duì)照應(yīng)<0.8 OD450 nm。 ?在1-2個(gè)孔中使用陽性對(duì)照（3-5μl LDH），以證明所有試劑對(duì)活性LDH酶都能正常工作。?如果試驗(yàn)物質(zhì)未溶解在PBS中，則應(yīng)通過添加相同量的溶劑進(jìn)行溶劑控制，一式三份，不添加其他試驗(yàn)物質(zhì)。 2、將細(xì)胞（5%CO2，90%濕度，37°C）孵育一段適當(dāng)?shù)奶幚頃r(shí)間，該時(shí)間由受試物質(zhì)決定。培養(yǎng)結(jié)束后，輕輕搖動(dòng)平板，以確保LDH在培養(yǎng)基中均勻分布。 3、以600 x g離心細(xì)胞10分鐘，使細(xì)胞沉淀。 4、將透明介質(zhì)溶液（10μl/孔）轉(zhuǎn)移到光學(xué)透明的96孔板中。 5、向每個(gè)孔中加入100μl LDH反應(yīng)混合物，混合并在室溫下孵育30分鐘**。 6、用讀板器在450 nm處測(cè)量所有對(duì)照品和樣品的吸光度。 注意： ?根據(jù)顯色速率調(diào)整反應(yīng)時(shí)間?？梢栽诙鄠€(gè)時(shí)間點(diǎn)讀取印版，直到觀察到所需的讀數(shù)。高對(duì)照應(yīng)為OD450 nm~2.0，而低對(duì)照應(yīng)為OD 450 nm<0.8。 ?可通過添加10μl停止溶液來停止反應(yīng)，混合并在48小時(shí)內(nèi)讀取，無顯著變化。保護(hù)反應(yīng)不受光照和蒸發(fā)的影響。

LDH細(xì)胞毒性測(cè)定試劑盒II。Jurkat細(xì)胞如方案中所述在96孔板中孵育。使用WST探針，使用10μl培養(yǎng)基進(jìn)行LDH測(cè)定。低控制（白色條）；高控制（黑條）。 ? 艾美捷科技是AkrivisBio的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。