基因編輯利器

CRISPR-Cas9是細(xì)菌和古細(xì)菌在長期演化過程中形成的一種適應(yīng)性免疫防御，可對抗入侵的病毒及外源DNA，可以將入侵噬菌體和質(zhì)粒DNA的片段整合到CRISPR序列中，通過相應(yīng)的CRISPR RNAs（crRNAs）來指導(dǎo)Cas9蛋白對同源序列的降解，進(jìn)而提供免疫性。根據(jù)CRISPR/Cas系統(tǒng)的特性，科學(xué)家將其改造成了目前最高效的基因組編輯工具。

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同立海源CAS9 核酸酶（進(jìn)口品質(zhì)，國產(chǎn)價格）

產(chǎn)品特點：

1、無重金屬殘留，無抗性殘留

2、?高純度

3、?高效率：KO&KI

4、?高穩(wěn)定性和批間一致性

5、?嚴(yán)格按GMP要求生產(chǎn)

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測試數(shù)據(jù)：

1、CAS9 核酸酶活性測定

與國外知名品牌相比，同立海源Cas9核酸酶切割活性媲美于進(jìn)口品牌

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2、CAS9 核酸酶純度測定

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3、 GMP級 CAS 9 核酸酶 歡迎試用

① 試用產(chǎn)品信息：

中文名稱：CAS 9 核酸酶

英文名稱：CAS 9 Nuclease ?

產(chǎn)品貨號：GMP-TLR005-90pmol

試用規(guī)格：90 pmol

② 時間：即日起-2022年7月31日；

③ 申請要求：申請信息完整，能夠近期開展實驗；

④ 其他說明：試用結(jié)束后，反饋試用結(jié)果；

⑤ 本次活動最終解釋權(quán)歸北京同立海源生物科技有限公司。

⑥ 掃描下方二維碼，填寫申請信息表，我們會及時滿足您的試用需求。

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CAS9的歷史沿革

2012年，Jennifer Doudna和Emmanuelle Charpentier證明CRISPR/Cas9系統(tǒng)可以在體外切割雙鏈DNA；2013年，張鋒首次用CRISPR/Cas9系統(tǒng)在原核生物 (大腸桿菌) 中實現(xiàn)基因組編輯。目前應(yīng)用最廣泛的CRISPR/Cas9系統(tǒng)是來源于化膿性鏈球菌的CRISPR/Cas9系統(tǒng)。

CRISPR-Cas9系統(tǒng)由三個原件構(gòu)成：tracrRNA+crRNA嵌合成的sgRNA（single guide RNA）+宿主DNA序列上的PAM序列（protospacer adjacent motif）+Cas9剪刀（最常用的是化膿性鏈球菌來源的SpCas9蛋白）。sgRNA引導(dǎo)Cas9剪刀到與sgRNA的5’末端堿基互補的（長約20nt的）靶序列處，緊接這段互補序列下游若存在能被Cas9蛋白識別的PAM序列（SpCas9特異性識別的PAM是由3bp組成的NGG序列，N代表任意堿基），Cas9剪刀就會用兩個核酸酶結(jié)構(gòu)域HNH和RuvC（在3～4nt upstream of PAM的位點）剪開DNA兩條鏈，最終形成雙鏈斷裂double-strandedbreak (DSB)。

CRISPR-CAS9系統(tǒng)的廣泛應(yīng)用

基因敲除（Knock-out）? 簡稱KO

Cas9蛋白可以對靶基因組進(jìn)行剪切，形成DNA的雙鏈斷裂。在通常情況下，細(xì)胞會采用高效的非同源末端連接方式對斷裂的DNA進(jìn)行修復(fù)。但是，在修復(fù)過程中通常會發(fā)生堿基插入或缺失的錯配現(xiàn)象，造成移碼突變使靶標(biāo)基因失去功能，從而實現(xiàn)基因敲除。為了提高CRISPR系統(tǒng)的特異性，可將Cas9的一個結(jié)構(gòu)域進(jìn)行突變，形成只能對DNA單鏈進(jìn)行切割造成DNA缺口的Cas9核酸酶，想要形成雙鏈斷裂的效果可以設(shè)計兩條sgRNA序列，兩條sgRNA特異性的靶向結(jié)合DNA互補的兩條鏈的靶標(biāo)序列，即可形成DNA斷裂，并在修復(fù)過程中通過移碼突變實現(xiàn)基因敲除。

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基因敲入（Knock-in） 簡稱KI

當(dāng)DNA雙鏈斷裂后，如果有DNA修復(fù)模板進(jìn)入到細(xì)胞中，基因組斷裂部分會依據(jù)修復(fù)模板進(jìn)行同源重組修復(fù)（HDR），從而實現(xiàn)基因敲入。HDR修復(fù)模式在細(xì)胞中發(fā)生率較低，通常小于10%。為了增加基因敲入的成功率，目前有很多科學(xué)家致力于提高HDR效率，將編輯的細(xì)胞同步至HDR最活躍的細(xì)胞分裂時期，促進(jìn)修復(fù)方式以HDR進(jìn)行；或者利用化學(xué)方法抑制基因進(jìn)行NHEJ，提高HDR的效率。

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多重編輯（Multiplex Editing）

將多個sgRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)入到細(xì)胞中，可同時對多個基因進(jìn)行編輯，具有基因組功能篩選作用。多重編輯的應(yīng)用包括：使用雙Cas9 nickases提高基因敲除的準(zhǔn)確率、大范圍的基因組缺失及同時編輯不同的基因。通常情況下，一個質(zhì)粒上可以構(gòu)建2～7個不同的sgRNA進(jìn)行多重CRISPR基因編輯。

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功能基因組篩選

目前CRISPR的基因組篩選功能應(yīng)用于篩選對表型有調(diào)節(jié)作用的相關(guān)基因，如對化療藥物或者毒素產(chǎn)生抑制的基因、影響腫瘤遷移的基因以及構(gòu)建病毒篩選文庫對潛在基因進(jìn)行大范圍篩選等。

關(guān)于北京同立海源生物科技有限公司：

北京同立海源生物科技有限公司，專注細(xì)胞和基因治療（CGT）上游GMP級原料試劑研發(fā)，致力于為生命科學(xué)提供可靠的產(chǎn)品與服務(wù)。產(chǎn)品涉及真核重組蛋白、細(xì)胞分選試劑、無血清培養(yǎng)基、細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒、工具酶。為細(xì)胞和基因治療、mRNA開發(fā)、抗體藥物開發(fā)、細(xì)胞儲存等生物制藥和IVD領(lǐng)域提供核心原料試劑與服務(wù)。公司建有符合cGMP標(biāo)準(zhǔn)的萬級潔凈車間，包括哺乳動物細(xì)胞表達(dá)蛋白質(zhì)工程平臺、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)開發(fā)平臺、體外診斷試劑生產(chǎn)平臺，通過ISO13485和ISO9001雙認(rèn)證，部分產(chǎn)品已獲美國FDA DMF備案。

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