當(dāng)我們獲得一種新型材料或者一種藥物時(shí)，就想迫不及待的知道其對(duì)細(xì)胞的安全性，但是細(xì)胞活性檢測(cè)方法那么多，讓人感覺無著手，真是令人頭大、令人心累呀(?ó﹏ò?)

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今天小木子就和大家一起學(xué)習(xí)檢測(cè)材料或藥品安全性的大法---細(xì)胞毒性檢測(cè)。讓科研人一起干起來!!!

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首先呢，讓我們一起了解下什么是細(xì)胞毒性檢測(cè)？

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細(xì)胞毒性檢測(cè)：利用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，采用細(xì)胞毒性試驗(yàn)評(píng)價(jià)一種器材、材料或藥物引起的細(xì)胞死亡、細(xì)胞生長(zhǎng)抑制或者細(xì)胞方面其他的影響。體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)具有通用性的特點(diǎn)，能夠廣泛適用于各種醫(yī)療器械和材料的評(píng)價(jià)。進(jìn)而檢測(cè)樣品的材質(zhì)是否導(dǎo)致細(xì)胞損傷、細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞代謝變化，甚至引發(fā)死亡。常分為直接接觸實(shí)驗(yàn)、間接接觸實(shí)驗(yàn)、浸提液實(shí)驗(yàn)三類。

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既然我們已經(jīng)知道細(xì)胞毒性檢測(cè)的定義，那么現(xiàn)在一起學(xué)習(xí)怎么樣才能進(jìn)行檢測(cè)？

細(xì)胞毒性檢測(cè)主要是依據(jù)細(xì)胞膜通透性發(fā)生改變來進(jìn)行檢測(cè)的。而常用的檢測(cè)方法有以下幾種：

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MTT檢測(cè)法；

CCK-8檢測(cè)法；

熒光素發(fā)光法檢測(cè)（ATP發(fā)光法）；

LDH法檢測(cè)；

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除了以上的檢測(cè)方法還有各種各樣的細(xì)胞毒性檢測(cè)方法，例如：細(xì)胞計(jì)數(shù)法、XTT、臺(tái)盼藍(lán)染色、Calcelin-AM/PI雙染等。

別急，小木子依次講解上面常用的檢測(cè)方法。

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MTT

MTT全稱為3-（4,5-Dimethyl-2-thiazolyl）-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide，漢語(yǔ)化學(xué)名為3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二甲基四氮唑溴鹽，是一種黃顏色的染料。是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。其主要原理為利用細(xì)胞線粒體內(nèi)部酶的活性，可以將特定的四唑鹽進(jìn)行轉(zhuǎn)化，然后通過酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)。具體的原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能夠?qū)⑼庠葱缘腗TT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚，沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞沒有此功能。二甲基亞砜（DMSO）能夠?qū)⒊练e在細(xì)胞中的甲瓚溶解，形成紫色溶液，然后在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀中檢測(cè)570?nm波長(zhǎng)處的OD值（也可用490?nm），可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。具有靈敏度高、經(jīng)濟(jì)、便捷的特點(diǎn)。

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CCK-8

CCK-8（Cell?Counting?Kit-8）檢測(cè)法，是用于測(cè)定細(xì)胞增殖或者細(xì)胞毒性試驗(yàn)中活細(xì)胞數(shù)目的一種高靈敏度，無放射性的比色檢測(cè)法。CCK-8是一種氧化還原反應(yīng)的指示劑，該試劑中含有WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）能在電子載體1-Methoxy PMS存在的條件下，利用活細(xì)胞中的脫氫酶催化四唑鹽WST-8還原生成高度水溶性的黃色甲臜染料，而且甲臜染料的生成量與活細(xì)胞的數(shù)量成線性關(guān)系，即顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比，與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在450?nm波長(zhǎng)處測(cè)定OD值，進(jìn)而間接反映活細(xì)胞數(shù)量。

CCK-8具有靈敏度高、重現(xiàn)性好、可直接加入細(xì)胞樣品中，不需要與其他組分預(yù)混以及洗滌細(xì)胞、操作簡(jiǎn)單便捷、無需有機(jī)溶劑、對(duì)細(xì)胞毒性小、檢測(cè)準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。即可用于貼壁細(xì)胞也可用于懸浮細(xì)胞?；谝陨系膬?yōu)點(diǎn)，CCK-8檢測(cè)法應(yīng)用較為廣泛，如藥物篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、腫瘤藥敏實(shí)驗(yàn)以及一些生物因子的活性檢測(cè)等。

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CCK-8工作原理圖如下：

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CCK-8?與MTT法檢測(cè)相比較優(yōu)缺點(diǎn)如下表：

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熒光素發(fā)光法（ATP發(fā)光法）

腺苷三磷酸（ATP adenosine triphosphate）是由腺嘌呤、核糖和3個(gè)磷酸基團(tuán)連接而成，水解時(shí)釋放出能量較多，是生物體內(nèi)最直接的能量來源。內(nèi)源性ATP是活細(xì)胞最基本的能量來源，而細(xì)胞死亡時(shí)，ATP迅速水解。因此，測(cè)定細(xì)胞內(nèi)源性ATP的含量可以及時(shí)反映細(xì)胞活性和活細(xì)胞數(shù)量。

ATP發(fā)光法，是通過檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ATP含量來分析細(xì)胞活性及增殖的。常見的ATP發(fā)光法是利用外源螢火蟲熒光素/熒光素酶與細(xì)胞內(nèi)的ATP發(fā)生氧化反應(yīng)將化學(xué)能轉(zhuǎn)化為光能，通過監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度來檢測(cè)ATP含量。在熒光素酶催化發(fā)光反應(yīng)中，ATP在一定的濃度范圍內(nèi)，其濃度與發(fā)光強(qiáng)度呈線性關(guān)系，將ATP數(shù)量化。具有靈敏、快速、便捷、穩(wěn)定特點(diǎn)。

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（圖片來自網(wǎng)絡(luò)）

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LDH法

LDH（乳酸脫氫酶）是一種穩(wěn)定的蛋白質(zhì)，存在于正常細(xì)胞的胞質(zhì)中，一旦細(xì)胞膜受損，LDH即被釋放到細(xì)胞外；LDH能夠催化乳酸形成丙酮酸鹽，和INT（四唑鹽類）反應(yīng)形成紫色的結(jié)晶物質(zhì)，可通過酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)500 nm波長(zhǎng)處的OD值。因此可通過檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中LDH的酶活性，可判斷細(xì)胞受損的程度，進(jìn)而檢測(cè)細(xì)胞毒性。

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通過以上的學(xué)習(xí)，是否感覺自己收獲滿滿呢！在掌握了原理之后，是否蠢蠢欲動(dòng)，迫不及待進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，信心滿滿的安排自己的科研計(jì)劃呢，然后早日獲得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，爭(zhēng)取早日發(fā)表文章，早日脫離科研困擾。下期小木子在將給大家分享實(shí)驗(yàn)步驟，注意事項(xiàng)，以及遇到的問題解決方法。

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關(guān)于細(xì)胞毒性檢測(cè)，今天就分享到這里。如果內(nèi)容對(duì)你有幫助，希望大家不要吝嗇點(diǎn)個(gè)贊哦，我們會(huì)繼續(xù)給大家輸出更多優(yōu)質(zhì)內(nèi)容~

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