什么是基因組文庫

基因組文庫是一組 DNA 克隆，代表特定生物體 DNA 的全部?jī)?nèi)容。DNA克隆通過在微生物中復(fù)制繁殖。基因組文庫允許研究人員從文庫中分離感興趣的DNA片段進(jìn)行研究。基因組文庫在全基因組測(cè)序中很重要。

基因組文庫是如何產(chǎn)生的

基因組文庫制備所涉及的步驟如下所述。

1. 基因組DNA提取和純化

2. 用特定的限制性內(nèi)切酶消化基因組DNA – 這可能會(huì)導(dǎo)致一組具有相似大小的 DNA 片段。每個(gè)片段可能包含基因組的一個(gè)或兩個(gè)基因。

3. 將DNA片段插入特定類型的載體中 – 使用相同的限制性內(nèi)切酶消化載體，然后將插入片段連接到載體中。載體的選擇取決于基因組的大小。載體容量如下所示。

圖1.載體容量

4.轉(zhuǎn)化為宿主 – 在大多數(shù)情況下，宿主是細(xì)菌或酵母。在宿主復(fù)制過程中形成特定DNA片段的克隆。

圖2.基因組文庫制備

庫滴度的測(cè)定

文庫的滴度使研究人員能夠了解樣品中有多少轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。它是通過稀釋轉(zhuǎn)化的細(xì)胞并計(jì)算每體積的細(xì)胞數(shù)量來完成的。

篩選庫

篩選允許從文庫中分離特定的DNA片段。它主要可以通過兩種方式完成，要么通過直接選擇重組體，要么檢測(cè)表達(dá)。直接選擇可以通過PCR和菌落雜交來完成。

結(jié)論

基因組文庫是代表特定生物體基因組中整個(gè)DNA內(nèi)容的DNA片段的集合。它是通過將基因組的片段DNA插入載體并將重組分子轉(zhuǎn)化為宿主細(xì)胞進(jìn)行增殖而產(chǎn)生的。