A33/CD9/CD81/CD63/PDL1/單鏈aCD11c抗體修飾外泌體的制備
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A33抗體修飾外泌體的制備方法:
通過化學(xué)交聯(lián)法將A33抗體與羧基化的超順磁性納米粒(USPIO)連接制備探針(A33-USPIO),并利用動態(tài)光散射和紅外光譜法對連接前后的USPIO進行表征。采用超速離心法分離出人結(jié)腸癌細胞株LIM1215細胞來源的EXO包載DOX ,并通過透射電鏡觀察形態(tài)。

用ELISA法測定EXO和探針結(jié)合的最適比例。透析法測定A33抗體修飾的載DOX的 EXO給藥系統(tǒng)(A33-US-EXO/DOX)體外釋放特性。將不同的DOX制劑分別與LIM1215共培養(yǎng)后,用流式細胞儀測定細胞攝取DOX的情況,利用熒光顯微鏡驗證A33-US-EXO/DOX的體外靶向能力。
透射電鏡下EXO直徑約為100 mm , 2.5 ug 探針約能與32 1g 的EXO結(jié)合,結(jié)合后平均粒徑為(187.83士6.76 ) nm ,聚合物分散指數(shù)( polymer dispersity index ,PDI)為0.21。在 pH 7.4,6.0、5.0條件下,DOX組、EXO/DOX組和A33-US-EXO/DOX組的48 h累積釋藥量分別為.24.32%、 34.07% , 62.82% ,細胞攝取效率分別為(13.10±1.08%、(51 .53士3.56%和(85,11士3.91%/%。熒光觀察顯示,A33-US-EXO/DOX與A33抗原陽性的LIM1215細胞大量結(jié)合,而與A33抗原陰性的RAW264.7細胞結(jié)合較少。A33抗原靶向的EXO給藥系統(tǒng),體外實驗表明其具有較高的攝取效率和良好的靶向性。
CD63抗體修飾外泌體制備方法:
在streptactin磁珠表面功能化處理修飾CD63抗體,過濾待測細胞培養(yǎng)上清液樣本,將過濾后的待測細胞培養(yǎng)上清液樣本與CD63抗體偶聯(lián)磁珠混合并孵育;分離孵育后的混合物,得到磁吸附物和分離液;洗滌磁吸附物,并將洗滌后的磁吸附物與洗脫緩沖液混合并孵育﹐使固液分離,收集外泌體提取液。
相關(guān)產(chǎn)品:
細胞外囊泡標記外泌體單克隆抗體
抗體DNA偶連外泌體
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外泌體表面蛋白與單克隆鼠抗CD-63.2.抗體偶聯(lián)
巰基化靶向抗體與外泌體通過蛋白質(zhì)交聯(lián)劑連接
連接CD22-F(ab’)抗體片段外泌體
RXYWX.2022.4.24