摘要

理由

低循環(huán)祖細(xì)胞(PC)數(shù)量和活性可能反映了內(nèi)在的再生/修復(fù)潛能受損，但仍不確定這是否轉(zhuǎn)化為更差的預(yù)后。

目標(biāo)

研究在心血管疾病高危人群中，低個(gè)人電腦數(shù)量是否會(huì)增加死亡風(fēng)險(xiǎn)。

方法及結(jié)果

接受冠狀動(dòng)脈造影的患者在不同的時(shí)間段分為兩組(1，n = 502和2，n = 403)。PC 通過流式細(xì)胞術(shù)計(jì)數(shù)為表達(dá) CD34的 CD45med + 血液單核細(xì)胞，另外定量共表達(dá) CD133，VEGFR2和 CXCR4的亞群。CD34細(xì)胞的變異系數(shù)分別為2.9% ，4.8% ，21.6% 和6.5% 。隨訪每個(gè)隊(duì)列的平均時(shí)間分別為2.7年和1.2年，為全因死亡的主要終點(diǎn)。

在隊(duì)列1中，CD34 + 和 CD34 +/CD133 + 細(xì)胞計(jì)數(shù)與死亡風(fēng)險(xiǎn)呈負(fù)相關(guān)(β = -0.92，p = 0.043和 β = -1.64，p = 0.019)在隊(duì)列2中證實(shí)(β = -1.25，p = 0.020和 β = -1.81，p = 0.015)。合并隊(duì)列(n = 905)的協(xié)變量調(diào)整 HR 分別為3.54(1.67-7.50)和2.46(1.18-5.13)。CD34 +/CD133 + 細(xì)胞計(jì)數(shù)改善了超出標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)險(xiǎn)因素的風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測指標(biāo)。

結(jié)論

主要鑒定為 CD34 + 單核細(xì)胞或其表達(dá) CD133的子集的循環(huán) PC 計(jì)數(shù)降低與冠狀動(dòng)脈疾病個(gè)體的死亡風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，表明內(nèi)源性再生能力受損與死亡率增加有關(guān)。這些發(fā)現(xiàn)對細(xì)胞療法的生物學(xué)理解、風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測和細(xì)胞選擇有一定的意義。

引言

盡管心血管危險(xiǎn)因子介導(dǎo)的血管內(nèi)皮損傷已被很好地描述，但在發(fā)現(xiàn)祖細(xì)胞(PC)在血管修復(fù)中的關(guān)鍵作用之前，對于再生的機(jī)制知之甚少。1-3循環(huán) PC 是單核的，主要起源于骨髓，但不僅僅起源于骨髓，具有分化成幾個(gè)譜系的潛力，并且有助于血管修復(fù)和再生。來自人骨髓的1,2,4,5 CD34 + 單核細(xì)胞包括造血(CD34 +/CD45med)和非造血(間充質(zhì))祖細(xì)胞的不同譜系。6 CD34 + 細(xì)胞具有較大的心肌修復(fù)潛能。7 CD133是在成熟過程中丟失的原始干細(xì)胞的5-跨膜抗原標(biāo)志物，并且表達(dá)兩種標(biāo)志物(CD34 +/CD133 +)的細(xì)胞可以進(jìn)一步富集血管 PC 表型。雖然已經(jīng)提出了額外的血管內(nèi)皮生長因子受體 -2(VEGFR2)的表達(dá)來鑒定更多分化的 PC，但是與其他更豐富的 CD34 + 群體相比，這些亞群仍然難以重復(fù)定量。最后，CXCR4的共表達(dá)，其促進(jìn) PC 歸巢到基質(zhì)衍生因子富集的缺氧環(huán)境以增強(qiáng)修復(fù)，也可以進(jìn)一步表征 PC 具有血管修復(fù)能力。

血液中 PC 的計(jì)數(shù)和活性較低與心血管危險(xiǎn)因素和血管功能障礙有關(guān)，實(shí)驗(yàn)研究表明 PC 計(jì)數(shù)減少反映了再生潛能受損[11-15]。早期研究報(bào)道了低數(shù)量循環(huán) PC 受試者不良心血管事件的風(fēng)險(xiǎn)增加。然而，大多數(shù)關(guān)聯(lián)是由程序性終點(diǎn)驅(qū)動(dòng)的，PC 的特征可變?yōu)?CD34 + ，CD133 + 或 CD34 +/VEGFR2雙陽性細(xì)胞[16-18]。低循環(huán) PC 計(jì)數(shù)是否增加高心血管風(fēng)險(xiǎn)受試者的死亡率尚不清楚。

我們試圖全面研究 CD34 + 富集的個(gè)人電腦對冠狀動(dòng)脈疾病(CAD)患者的預(yù)后影響，假設(shè)低循環(huán)個(gè)人電腦計(jì)數(shù)(反映心血管再生能力降低)將與更高的死亡率相關(guān)。作為次要終點(diǎn)，我們還研究了 PC 與心血管死亡之間的關(guān)系以及死亡和心肌梗死的聯(lián)合結(jié)果。

方法

研究人口

年齡在20-90歲之間的研究參與者被招募為埃默里心血管生物庫的一部分，這是一個(gè)正在進(jìn)行的前瞻性隊(duì)列，患者在接受冠狀動(dòng)脈造影之前登記，在三個(gè)埃默里醫(yī)療保健站點(diǎn)調(diào)查或管理 CAD，收集關(guān)于人口特征，病史，藥物使用，行為習(xí)慣和風(fēng)險(xiǎn)因素患病率的數(shù)據(jù)，其細(xì)節(jié)已經(jīng)發(fā)表過

在相同的方案下收集了兩個(gè)子群體，采用相同的采樣策略和采集方法，但是在時(shí)間上和細(xì)胞定量方法的改變上分開(見下文)。隊(duì)列1(n = 502)在2006年3月至2008年9月期間入選，而隊(duì)列2(n = 403)在2008年10月至2011年2月期間收集。

招募的患者在入選時(shí)是穩(wěn)定的，并進(jìn)行了選擇性手術(shù)，盡管使用國際標(biāo)準(zhǔn)定義的非 ST 段抬高心肌梗死穩(wěn)定的患者也被納入并分類為“急性心肌梗死”。阻塞性 CAD 被定義為主要心外膜血管 > 50% 的管腔狹窄，并計(jì)算 Gensini 評分以量化 CAD 的負(fù)擔(dān)。如果患者有心臟移植、免疫抑制劑使用史、惡性腫瘤史或嚴(yán)重感染史，則被排除在外。這項(xiàng)研究符合赫爾辛基宣言，并獲得機(jī)構(gòu)審核委員會(huì)的艾默理大學(xué)批準(zhǔn)，所有研究對象均提供書面知情同意。

隨訪和終點(diǎn)

隨訪確定全因死亡的主要終點(diǎn)、心血管死亡的次要終點(diǎn)以及全因死亡或心肌梗死的綜合終點(diǎn)。這是通過電話訪談、圖表審查以及與社會(huì)保障死亡指數(shù)和國家記錄掛鉤而對個(gè)人電腦數(shù)據(jù)不知情的人員進(jìn)行的。死因由兩名心臟病專家判定，如果意見不一致，則由第三名仲裁員判定，他們都不知道個(gè)人電腦的數(shù)據(jù)。心血管死亡被定義為由缺血性心血管原因引起的死亡(致命性心肌梗死，中風(fēng)，外周動(dòng)脈疾病)或由于高?；颊呶粗贫ǖ男难茉蛞鸬拟?/strong>。醫(yī)療記錄被訪問或要求驗(yàn)證所有自我報(bào)告的事件，包括心肌梗死，再次使用標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)定義。

流式細(xì)胞儀

經(jīng)過一夜的禁食后，動(dòng)脈血液通過股動(dòng)脈鞘收集到 EDTA 管中，然后再進(jìn)行心臟導(dǎo)管插入術(shù)。在4小時(shí)內(nèi)制備血液樣品，并與熒光染料標(biāo)記的單克隆抗人小鼠抗體一起溫育，以在使用流式細(xì)胞術(shù)定量之前鑒定在單核細(xì)胞上表達(dá)的表面標(biāo)志物。進(jìn)一步的細(xì)節(jié)在補(bǔ)充方法中給出。

值得注意的是，隊(duì)列1的初步描述性分析顯示非常少見的細(xì)胞類型計(jì)數(shù)非常低。因此，對于隊(duì)列2，通過向300uL 全血中添加固定數(shù)量的計(jì)數(shù)珠和減少細(xì)胞損失的裂解-不洗滌方法來完善 PC 的計(jì)數(shù)。這種改進(jìn)的定量和細(xì)胞計(jì)數(shù)隨后被注意到是更高的每個(gè)子集相比，隊(duì)列1。通過在具有和不具有 CD133(CD34 +/CD133 +)和 VEGFR2(CD34 +/VEGFR2和 CD34 +/CD133 +/VEGFR2 +)的共表達(dá)的 CD45med + 細(xì)胞上表達(dá) CD34表面標(biāo)記，在兩個(gè)隊(duì)列中鑒定推定的循環(huán) PC)。在隊(duì)列2中，還定量了另外的標(biāo)記 CXCR4的共表達(dá)(如 CD34 +/CXCR4 + 和 CD34 +/CD133 +/CXCR4 +)。所有細(xì)胞群均以細(xì)胞計(jì)數(shù)/μl 報(bào)告。

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

統(tǒng)計(jì)分析連續(xù)變量表示為平均值(SD)或中位數(shù)(IQR) ，分類變量表示為比例(%)。在參數(shù)分析之前，細(xì)胞計(jì)數(shù)是非正態(tài)分布的并且被轉(zhuǎn)換(自然對數(shù)(細(xì)胞計(jì)數(shù) + 1))。

另外，細(xì)胞群按三分位數(shù)進(jìn)行分類，以得出效應(yīng)估計(jì)值，并允許對兩個(gè)隊(duì)列進(jìn)行匯總分析。

最后，為了評估細(xì)胞計(jì)數(shù)作為生物標(biāo)志物的潛力，我們在隊(duì)列1中得出了優(yōu)化的截?cái)嘀担⒃陉?duì)列2中應(yīng)用該閾值(作為絕對值的百分位等價(jià)物)進(jìn)行驗(yàn)證。利用 ROC曲線(ROC)分析和尤登指數(shù)(靈敏度-(1-特異性))(補(bǔ)充圖1)確定切點(diǎn)。

生存分析采用 Cox 比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型，根據(jù)年齡和性別進(jìn)行調(diào)整。在匯總隊(duì)列中，進(jìn)一步調(diào)整了體重指數(shù)(BMI) ，糖尿病，高血壓，低密度脂蛋白(LDL) ，目前吸煙，他汀類藥物使用，腎功能(gFR) ，入選時(shí)急性心肌梗死，左心室射出分率(LVEF)和 CAD 負(fù)擔(dān)(Gensini 評分)。對于完全調(diào)整模型(范圍0-3%)缺少的協(xié)變量數(shù)據(jù)進(jìn)行估算，并與未經(jīng)估算的數(shù)據(jù)進(jìn)行敏感度分析，發(fā)現(xiàn)結(jié)果相似。Cox 模型的比例風(fēng)險(xiǎn)假設(shè)通過 Schoenfeld 殘差圖和正式測試(以 Schoenfeld 殘差總和計(jì)算的卡方檢驗(yàn))進(jìn)行評估，沒有發(fā)現(xiàn)顯著違反假設(shè)的情況。

PC 計(jì)數(shù)對風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測的增量值在其加入(使用上述高 v 低分類)到具有傳統(tǒng)風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測因子的臨床模型之前和之后進(jìn)行測試。計(jì)算 C- 統(tǒng)計(jì)量(AUC)、無類別凈重分類改善(NRI)和綜合判別改善(IDI)作為風(fēng)險(xiǎn)判別指標(biāo)。雙側(cè)檢驗(yàn) < 0.05的 P 值被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所有統(tǒng)計(jì)分析均使用 SAS (NC)和 SPSS 20.0(芝加哥)進(jìn)行。

結(jié)果

表1顯示了隊(duì)列1中的502名受試者和隊(duì)列2中的403名受試者的基線患者特征。平均年齡和性別分布在隊(duì)列中相似(62.5歲和62.9歲; 男性64.1% 和65.5%)?？傮w而言，患者特征反映了冠狀動(dòng)脈造影時(shí)招募的典型人群，超過三分之二的患者報(bào)告高血壓和高脂血癥，三分之一的患者報(bào)告糖尿病。

PC 量化的可重復(fù)性及 PC 子集間的相關(guān)性

在同一技術(shù)人員兩次重復(fù)分析的隊(duì)列2的20個(gè)樣品中，細(xì)胞類型的變異系數(shù)為: CD34 + 2.9% ; CD34 +/CD133 + 4.8% ; CD34 +/CXCR4 + 6.5% 和 CD34 +/CD133 +/CXCR4 + 7.5% 。然而，CD34 +/VEGF2R 細(xì)胞和 CD34 +/CD133 +/VEGF2R 細(xì)胞在21.6% 和35.9% 的重復(fù)性較差。由于上述改進(jìn)的枚舉方法，第2組的個(gè)人電腦計(jì)數(shù)普遍較高。CD34 + 及其 CD34 +/133 + 子集在每個(gè)隊(duì)列中彼此高度相關(guān)(Spearman rho = 0.92和0.87，分別為隊(duì)列1和2) ，其他細(xì)胞類型之間具有更適度的相關(guān)性(補(bǔ)充表 I)。

PC 與人口統(tǒng)計(jì)學(xué)及臨床特征的關(guān)系

在隊(duì)列1中，較低的 CD34 + 和 CD34 +/CD133 + 細(xì)胞計(jì)數(shù)與較高的年齡，男性，腎功能受損，梗阻性 CAD 和既往心肌梗死史單獨(dú)相關(guān)。較低的 CD34 +/CD133 + 細(xì)胞也與 CAD 負(fù)荷(Gensini 評分)和 PAD 病史有關(guān)。在隊(duì)列2中復(fù)制了兩種細(xì)胞類型與年齡，性別和腎功能之間的關(guān)聯(lián)，其中較低的細(xì)胞計(jì)數(shù)與較低的 BMI，較高的 HDL (相反)和當(dāng)前吸煙之間存在進(jìn)一步的適度相關(guān)性(補(bǔ)充表 II 和 III)。

我們沒有觀察到任何研究的細(xì)胞類型與其他心血管危險(xiǎn)因素如糖尿病，高血壓或他汀類藥物使用，左心室功能，卒中史或入選時(shí)存在或不存在急性心肌梗死之間的一致關(guān)聯(lián)。

PC 人群與不良結(jié)局的關(guān)系

在總共1800人年的隨訪中，有71人死亡。

CD34+ and CD34+/CD133+ cells??在隊(duì)列1(n = 502)中，根據(jù)年齡和性別調(diào)整的 Cox 回歸分析顯示，CD34 + 和 CD34 +/CD133 + 計(jì)數(shù)均與全因死亡的主要終點(diǎn)呈負(fù)相關(guān)(分別為 p = 0.043和 p = 0.019)(表2)。當(dāng)分為三分位數(shù)時(shí)，那些 CD34 + 細(xì)胞計(jì)數(shù)最低三分位數(shù)的受試者與最高三分位數(shù)組(HR 4.63(95% CI，1.59-13.5))相比，死亡風(fēng)險(xiǎn)高于4.6倍。對于 CD34 +/CD133 + 細(xì)胞計(jì)數(shù)最低三分位數(shù)(HR 3.09(95% CI，1.15-8.33))的患者，年齡和性別調(diào)整后的死亡風(fēng)險(xiǎn)增加了3倍。對于這兩種細(xì)胞類型，每三分位數(shù)的效應(yīng)大小都有分級增加(表2和圖1)。

在隊(duì)列2(n = 403)中，CD34 + 和 CD34 +/CD133 + 計(jì)數(shù)和主要終點(diǎn)之間的年齡和性別調(diào)整的關(guān)聯(lián)被復(fù)制(分別為 p = 0.019和 p = 0.015)(表3)。同樣，CD34 + 細(xì)胞計(jì)數(shù)最低三分位數(shù)(HR 3.43(95% CI，1.23-9.59))和 CD34 +/CD133 + 細(xì)胞最低三分位數(shù)(HR 2.93(95% CI，1.05-8.21))與每種細(xì)胞類型的最高三分位數(shù)相比，死亡風(fēng)險(xiǎn)增加(表3)。

在905名受試者的匯總隊(duì)列中，CD34 + 和 CD34 +/CD133 + 細(xì)胞最低三分位數(shù)的受試者的年齡和性別調(diào)整 HR 分別為3.87(95% CI，1.86-8.06)和3.06(95% CI，1.50-6.24) ，與最高三分位數(shù)類別的受試者相比，全因死亡的主要終點(diǎn)(表4)。在充分調(diào)整可能的混雜因素(年齡，性別，BMI，糖尿病，高血壓，低密度脂蛋白，吸煙，GFR，他汀類藥物使用，Gensini 評分，LVEF，AMI)后，這些關(guān)聯(lián)分別為 CD34 + 和 CD34 +/CD133 + 細(xì)胞的 HR 為3.54(95% CI，1.67-7.50)和2.46(95% CI，1.18-5.13)(表4)。

CD34 + 和 CD34 +/CD133細(xì)胞類型之間的顯著相關(guān)性也被觀察到心血管死亡的次要終點(diǎn)和死亡/MI 組合的復(fù)合終點(diǎn)(表2--44)。

CD34+/CD133? (negative) cells?在 CD34 + 群體中，不表達(dá) CD133(CD34 +/CD133 -)的細(xì)胞與隊(duì)列1(p = 0.132)或隊(duì)列2(p = 0.07)中的所有原因死亡風(fēng)險(xiǎn)沒有關(guān)聯(lián)。

VEGFR2+ cells?VEGFR2在 CD34 + 或 CD34 +/CD133 + 細(xì)胞上的共表達(dá)與兩個(gè)隊(duì)列中的死亡率無關(guān)(數(shù)據(jù)未顯示)。

CXCR4+ cells?在隊(duì)列2(n = 403)中列舉的 CXCR4共表達(dá)顯示 CD34 +/CXCR4 + 細(xì)胞的較低計(jì)數(shù)與年齡和性別調(diào)整模型中的全因死亡風(fēng)險(xiǎn)之間的邊際關(guān)聯(lián)(p = 0.07)。與最高三分位數(shù)相比，CD34 +/CXCR4 + 細(xì)胞計(jì)數(shù)最低三分位數(shù)的死亡風(fēng)險(xiǎn) HR 為2.77(95% CI，1.04-7.39)(補(bǔ)充表 IV)。共表達(dá) CXCR4和 CD133(CD34 +/CD133 +/CXCR4 +)的細(xì)胞表現(xiàn)出與死亡風(fēng)險(xiǎn)相似的臨界關(guān)聯(lián)(補(bǔ)充表 IV)。

敏感性分析

當(dāng)分別對兩個(gè)隊(duì)列中的年齡、性別和危險(xiǎn)因素進(jìn)行 CD34 + 細(xì)胞計(jì)數(shù)的敏感性分析時(shí)，沒有相互作用(補(bǔ)充表 VI)。盡管在隊(duì)列2和隊(duì)列1中存在梗阻性 CAD 和 LV 功能的相互作用，但這兩個(gè)隊(duì)列之間的相互作用并不一致。具體來說，CD34 + 細(xì)胞對死亡率的影響并沒有因?yàn)榧毙孕募」Ｋ?PAD，卒中)的入選或存在其他缺血性疾病而改變。

風(fēng)險(xiǎn)區(qū)分度測試

為了確定 PC 作為探索性分析中生物標(biāo)志物的潛力，我們使用 Youden 指數(shù)確定了 CD34 + 細(xì)胞(第37百分位)的0.737計(jì)數(shù)/μl 和 CD34 +/CD133 + 細(xì)胞(第46百分位)的0.504計(jì)數(shù)/μl 的閾值隊(duì)列1中的主要終點(diǎn)，并試圖在隊(duì)列2中驗(yàn)證這些(補(bǔ)充圖 I)。

在調(diào)整年齡和性別后，CD34 + 和 CD34 +/CD133 + 細(xì)胞計(jì)數(shù)低于相關(guān)閾值與死亡風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)(HR 2.15(95% CI，1.16-3.97)和 HR 3.16(95% CI，1.49-6.72)) ，分別在隊(duì)列1中。這些發(fā)現(xiàn)在隊(duì)列2中完全重復(fù)，具有相似的結(jié)果，每種細(xì)胞類型的“低”值(HR 2.79(95% CI，1.31-5.96)和 HR 3.27(95% CI，1.37-7.83))的死亡風(fēng)險(xiǎn))。在匯總隊(duì)列中，與高計(jì)數(shù)相比，低 CD34 + 計(jì)數(shù)和 CD34 +/CD133 + 計(jì)數(shù)與 HR 分別為2.24(95% CI，1.37-3.66)和2.83(95% CI，1.57-5.12)相關(guān)，全面調(diào)整上述協(xié)變量。

最后，在匯總隊(duì)列中，我們測試了這個(gè)閾值驅(qū)動(dòng)的 PC 計(jì)數(shù)的增量值。與具有臨床風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測因子的模型相比，預(yù)測死亡的 C 統(tǒng)計(jì)量隨著 CD34 + 細(xì)胞的添加而略有增加(Δ0.020，p = 0.07) ，但隨著 CD34 +/CD133 + 細(xì)胞的添加而更顯著(Δ0.028，p = 0.04)。與單獨(dú)的臨床模型相比，包括 CD34 +/CD133 + 細(xì)胞計(jì)數(shù)的模型的無類別 NRI 和 IDI 指標(biāo)也是顯著的(表5)。

討論

在迄今為止對循環(huán) PC 表型化的 CAD 患者進(jìn)行的最大的前瞻性研究中，我們證明，以 CD34 + 單核細(xì)胞為特征的低數(shù)量的血液造血 PC 可預(yù)測全因死亡的事件風(fēng)險(xiǎn)，獨(dú)立于其他風(fēng)險(xiǎn)決定因素。

其中，CD34 + 細(xì)胞和共表達(dá) CD133的細(xì)胞似乎與不良事件最為密切相關(guān)，因此在總共超過900名受試者的兩個(gè)連續(xù)隊(duì)列中，與這些細(xì)胞計(jì)數(shù)的最高三分位數(shù)相比，最低的死亡風(fēng)險(xiǎn) > 2.5倍。此外，CD34 +/CD133 + 細(xì)胞計(jì)數(shù)使用風(fēng)險(xiǎn)辨別指數(shù)增加了臨床危險(xiǎn)因素的增量預(yù)測值。

基質(zhì)衍生因子 -1受體 CXCR4是 PC 歸巢所必需的，并且鑒定具有更大遷移和新血管形成能力的細(xì)胞。然而，共表達(dá) CXCR4的 CD34 + 細(xì)胞與死亡之間的關(guān)聯(lián)適度且不如 CD34 + 或 CD34 +/CD133 + 群體。這可能部分是因?yàn)?CXCR4只在一個(gè)群體中被枚舉。

此外，與其他研究相反，我們發(fā)現(xiàn)共表達(dá) VEGFR2的 CD34 + 細(xì)胞與任一隊(duì)列中的結(jié)果之間沒有關(guān)聯(lián)，可能是因?yàn)樗鼈兊念l率非常低，測量的重復(fù)性差。相比之下，總 CD34 + 細(xì)胞和 CD34 +/CD133 + 子集的定量更實(shí)用和可重復(fù)。

減少的循環(huán) PC 與死亡相關(guān)的機(jī)制是未知的，但基于實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可能代表由于內(nèi)源性再生和修復(fù)能力受損而增加的風(fēng)險(xiǎn)。雖然 CD34 + 細(xì)胞是異質(zhì)的，但它們富含表達(dá)內(nèi)皮標(biāo)記基因的細(xì)胞，并在體外和體內(nèi)形成內(nèi)皮結(jié)構(gòu)[1,22]。此外，在選定的 CD34-細(xì)胞中缺乏促血管生成活性。在我們的研究中，血液中感興趣的 CD34 + 細(xì)胞主要是(> 95%) CD45med + ，因此主要代表造血譜系的細(xì)胞。值得注意的是，表達(dá)被認(rèn)為是早期或未成熟 PC 的 CD133 + 表位的 CD34 + 細(xì)胞比沒有 CD133表位的 CD34 + 細(xì)胞更精確地反映風(fēng)險(xiǎn)，與風(fēng)險(xiǎn)無關(guān)。雖然在 CD34 +/CD133 + 細(xì)胞上 VEGFR2受體的額外表達(dá)通常被認(rèn)為是定義富含內(nèi)皮 PC 的子集，但這仍然是一個(gè)有爭議的主題8,23-26

三個(gè)較小的研究先前已經(jīng)報(bào)道了不同 PC 亞群與心血管結(jié)局之間的關(guān)聯(lián)。在120名患有和不患有 CAD 的受試者中，發(fā)現(xiàn) CD34 +/VEGFR2 + 細(xì)胞計(jì)數(shù)和不良事件之間僅有11個(gè)事件。這一點(diǎn)在一項(xiàng)更大規(guī)模的研究中得到了證實(shí)，這項(xiàng)研究主要涉及血運(yùn)重建事件。最后，在富含代謝癥候群的受試者中，低 CD34 + 細(xì)胞計(jì)數(shù)的受試者心血管事件更為頻繁，薈萃分析證實(shí)了這一發(fā)現(xiàn)。這些研究通常較小，更具異質(zhì)性，沒有列舉 CD45med + 亞群，評估主要為血運(yùn)重建或住院的心血管事件，并且沒有進(jìn)行區(qū)分度分析。相比之下，我們的研究代表了使用流式細(xì)胞術(shù)(在采集時(shí))和前瞻性死亡率隨訪的 PC 的最大隊(duì)列表型。此外，我們的兩個(gè)隊(duì)列策略，分開的時(shí)間和方法，增加了我們的發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步的信心。重要的是，與以前的研究相比，我們的發(fā)現(xiàn)對于 CD34 + 和 CD34 +/CD133 + 細(xì)胞亞群是最強(qiáng)的，而對于共表達(dá) VEGFR2的細(xì)胞則不是。

我們和其他人以前已經(jīng)證明，流式細(xì)胞術(shù)或細(xì)胞培養(yǎng)中較低的循環(huán)擁有屬性計(jì)數(shù)與內(nèi)皮功能障礙和確定的危險(xiǎn)因素有關(guān)。在橫斷面分析中，我們證實(shí)了較低的 PC 計(jì)數(shù)與高齡和腎功能受損之間的關(guān)聯(lián)。我們還發(fā)現(xiàn)，較高的計(jì)數(shù)與男性性別，較高的 BMI 和較低的 HDL 有關(guān)。雖然急性和慢性缺血可能影響 PC 的動(dòng)員，但我們沒有觀察到在入學(xué)時(shí)或之前的條件如 PAD 或中風(fēng)時(shí)與心肌梗死有任何關(guān)聯(lián)或相互作用

我們研究的優(yōu)勢包括(1)大型前瞻性單中心研究設(shè)計(jì)以限制異質(zhì)性，(2)使用常用的高通量技術(shù)(流式細(xì)胞術(shù))由同一技術(shù)團(tuán)隊(duì)定量 PC，(3)2個(gè)隊(duì)列分析策略，以及(4)選擇 CD34 + 細(xì)胞亞群的探索。兩個(gè)隊(duì)列之間方法上的變化可能被認(rèn)為是一種限制，但也是一種優(yōu)勢，因?yàn)檫@些關(guān)聯(lián)在不同的測量設(shè)置下得到了充分復(fù)制。我們研究的局限性在于，我們只檢查了接受血管造影的高危人群，因此我們的結(jié)論可能不適用于一般人群。缺乏對細(xì)胞功能的縱向測量或評估也限制了對 CD34 + 細(xì)胞及其對健康的長期影響可能得出的結(jié)論。最后，這種分析的觀察性質(zhì)并不意味著因果關(guān)系，因此需要進(jìn)一步的直接影響 PC 水平的介入研究。研究表明，改善中間表型，如內(nèi)皮功能與 PC 動(dòng)員表明，這可能是可行的

我們的研究結(jié)果有重要的意義: (1)富含骨髓來源的造血和內(nèi)皮祖細(xì)胞的 CD34 + 細(xì)胞可能代表全球再生潛力的指標(biāo)，這一觀點(diǎn)得到了在急性肺損傷，腎衰竭和中風(fēng)的情況下 PC 數(shù)量較少的患者預(yù)后較差的研究結(jié)果的支持;33-35(2)這些細(xì)胞亞型的定量可用于鑒定那些具有隨后事件最大風(fēng)險(xiǎn)的冠心病患者，作為增強(qiáng)的風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測模型的一部分，包括人口統(tǒng)計(jì)學(xué)，臨床特征和其他新型生物標(biāo)志物; (3)此外，CD34 + 細(xì)胞也可能代表潛在的可修改的風(fēng)險(xiǎn)因素，因此是治療干預(yù)的新靶點(diǎn)，目前正在積極研究的可能性;36(4) CD34 + 或 CD34 +/CD133 + 細(xì)胞計(jì)數(shù)可以同樣有效地用作再生能力的“生物標(biāo)志物”; 和(5)這些發(fā)現(xiàn)可以通過支持靶向選擇和收獲這些特定的 PC 亞群來影響基于細(xì)胞的治療。

總之，我們已經(jīng)證明較少的循環(huán) PC，主要鑒定為 CD34 + 單核細(xì)胞與高心血管風(fēng)險(xiǎn)個(gè)體的死亡風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。CD34 + 和 CD34 +/CD133 + 子集可預(yù)測未來的不良事件，并可能代表內(nèi)源性再生能力。這些發(fā)現(xiàn)對細(xì)胞療法的生物學(xué)理解、風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測和細(xì)胞選擇有一定的意義。

參考

Patel RS, Li Q, Ghasemzadeh N, Eapen DJ, Moss LD, Janjua AU, Manocha P, Kassem HA, Veledar E, Samady H, Taylor WR, Zafari AM, Sperling L, Vaccarino V, Waller EK, Quyyumi AA. Circulating CD34+ progenitor cells and risk of mortality in a population with coronary artery disease. Circ Res. 2015 Jan 16;116(2):289-297. doi: 10.1161/CIRCRESAHA.116.304187. Epub 2014 Oct 16. PMID: 25323857; PMCID: PMC4715427.

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