1.質(zhì)粒DNA或混和液中含有血清。 對策：用無血清培養(yǎng)基或Opti-MEM培養(yǎng)基。

2.質(zhì)粒DNA和轉(zhuǎn)染試劑的比率不是最優(yōu) 對策：對大多數(shù)細(xì)胞而言，質(zhì)粒DNA和轉(zhuǎn)染試劑的比例為1:2-1:3，一般要做優(yōu)化實驗，比例從1:0.5-1:5 逐一檢測。3.質(zhì)粒DNA 已部分降解或質(zhì)量不夠好 對策：用好的質(zhì)粒純化試劑確保質(zhì)粒DNA質(zhì)量，正確保存，確保質(zhì)粒DNA不被降解。

4.轉(zhuǎn)染試劑選擇不當(dāng)。建議選用效率高，毒性低的轉(zhuǎn)染試劑

5.細(xì)胞密度不是最優(yōu)，優(yōu)化細(xì)胞密度。

6.混和加入細(xì)胞中不含血清。在轉(zhuǎn)染過程中使用含有血清的培養(yǎng)基，細(xì)胞狀態(tài)良好有利于轉(zhuǎn)染效率的提高。

7 .轉(zhuǎn)染體系中含有抑制物 轉(zhuǎn)染體系中不應(yīng)包含EDTA、檸檬酸、磷酸鹽、RPMI、硫酸軟骨素、透明質(zhì)酸酶、硫酸葡萄糖聚酶及硫酸化蛋白聚糖

8. 檢驗轉(zhuǎn)染效率及表達(dá)的方法有問題 使用報告基因來檢測轉(zhuǎn)染效率，報告基因使你確定目標(biāo)基因的表達(dá)

9. 啟動子及增強子不被包裝細(xì)胞識別。確認(rèn)你構(gòu)建質(zhì)粒上的啟動子增強子與靶細(xì)胞相容。

10.轉(zhuǎn)染試劑保存不正確，轉(zhuǎn)染試劑保存在4℃。

附加：如果傳染的試劑中有抗生素，抗生素會影響轉(zhuǎn)染效果嗎？

我們這邊的建議是：能不加就不加，在理論上抗生素進(jìn)不到細(xì)胞內(nèi)，但是在轉(zhuǎn)染試劑的作用下，細(xì)胞的通透性增加，抗生素可能進(jìn)到細(xì)胞內(nèi)，對實驗結(jié)果完成影響。

EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑