目前，研究蛋白質(zhì)和多肽的二級(jí)和高級(jí)結(jié)構(gòu)的方法主要有X射線晶體衍射、核磁共振和圓二色譜等。前兩種方法比較復(fù)雜，受多種因素影響，分析比較困難。相對(duì)而言，圓二色譜是一種比較簡(jiǎn)單有效的技術(shù)，也是研究蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的主要手段之一。

?

圓二色譜儀的工作原理是利用蛋白質(zhì)的圓二色性和不對(duì)稱分子對(duì)左右圓偏振光的不同吸收來分析蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)或多肽中的主要光活性基團(tuán)是肽鍵、芳香族氨基酸殘基和二硫鍵。當(dāng)平面圓偏振光的吸收不同時(shí)，會(huì)產(chǎn)生吸收差異。由于這種吸收差異的存在，導(dǎo)致偏振光矢量的振幅差異，圓偏振光變成橢圓偏振光，即蛋白質(zhì)的圓二色性。通過圓二色譜掃描儀可以在一定程度上分析蛋白質(zhì)和多肽樣品的二級(jí)結(jié)構(gòu)和高級(jí)結(jié)構(gòu)。

?

要測(cè)到準(zhǔn)確的蛋白質(zhì)CD譜，要同時(shí)看一看吸收譜，吸收值最好在0.5-2.0之間，這是最主要的參照標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)濃度沒有必然的規(guī)定，常見的經(jīng)驗(yàn)值為濃度在0.1-1.0 mg/ml?之間， 也可以更低或更高。

?

技術(shù)指標(biāo)

?

圓二色譜分析的供試品，大多數(shù)情況下的蛋白質(zhì)和多肽。蛋白質(zhì)的精確濃度是計(jì)算樣品二級(jí)結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵，一般要求樣品濃度為0.2μg/μl，濃度過高，測(cè)試時(shí)信號(hào)不好，需稀釋，樣品純度要在90%以上，不要添加任何保護(hù)劑或其它物質(zhì)，樣品中應(yīng)避免含有光吸收的雜質(zhì)，緩沖劑和溶劑在配制溶液前最好做單獨(dú)的檢查，透明性極好的磷酸鹽可用作緩沖體系。

?

圓二色譜在遠(yuǎn)紫外區(qū)的掃描圖譜，反映的是蛋白質(zhì)肽鍵的排布信息，計(jì)算所得的是蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)比例，即α-螺旋、β-折疊、轉(zhuǎn)角和不規(guī)則卷曲的比例。

?

圓二色譜在近紫外區(qū)的掃描圖譜，反映的是蛋白質(zhì)側(cè)鏈生色基團(tuán)色氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸等殘基的排布信息和二硫鍵微環(huán)境的變化。

?

圓二色譜答疑

?

1) 圓二色譜的解讀。

?

圓二色譜技術(shù)能快速、簡(jiǎn)單、較準(zhǔn)確地研究溶液中蛋白質(zhì)和多肽的構(gòu)象，并且運(yùn)用斷流、電化學(xué)等附加裝置，結(jié)合溫度、時(shí)間等變化參數(shù)，已經(jīng)廣泛用于了解蛋白質(zhì)-配體的相互作用，監(jiān)測(cè)蛋白質(zhì)分子在外界條件誘導(dǎo)下發(fā)生的構(gòu)象變化，探討蛋白質(zhì)折疊、失活過程中的熱力學(xué)與動(dòng)力學(xué)等多方面的研究。

?

2) 圓二色譜分析的軟件介紹。

?

圓二色譜在遠(yuǎn)紫外區(qū)的掃描圖譜，反映的是蛋白質(zhì)肽鍵的排布信息，計(jì)算所得的是蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)比例；圓二色譜在近紫外區(qū)的掃描圖譜，反映的是蛋白質(zhì)側(cè)鏈生色基團(tuán)色氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸等殘基的排布信息和二硫鍵微環(huán)境的變化。

?

目前用于拆分和估算的軟件不下十幾種，有幾種計(jì)算模式被研究者廣泛認(rèn)可。然而，由于不同計(jì)算模式的理論基礎(chǔ)不同，計(jì)算出的蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)比例并不完全相同，但大多數(shù)軟件都是對(duì)α-螺旋的估計(jì)還是比較準(zhǔn)確的。Apt使用jwsse32軟件對(duì)樣品和對(duì)照品的二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行擬合和計(jì)算，參考標(biāo)準(zhǔn)曲線采用軟件提供的標(biāo)準(zhǔn)α-螺旋（α-螺旋）、β-β折疊片、轉(zhuǎn)角（turn）和不規(guī)則卷曲（random coil）曲線。由于預(yù)測(cè)結(jié)構(gòu)可能存在誤差，僅供參考。

?

免責(zé)聲明：文章整合自網(wǎng)絡(luò)，因內(nèi)容龐雜無法聯(lián)系到全部作者，如有侵權(quán)，請(qǐng)聯(lián)系刪除，我們會(huì)在第一時(shí)間予以答復(fù)，萬分感謝。

關(guān)于圓二色譜測(cè)試，今天就分享到這里。如果內(nèi)容對(duì)你有幫助，希望大家不要吝嗇點(diǎn)個(gè)贊哦，我們會(huì)繼續(xù)給大家輸出更多優(yōu)質(zhì)內(nèi)容~

最后，祝大家科研順利！【科學(xué)指南針?唯理計(jì)算】唯理計(jì)算大咖講座有限元專場(chǎng)直播第一期！特邀首席專家陳教授，分享應(yīng)用案例&行業(yè)發(fā)展趨勢(shì)，聚焦前沿有限元材料，助攻頂刊！來直播間聽課解鎖熱門vip會(huì)員卡“”聽學(xué)抽用”一鍵到位！快掃碼來參加吧！