超級(jí)核酸酶

產(chǎn)品貨號(hào)：FrdE00004

儲(chǔ)存溫度：2-8℃

來(lái)源：E.coli

1、產(chǎn)品簡(jiǎn)介

超級(jí)核酸酶(Benzonase Nuclease)是來(lái)源于Serratia Marcescens，經(jīng)過(guò)基因工程

改造的核酸酶。它能夠在非常廣泛的條件下(6M urea，0.1 M Guanidine HC1 0.4%Triton

X-100，0.1%SDS，1 mM EDTA，1 mM PMSF)，降解所有形式的(雙鏈，單鏈，線狀，環(huán)狀)DNA和RNA。它將核酸完全消化成3-8個(gè)堿基長(zhǎng)度的5一單磷酸寡核苷酸。超級(jí)核酸酶適用于去除蛋白質(zhì)產(chǎn)品中的污染，符合FDA關(guān)于核酸污染去除的規(guī)程。

本產(chǎn)品可以與多種細(xì)胞細(xì)菌裂解液配合使用,去除粗提物中的核酸，降低溶液粘性，提高蛋白質(zhì)產(chǎn)量。本公司超級(jí)核酸酶經(jīng)特殊工藝表達(dá)純化，無(wú)蛋白酶、內(nèi)毒素污染，沒(méi)有標(biāo)簽方便下游實(shí)驗(yàn)操作。

表1.超級(jí)核酸酶產(chǎn)品性能。

濃度

1mg/ml

酶活

＞25kU/mg

最適合酶活pH

8.0-9.0(可操作范圍6.0-9.0）

最適酶活溫

37°C （溫度范圍0-37°C）

蛋白酶活

無(wú)

輔助因子

5-10mM Mg?2+

儲(chǔ)存緩沖液

20mM ?Tris, 20mM NaC|， 2mM,Mgcl2,10%Glycerol,pH8.0，

儲(chǔ)存溫度

﹣20℃，避免反復(fù)凍融

1.2酶活定義

37°C，pH 8.0反應(yīng)條件下，2.625ml的反應(yīng)體積，在30分鐘內(nèi)使·A260值降低1.0(相

當(dāng)于完全消化37 ug鮭魚(yú)精DNA)的酶量定義為一個(gè)活性單位(U)。

1.3產(chǎn)品應(yīng)用

1)去除核酸污染:在蛋白純化時(shí)與細(xì)胞裂解液配合，可有效降低樣品黏度，利于下游操作;

2)降解核酸，利于不可溶蛋白復(fù)性前高質(zhì)量包涵體的制備;

3)有效去除帶負(fù)電荷的核酸對(duì)蛋白樣品分離和檢測(cè)的影響;

4)疫苗和病毒樣品制備過(guò)程中DNA污染的去除。

5)減少存放的外周血單細(xì)胞(PBMC)的結(jié)塊現(xiàn)象。

6)用于對(duì)任何蛋白樣品結(jié)合的核酸的預(yù)處理，提高蛋白在2D凝膠電泳中的分辨率。

2.操作步驟

2.1大腸桿菌或者其他細(xì)菌樣本處理

細(xì)菌離心收集后，用10倍體積的TBS緩沖液重懸，菌體破碎后，每毫升菌體裂解液

加入1-2微升超級(jí)核酸酶(若添加終濃度為5-10mM的Mg2+，則效果更佳)，室溫孵育

30分鐘，收集裂解液，離心取上清即可進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。

2.2細(xì)胞樣本處理

1)貼壁細(xì)胞去除培養(yǎng)基，用PBS洗后，100微升RIPA裂解液(或其他哺乳動(dòng)物細(xì)胞裂解

液)加1-5微升超級(jí)核酸酶，室溫孵育30分鐘，收集裂解液，離心取上清即可進(jìn)行下游實(shí)

驗(yàn)。

2)懸浮細(xì)胞離心收集后，在離心管中加100微升RIPA裂解液(或其他哺乳動(dòng)物細(xì)胞裂解

液)加1-5微升超級(jí)核酸酶，室溫孵育30分鐘，收集裂解液，離心取上清即可進(jìn)行下游實(shí)

驗(yàn)。

2.3組織樣本處理

將30-100毫克動(dòng)物或者植物組織研磨充分后，加入100-200微升裂解液，同時(shí)加入

加1-5微升超級(jí)核酸酶，室溫孵育30分鐘，收集裂解液，離心取上清即可進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。

3.注意事項(xiàng)

1)避免使用磷酸鹽緩沖液。

2)含大量蛋白、細(xì)胞壁、其它鹽分的粗制品，對(duì)該酶活性有部分抑制作用，使用時(shí)需要增加

酶的用量。

3)超級(jí)核酸酶有超強(qiáng)的試劑兼容性如:6M urea，0.1 M Guanidine HCl，0.4%Triton X-100，

0.1%SDS，1 mM EDTA，1 mM PMSF，100mM DTT，當(dāng)超過(guò)該濃度時(shí)核酸酶活性會(huì)降低，可通過(guò)增加核酸酶量使活性得到補(bǔ)償。

*本試劑僅供實(shí)驗(yàn)室研究使用