抗酸染色的原理和程序：抗酸染色是細(xì)菌學(xué)中另一種廣泛使用的鑒別染色方法。? 一些細(xì)菌抵抗酸和酒精的脫色，因此它們被稱為抗酸生物。 酸-醇（3% HCl 95% 乙醇）是一種非常強(qiáng)效的脫色劑。 這種染色技術(shù)將細(xì)菌分為兩組。 (1) 耐酸和 (2) 非耐酸。 該程序廣泛用于結(jié)核分枝桿菌和麻風(fēng)分枝桿菌的診斷。 某些分枝桿菌和某些諾卡氏菌屬的耐酸性與其高脂質(zhì)含量 (60% w/w) 相關(guān)。 由于細(xì)胞壁的脂質(zhì)含量高，抗酸細(xì)胞對染料的滲透性相對較低，因此難以染色。 對于這些細(xì)菌的染色，使用作為化學(xué)增強(qiáng)劑的 5% 苯酚水溶液可促進(jìn)主要染料的滲透。 還使用熱量作為物理增強(qiáng)器。 這些細(xì)胞一旦被染色，就很難用酸和酒精脫色。

在抗酸染色中，使用了三種不同的試劑或染色劑。

1. 原染（石炭酸品紅）：

石炭酸品紅是一種酚類染料，可溶于構(gòu)成分枝桿菌細(xì)胞壁主要部分的類脂物質(zhì)，可滲透并保留紅色染料。 通過施加熱量來增加滲透，這會驅(qū)動石炭酸品紅穿過類脂壁并進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)。 應(yīng)用初級染色后，所有細(xì)胞都呈紅色。

2、脫色劑（酸-醇或20%H2SO4）：

涂片在脫色前冷卻，使蠟狀細(xì)胞物質(zhì)硬化。 在應(yīng)用脫色劑時，抗酸細(xì)胞表現(xiàn)出抗脫色性。 與脫色試劑相比，初級染料更易溶于細(xì)胞蠟。 因此，分枝桿菌會保留原色，但對于缺乏細(xì)胞蠟的非耐酸細(xì)菌而言，情況并非如此。 在脫色過程中很容易去除主要染色劑，觀察到非耐酸細(xì)胞為無色。

3. 復(fù)染（亞甲藍(lán)或孔雀石綠）：

非抗酸細(xì)菌吸收復(fù)染液并呈現(xiàn)藍(lán)色或綠色，而抗酸細(xì)胞則保留原染液的紅色。

孢子染色技術(shù)用于檢測攜帶孢子的細(xì)菌和孢子類型。 孢子不易被原染劑（孔雀石綠）染色。 因此，涂片被加熱以染色孢子。 一旦孢子接受了孔雀石綠，就不能用自來水脫色。 營養(yǎng)細(xì)胞很容易被自來水脫色并進(jìn)行復(fù)染并呈現(xiàn)紅色（番紅）。 這種方法是用蒸汽加熱代替直接加熱的改進(jìn)方法。 多納法也用于孢子染色，其中石炭酸品紅用作主要染色劑。 將帶有染色劑的載玻片加熱 5 至 10 分鐘后，清洗并進(jìn)行負(fù)染色。

膠囊染色用于檢測細(xì)胞周圍膠囊的存在。 它可以通過使用陽性和陰性染色技術(shù)來進(jìn)行。 由于膠囊的非離子性質(zhì)，它對染料的親和力非常低。 在陽性染色中，使用結(jié)晶紫對細(xì)菌細(xì)胞進(jìn)行染色。 滲透壓差異是通過應(yīng)用硫酸銅 (20%) 溶液產(chǎn)生的，這會導(dǎo)致染色劑向細(xì)胞外表面擴(kuò)散。 在去除硫酸銅溶液并干燥載玻片時，一些染色劑在擴(kuò)散過程中沒有穿過包膜周圍。 這種染色保留在囊層中，相對于深紫色細(xì)胞呈淺紫色。 膠囊也很容易通過負(fù)染色技術(shù)證明。 當(dāng)應(yīng)用染色溶液時，它會染色細(xì)胞，并且在應(yīng)用苯胺黑背景時被染色，使膠囊無色。