一、使用LNP-B0芯片按照Moderna或者Pfizer的公開配方制備mRNA-LNP，DLS測量出現(xiàn)兩個峰，一個小于100 nm，另外一個峰大于1000 nm的峰，并且PDI大于0.2以上，應(yīng)該如何處理？

答：出現(xiàn)這種情況一般有三個原因：

1． 進(jìn)行DLS測量時測量杯壁上有劃痕，對于多次反復(fù)重復(fù)使用，并反復(fù)用吸水紙擦拭的測量杯，該現(xiàn)象更加明顯。當(dāng)激光打在測量杯表面時，測量杯表面會發(fā)生激光散射，造成測量有大顆粒的假象。

2． 總流速太快，水和乙醇高速混合時會有氣泡產(chǎn)生，測量時溶液中有微氣泡殘余。

3． 30倍稀釋后的LNP粒子濃度太低，背景信號占比比較高，造成PDI過大。

處理方法：

1. 一般不需要做額外處理，只要小于100 nm的峰形正常，經(jīng)過超濾濃縮后的LNP重新測量，大于1000 nn的峰基本上就會消失，PDI會降低到0.1左右，不會影響后續(xù)實驗。

2. 如果該情況繼續(xù)出現(xiàn)的話，降低總流速到3-4 ml/min，觀察是否有改善。

二、 制備的LNP粒徑和PDI均比較正常，但是轉(zhuǎn)染細(xì)胞后效率很差，應(yīng)該如何處理？

答：一般使用包含GFP mRNA的LNP轉(zhuǎn)染細(xì)胞后兩天內(nèi)即可觀察到明顯的熒光，以96孔板為例，單孔轉(zhuǎn)染對應(yīng)1 ug mRNA的LNP（最低可降低到0.1 ug）， 轉(zhuǎn)染效率普遍在70%以上，如果沒有觀察到明顯的熒光，建議轉(zhuǎn)染細(xì)胞時使用無血清培養(yǎng)基。加入血清會大大降低轉(zhuǎn)染效率。

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