shotgun和TMT
Shotgun鳥槍法蛋白質(zhì)組學(xué)是一種自下而上的蛋白質(zhì)組學(xué)分析策略,這種分析策略將完整蛋白質(zhì)酶解消化為小分子肽段,通過液相色譜進(jìn)行分離后進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜分析,根據(jù)質(zhì)譜數(shù)據(jù)信息如肽段母離子的質(zhì)荷比(m/z)等結(jié)合生物信息學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,以實(shí)現(xiàn)蛋白/多肽序列以及含量分析等。
TMT串聯(lián)質(zhì)量標(biāo)簽是一種典型的Shotgun基于鳥槍法的蛋白質(zhì)標(biāo)記定量技術(shù)。同位素標(biāo)記包括用合成的含有輕或重同位素的試劑化學(xué)修飾靶肽,由于這些標(biāo)記的化學(xué)性質(zhì)相同,但質(zhì)量不同,因此可以在質(zhì)譜中檢測到質(zhì)量差異,從而區(qū)分混合樣品中的實(shí)驗(yàn)組和對照組。TMT涉及多個(gè)同位素化學(xué)基團(tuán)的附著,這些基團(tuán)在MS/MS分析期間產(chǎn)生獨(dú)特的質(zhì)量離子。TMT由三個(gè)基團(tuán)組成:用于連接伯胺(或蛋白質(zhì)硫醇)的胺特異性反應(yīng)基團(tuán)、在MS分析過程中產(chǎn)生獨(dú)特質(zhì)量離子的報(bào)告基團(tuán)以及確保每個(gè)標(biāo)簽具有相同精確質(zhì)量的平衡基團(tuán)。在質(zhì)譜分析過程中,只有質(zhì)量報(bào)告基團(tuán)被切割和檢測,因此通過增加質(zhì)量報(bào)告基團(tuán)中的重同位素?cái)?shù)量,同時(shí)減少平衡基團(tuán)中的重同位素?cái)?shù)量,每個(gè)標(biāo)簽獲得唯一的報(bào)告離子質(zhì)量。該技術(shù)最多可以使用10個(gè)同位素標(biāo)簽來標(biāo)記多肽的氨基,允許同時(shí)對10種蛋白樣品進(jìn)行相對定量。常見基于鳥槍法的蛋白質(zhì)定量技術(shù)還包括Label Free、SILAC和iTRAQ等。
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合nanoLC-MS/MS納升色譜提供基于Shotgun鳥槍法的TMT定量蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)技術(shù)包裹,可同時(shí)對多種蛋白樣品進(jìn)行快速精確的定量鑒定。百泰派克生物科技還可根據(jù)需求提供定制化的蛋白質(zhì)定量方案,歡迎免費(fèi)咨詢。