一、細菌生化檢驗實驗介紹

石蕊既是pH指示劑又是氧化還原指示劑。在酸性溶液（pH 4.5）中為紅色，在堿性溶液（pH 8.3）中為藍色。介質(zhì)的自然色應為紫藍色（pH 6.8）。石蕊可以被某些細菌還原為無色基質(zhì)。

牛奶含有乳糖和三種主要蛋白質(zhì)，即酪蛋白，牛奶蛋白質(zhì)和乳球蛋白。

牛奶凝結(jié)主要是由含有凝乳酶的細菌引起的，凝乳酶可將酪蛋白轉(zhuǎn)化為酪蛋白，或由于乳糖發(fā)酵產(chǎn)生大量酸而導致酪蛋白沉淀。

一些細菌產(chǎn)生脂肪酶，脂肪酶可以分解牛奶中的脂肪，形成黃色透明液體。

一些細菌具有酪蛋白水解酶，可以催化酪蛋白水解，最終將其轉(zhuǎn)化為透明的液體酪蛋白沉淀。此過程稱為肽化。

二、細菌生化檢驗實驗試劑

序號 產(chǎn)品? ? ? ? ? ? ? ? ? 貨號? ? ? ? ? ? ? CAS號:備注

1. 脫脂奶粉? ? ? ? ? ? ?HC1218

2. 石蕊? ? ? ? ? ? ? ? ? ? HXH502289? 1393-92-6

3. 水1000.0 mL

4. 乙醇? ? ? ? ? ? ? ? ? ? JT26000? ? ? ? ?64-17-5

以上是實驗采用的試劑，請采用高品質(zhì)的范德生物的生化試劑。

脫脂奶粉100.0克，石蕊屬，水1000.0 mL

三、細菌生化檢驗實驗步驟

將奶粉完全溶解在水中，調(diào)節(jié)至pH 6.8，添加石蕊溶液，直到其呈現(xiàn)紫藍色（pH 6.8），分成試管，每管約5 mL。在115°C下滅菌10分鐘，迅速冷卻，然后放入冰箱中以備后用。

石蕊溶液的制備方法：稱取2.5 g石蕊，在碗中研磨，轉(zhuǎn)移到裝有40％乙醇水溶液的50 mL燒瓶中，煮沸1分鐘，靜置約10分鐘，吸取上清液并將其轉(zhuǎn)移到另一個在燒瓶中，向原始燒瓶中加入50 mL 40％的乙醇水溶液，煮沸1分鐘。

將上清液添加到之前的上清液中，將兩種上清液均勻混合，離心沉淀，將上清液倒入100 mL量筒中，用40％乙醇補足100 mL，并逐滴加入1 M鹽酸直至溶液呈紫色，這是2.5％的石蕊溶液。

95％乙醇42.1 mL加水至100 mL是40％乙醇溶液。

3.測試方法

接種受試細菌的18-24小時培養(yǎng)物。如果是厭氧菌，則在培養(yǎng)基試管中加入無菌鐵屑或指甲，并蓋上無菌凡士林，然后在36±1℃下培養(yǎng)。 -14天。

四、細菌生化檢驗實驗結(jié)果的判斷

1.粉紅色：將乳糖發(fā)酵產(chǎn)生酸；

2.紫色藍色：乳糖經(jīng)過發(fā)酵并保持其原始顏色；

3.藍色：堿性反應，乳糖發(fā)酵，細菌分解培養(yǎng)基中的含氮物質(zhì)產(chǎn)生堿性物質(zhì)；

4.白色：石蕊恢復了；

5.澄清：消化乳蛋白（蛋白糖化）；

6.凝塊會凝結(jié)：由于大量的酸產(chǎn)生，牛奶和雞蛋會凝結(jié)。

7.產(chǎn)氣：乳糖分解產(chǎn)生酸和氣體，強烈的發(fā)酵會破壞血凝塊。

如果沒有脫脂奶粉，則將新鮮的牛奶放在冰箱中過夜，去除奶油層，在流動的蒸汽中加熱和消毒脫脂奶1小時，冷卻至10攝氏度以下，用無菌紗布過濾，然后添加石蕊溶液直至熏衣草，分開試管并與以前一樣消毒。