隨著越來越多的生物制品（重組蛋白疫苗、Vero細(xì)胞疫苗、細(xì)胞治療/基因治療藥物等）進(jìn)入治療領(lǐng)域，生物制品的質(zhì)量控制也日趨嚴(yán)格，其中核酸殘留因其潛在的危害性，是各類質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)的重中之重。我國參照WHO、FDA和歐盟標(biāo)準(zhǔn)，在藥典中明確規(guī)定酵母、大腸桿菌表達(dá)的生物制品中DNA殘留量不超過10ng/劑量。我國2020年藥典將人用狂犬病疫苗（Vero細(xì)胞）DNA殘留標(biāo)準(zhǔn)更新為≤3ng/劑量。除了殘留量的規(guī)定，FDA、CDE發(fā)布的相關(guān)指導(dǎo)文件中建議，殘留的細(xì)胞宿主DNA片段不能超過一個功能基因的長度（約200bp）1，2。因此，在生物制品的生產(chǎn)工藝中必須有去除核酸殘留的步驟，確保生物制品的中的核酸殘留滿足相應(yīng)法規(guī)的要求。

近岸蛋白提供高品質(zhì)GMP級全能核酸酶（BenzoNuclease）及高性能配套全能核酸酶殘留檢測試劑盒（檢測范圍0.014-10ng/ml），靈敏度高，為生物制品解決核酸殘留困擾。

全能核酸酶是去除核酸殘留的利器

在核酸殘留去除工作中，難點是由于DNA帶有大量的電荷易與其他生物大分子結(jié)合從而產(chǎn)生聚集（吸附）、包裹作用而難以完全除去。傳統(tǒng)的方法均存在低含量核酸殘留去除不凈、工作量大耗時長的缺陷。全能核酸酶是一種來自于粘質(zhì)沙雷氏菌（Serratia marcescens），經(jīng)基因工程改造的核酸內(nèi)切酶，可降解雙鏈、單鏈、線狀、環(huán)狀的DNA和RNA，完全將核酸降解成3~5個堿基長度的5'-單磷酸寡核苷酸。目前已廣泛應(yīng)用于病毒載體疫苗、基因與細(xì)胞治療等企業(yè)的病毒純化工藝中。

生物制品領(lǐng)域迎空前發(fā)展機(jī)遇，供應(yīng)鏈協(xié)同需加強(qiáng)

2021年12月30日，國家藥監(jiān)局等8部門聯(lián)合印發(fā)《“十四五”國家藥品安全及促進(jìn)高質(zhì)量發(fā)展規(guī)劃》，提出支持藥品、醫(yī)療器械、疫苗等領(lǐng)域的創(chuàng)新發(fā)展，推動關(guān)鍵核心技術(shù)攻關(guān)，促推解決產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新發(fā)展的“卡脖子”問題，提升產(chǎn)業(yè)整體水平。

同日，工信部等9部門聯(lián)合印發(fā)《“十四五”醫(yī)藥工業(yè)發(fā)展規(guī)劃》，提出在疫苗領(lǐng)域，重點發(fā)展新型新冠病毒疫苗、皰疹疫苗、多價人乳頭瘤病毒（HPV）疫苗、多聯(lián)多價疫苗等產(chǎn)品。在其它領(lǐng)域，重點發(fā)展針對新靶點、新適應(yīng)癥的嵌合抗原受體?T?細(xì)胞（CAR-T）、嵌合抗原受體?NK?細(xì)胞（CAR-NK）等免疫細(xì)胞治療、干細(xì)胞治療、基因治療產(chǎn)品和特異性免疫球蛋白等。重點開發(fā)超大規(guī)模（≥1 萬升/罐）細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，雙功能抗體、抗體偶聯(lián)藥物、多肽偶聯(lián)藥物、新型重組蛋白疫苗、核酸疫苗、細(xì)胞治療和基因治療藥物等新型生物藥的產(chǎn)業(yè)化制備技術(shù)，生物藥新給藥方式和新型遞送技術(shù)，疫苗新佐劑。強(qiáng)調(diào)新型疫苗研發(fā)和產(chǎn)業(yè)化能力建設(shè)。緊跟疫苗技術(shù)發(fā)展趨勢，基于應(yīng)對新發(fā)、突發(fā)傳染病需求，支持建設(shè)新型病毒載體疫苗、脫氧核糖核酸（DNA）疫苗、信使核糖核酸（mRNA）疫苗、疫苗新佐劑和新型遞送系統(tǒng)等技術(shù)平臺，推動相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)和產(chǎn)業(yè)化。鼓勵疫苗生產(chǎn)企業(yè)開展國際認(rèn)證，按照國際疫苗采購要求生產(chǎn)、出口疫苗。

《“十四五”醫(yī)藥工業(yè)發(fā)展規(guī)劃》鼓勵疫苗生產(chǎn)企業(yè)和關(guān)鍵原輔料、耗材、設(shè)備企業(yè)加強(qiáng)協(xié)作，針對應(yīng)急狀態(tài)下可能出現(xiàn)的峰值需求，提高供應(yīng)鏈應(yīng)急適配能力。提高疫苗供應(yīng)鏈保障水平。支持疫苗企業(yè)和重要原輔料、耗材、生產(chǎn)設(shè)備、包裝材料企業(yè)協(xié)作，提高各類產(chǎn)品質(zhì)量技術(shù)水平。

目前全能核酸酶的應(yīng)用市場主要還是被國外企業(yè)占據(jù)，其價格高、供貨周期長，且受疫情和國際貿(mào)易政策影響，存在供應(yīng)中斷風(fēng)險。因此，生物制品生產(chǎn)企業(yè)需要將視線轉(zhuǎn)向國內(nèi)同類產(chǎn)品，這也符合目前國產(chǎn)供應(yīng)鏈建設(shè)的大趨勢。

近岸蛋白全能核酸酶質(zhì)優(yōu)價廉

近岸蛋白提供GMP條件下生產(chǎn)的BenzoNuclease全能核酸酶，無動物源性,?無氨芐青霉素，可高效降解單鏈、雙鏈、線性、環(huán)狀、超螺旋等任何形式的DNA及RNA。質(zhì)量、性能、供貨能力可靠，并已完成在FDA的藥物主文件（Drug?Master File, DMF）申報備案，滿足藥物申報的規(guī)范。

什么是全能核酸酶？

BenzoNuclease?是一種來自于粘質(zhì)沙雷氏菌（Serratia marcescens），經(jīng)基因工程改造的核酸內(nèi)切酶。BenzoNuclease可降解單鏈、雙鏈、線性、環(huán)狀、超螺旋等任何形式的DNA及RNA，將核酸完全降解成3~5個堿基長度的5'-單磷酸寡核苷酸。因其能高效降解任何形式的 DNA 和 RNA，又被稱為“全能核酸酶”。

無論在實驗室研究還是在工業(yè)級生產(chǎn)的過程中，BenzoNuclease是去除生物制品中所有形式DNA和RNA的一種有效工具酶。通過高效的核酸去除，可顯著提升后續(xù)實驗、生產(chǎn)的效果及產(chǎn)量，性能優(yōu)于其他核酸去除方法。

近岸蛋白全能核酸酶的應(yīng)用

去除疫苗類產(chǎn)品外源性核酸，降低核酸殘留毒性風(fēng)險，提高產(chǎn)品安全性，如病毒疫苗、溶瘤病毒、細(xì)胞和基因治療病毒載體的純化

降低細(xì)胞/細(xì)菌裂解時核酸釋放產(chǎn)生的黏度，縮短處理時間，提高病毒/蛋白產(chǎn)量

去除纏繞在顆粒（病毒、包涵體等）表面的核酸，利于顆粒的釋放和純化

ELISA、柱層析、二維電泳和印跡分析的樣品制備，經(jīng)核酸酶處理后可提高分辨率和回收率

用于預(yù)防細(xì)胞的結(jié)團(tuán)

……

近岸蛋白全能核酸酶嚴(yán)格的質(zhì)量控制及生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)

近岸蛋白全能核酸酶寬泛的反應(yīng)條件

近岸蛋白全能核酸酶優(yōu)異的性能

1、保存穩(wěn)定性以及凍融穩(wěn)定性

2、消化不同類型核酸

3、鈉離子、鉀離子的影響

4、Triton? X-100的影響

近岸蛋白全能核酸酶殘留檢測試劑盒性能脫穎而出

在使用核酸酶處理過的生物制品中，可能存在微量的核酸酶殘留，這些微量殘留會對后續(xù)生物制品的應(yīng)用造成一定的影響。生物制品中核酸酶的殘留量也是衡量生物制品質(zhì)量的重要指標(biāo)之一。

近岸蛋白開發(fā)的核酸酶殘留檢測試劑盒可以高靈敏度（0.014ng/ml）、檢測范圍0.014-10.00ng/ml, 特異性地檢測和定量分析樣品中的全能核酸酶殘留。

近岸蛋白產(chǎn)品信息：

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

GMP-1707

BenzoNuclease, GMP Grade

100KU/200KU/5000KU

PA018

BenzoNuclease ELISA Kit

96T

Q&A ?

在哪一步中加入 BenzoNuclease？

BenzoNuclease可直接加入至細(xì)胞/細(xì)菌裂解液中進(jìn)行作用。注意，若裂解液中不含Mg2+，需補(bǔ)加Mg2+至1-2mM。

當(dāng)反應(yīng)溫度低于 37℃時，如何保證 BenzoNuclease 的消化效果？

在體系固定的情況下，BenzoNuclease 的消化效果主要取決于酶用量、反應(yīng)溫度以及反應(yīng)時間，當(dāng)反應(yīng)溫度較低時，為避免過多的 BenzoNuclease 引起的殘留問題，更加推薦延長反應(yīng)時間來保證 BenzoNuclease 的消化效果。

BenzoNuclease 的抑制條件有哪些？

BenzoNuclease 可在較為寬泛的條件下保持活性，但 1-2mM Mg2+對其活性至關(guān)重要。

一般情況下，BenzoNuclease 的活性可被高鹽抑制，例如：> 500 mM 的一價陽離子（如 Na+、K+等）、>100 mM 的鹽酸胍（guanidine HCl）、> 100 mM 的磷酸鹽（phosphate）、> 100 mM 的硫酸銨（ammonium sulfate）等。此外，螯合劑也可通過螯合體系中的 Mg2+以達(dá)到抑制酶活的作用，通過加入更多的 Mg2+可恢復(fù) BenzoNuclease 的活性（1mM 的 EDTA 可部分抑制 BenzoNuclease 活性，5mM 的 EDTA 可使其活性喪失約 90%。

BenzoNuclease 與蛋白酶抑制劑可以兼容嗎？

可以。但需要注意，最好選擇不含 EDTA 的蛋白酶抑制劑（≥1mM 的 EDTA 可抑制 BenzoNucleased 的活性）。

如何去除 BenzoNuclease？

BenzoNuclease 融合了 6×His 標(biāo)簽，可通過鎳柱將其去除。此外，也可結(jié)合所生產(chǎn)產(chǎn)品本身的純化工藝對BenzoNuclease進(jìn)行去除，如通過 TFF（tangential flow filtration）、透析及色譜（IEX, SEC, HIC）、超濾等。

BenzoNuclease的應(yīng)用是否有專利限制？

無專利限制。

料液經(jīng)過BenzoNuclease處理后的核酸殘留使用什么方法檢測比較好？

推薦使用qPCR進(jìn)行檢測，qPCR方法的靈敏度和重復(fù)性較好，并且可定量，可以對核酸殘留有更加準(zhǔn)確的把握。

GMP-1707的儲存液中含有2mM MgCl2，加到樣品中之后，需要補(bǔ)加鎂離子嗎？

如果樣品溶液中不含鎂離子或者鎂離子濃度較低，建議補(bǔ)加鎂離子至全能核酸酶的最佳工作濃度（1-2mM）。

參考文件：

FDA《用于生產(chǎn)和傳染病適應(yīng)癥的病毒疫苗的細(xì)胞基質(zhì)和其他生物材料的特性和鑒定》；

CDE《基因治療產(chǎn)品藥學(xué)研究與評價技術(shù)指導(dǎo)原則》。