細(xì)胞培養(yǎng)有支原體污染怎么辦?
支原體是目前已知一類能在無(wú)生命培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖的最小的原核細(xì)胞微生物,分為兩個(gè)屬:一為支原體屬(Mycoplasma),有幾十個(gè)種;另一為脲原體屬(Ureaplasma),僅有一種。革蘭染色為陰性,但不易著色,一般用Giemsa染色,染成淡紫色。支原體在自然界分布廣泛,無(wú)細(xì)胞壁,直徑為0.1-0.3μm,且形態(tài)易變,極易通過(guò)除菌過(guò)濾器。
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大部分支原體繁殖速度比細(xì)菌慢,適宜生長(zhǎng)溫度為35℃,適合于偏堿條件下生存(pH7.6—8.0),對(duì)酸耐受性差,對(duì)75%乙醇、煤酚皂溶液敏感。對(duì)熱比較敏感在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中如果在顯微鏡下發(fā)現(xiàn)破碎的細(xì)胞很多,需要頻繁換液才能維持傳代培養(yǎng)的時(shí)候,即應(yīng)懷疑支原體污染。

細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的支原體污染是一個(gè)世界性難題。當(dāng)細(xì)胞(特別是傳代細(xì)胞)被支原體污染后,細(xì)胞內(nèi)的DNA、RNA及蛋白表達(dá)發(fā)生改變,而細(xì)胞的生長(zhǎng)率一般并未發(fā)生顯著的影響,因而細(xì)胞被支原體污染一般難以察覺(jué)。
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支原體污染的來(lái)源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染(某些支原體在人體是正常菌群)、培養(yǎng)基的污染、被污染細(xì)胞造成的交叉污染、實(shí)驗(yàn)器材的污染、制備細(xì)胞的原始組織或器官的污染,等等。
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支原體污染的嚴(yán)重性
(1)細(xì)胞外形可以沒(méi)有明顯的變化,支原體可以與細(xì)胞共存,污染后細(xì)胞液不會(huì)死亡,培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁;
(2)使用被支原體污染的細(xì)胞做實(shí)驗(yàn)會(huì)嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,因?yàn)橹гw會(huì)抑制細(xì)胞生長(zhǎng);導(dǎo)致染色體畸變;細(xì)胞膜抗原性改變;細(xì)胞復(fù)蘇后存活率降低等。
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(3)影響細(xì)胞的代謝和功能:培液中的精氨酸被支原體大量消耗,引起細(xì)胞蛋白質(zhì)、DNA、rRNA、mRNA的合成障礙;支原體活動(dòng)使培液成分發(fā)生改變(如發(fā)酵型支原體降解糖類產(chǎn)生酸性物質(zhì)),影響細(xì)胞代謝。
(4)培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞破碎較多,培養(yǎng)基pH變化明顯,需要頻繁更換新鮮培養(yǎng)基;
(5)細(xì)胞被支原體污染后會(huì)形成共生體系導(dǎo)致污染不斷擴(kuò)大。
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組織細(xì)胞培養(yǎng)工作中,可以從以下幾方面來(lái)預(yù)防支原體的污染:控制環(huán)境污染;嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)操作;細(xì)胞培養(yǎng)基和器材要保證無(wú)菌;在細(xì)胞培養(yǎng)基沖加入適量的抗生素。
抗生素主要用于消毒培養(yǎng)液,是培養(yǎng)過(guò)程中預(yù)防微生物污染的重要手段,也是微生物污染不嚴(yán)重時(shí)的“急救”方法。不同抗生素殺滅微生物不同,應(yīng)根據(jù)需要選擇。
根據(jù)相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室的管理經(jīng)驗(yàn),支原體污染的預(yù)防更為重要。有必要做好細(xì)胞房環(huán)境空間消毒。

說(shuō)細(xì)胞房空間消毒,且看比林科漢過(guò)氧化氫干霧消毒機(jī),全方位的整體細(xì)胞房微生物污染解決方案。比林科漢,是細(xì)胞房消毒的領(lǐng)路者,干霧技術(shù)十五年積累,中外結(jié)合,智能化全自動(dòng)消殺,數(shù)字化管理,可視化消毒過(guò)程,看得見(jiàn)的效果。
并且突破性解決了過(guò)氧化氫消毒有腐蝕性的普遍問(wèn)題,取代了VHP汽化過(guò)氧化氫、高溫閃蒸、電離等高濃度腐蝕性方式,以進(jìn)口比利時(shí)殺孢子劑為基礎(chǔ)的高活性殺菌低濃度即可達(dá)到的效果結(jié)合比林科漢干霧消毒機(jī),無(wú)與倫比的干霧擴(kuò)散和自由布朗運(yùn)動(dòng),無(wú)孔不入,不留任何污染的地方,實(shí)現(xiàn)更溫和的消殺手段和更好的材料兼容性。具有以下優(yōu)點(diǎn)。
1)整體房間快速殺滅支原體、衣原體,細(xì)菌,真菌,霉菌和病毒;
2)消殺全過(guò)程無(wú)需人員值守,自動(dòng)化工作,可在外面遠(yuǎn)程控制,動(dòng)態(tài)實(shí)時(shí)監(jiān)控消殺過(guò)程;
3)專業(yè)化的服務(wù)方案及GMP規(guī)范指導(dǎo),完善的效力驗(yàn)證文件及報(bào)告。