“核酸檢測”這一詞在今年深入人心，但究竟什么是核酸檢測，檢測原理，檢測目標(biāo)是什么？下面，我就簡單介紹一下核酸檢測。

在疫情期間，最早出現(xiàn)，也是目前最有效的新型冠狀病毒檢測方式便是核酸檢測

——PCR檢測（RT-PCR檢測）

PCR技術(shù)用于擴(kuò)增特定序列的DNA片段,也就是只能以DNA為模板復(fù)制出一模一樣的DNA

但眾所周知，冠狀病毒是單鏈RNA病毒，所以常規(guī)PCR不能擴(kuò)增。于是RT-PCR技術(shù)成為首選。

RT-PCR與常規(guī)的不同之處僅在于，在第一步要先將單鏈RNA轉(zhuǎn)cDNA（沒什么卵用的互補(bǔ)DNA），簡稱RT，再進(jìn)行PCR。RT與PCR步驟類似，但要求更加嚴(yán)格，此處不多贅述。

這里有朋友就會問了，你說了PCR是擴(kuò)增，但到底咋檢測核酸??？

這里舉出兩種最常規(guī)PCR檢測方法——熒光PCR

一、Taqman水解探針法

（雖然更精準(zhǔn)，但核酸檢測不用...太貴了，費(fèi)時(shí)間）

備注：圈R和圈Q連成的線段表示Taqman探針，探針斷裂（水解）發(fā)出熒光，反之無

? ? ? ? ? ?圈R表示報(bào)告基團(tuán)暨發(fā)出熒光的基團(tuán)，圈Q表示淬滅基團(tuán)暨阻止發(fā)出熒光的基團(tuán)，當(dāng)RQ連接時(shí)無熒光，反之有

首先，收集到樣本之后不能直接用PCR+探針檢測，因?yàn)闃颖緮?shù)量過少，所以要先常規(guī)擴(kuò)增。

PCR分為三步：變性、退火、延伸

變性：將雙螺旋結(jié)構(gòu)的DNA完全展開，并形成DNA單鏈

不解旋就如同下面的鋼繩一樣，根本無法復(fù)制。

退火：放入引物（一小段已知序列DNA，由于某些化學(xué)原因，DNA無法憑空形成一條鏈，具體原因可自行搜索，點(diǎn)個(gè)贊下期接著講DNA復(fù)制 :D ）

延伸：在DNA聚合酶的作用下，形成互補(bǔ)的一條完整的雙螺旋DNA

這樣，你就會得到雙倍的快樂DNA

以上步驟是一個(gè)循環(huán)，重復(fù)上述步驟幾十次才能達(dá)到檢測濃度。

檢測的步驟如圖所示，與常規(guī)PCR一樣，只不過加了一條探針（也就是一段與已知序列互補(bǔ)的DNA鏈）。

由于DNA復(fù)制單鏈的時(shí)候，復(fù)制過程必須完整，所以DNA聚合酶就會把在它前進(jìn)方向擋路的探針切碎水解，于是乎報(bào)告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離，報(bào)告基團(tuán)就發(fā)出了bulinbulin的亮光。

于是，檢測儀檢測到熒光就得出陽性，反之是陰性。

二、熒光染料法

（核酸檢測用這個(gè)，但是某些情況不如探針精準(zhǔn)...畢竟簡單快捷哇）

核酸熒光染料在游離時(shí)幾乎不發(fā)光，但與DNA結(jié)合后發(fā)光，由此可以檢測

在一般情況下，由于熒光染料自身的物理性質(zhì)，它能結(jié)合DNA某個(gè)特定的位置，但是并不能特異性識別DNA片段

說人話就是，只能檢測DNA的有無

以冠狀病毒核算檢測為例，在提取病毒的RNA的時(shí)候，若不小心摻雜了DNA，就有可能造成假陽性（雖然正常不會:D）

在確保了提取RNA的純度之后，通過前文提到的RT-PCR過程，通過檢測儀看bulinbulin的光強(qiáng)，就可以確定 陰性/陽性?了

end?

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