【目的】?學(xué)習(xí)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、非處理因素控制、全定量的實(shí)驗(yàn)處理、結(jié)果數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和表述等基本的科研方法。探究鈣離子、鉀離子、腎上腺素、乙酰膽堿對(duì)離體心臟的作用及機(jī)制。

1?材料

蟾蜍或蛙；任氏液，無(wú)鈣任氏液，氯化鈣，氯化鉀，腎上腺素，乙酰膽堿，普萘洛爾；張力換能器，ZL-620U醫(yī)學(xué)信號(hào)采集處理系統(tǒng)

2?方法

2.1?離體蟾蜍心臟標(biāo)本制備、系統(tǒng)連接及儀器參數(shù)設(shè)置。

2.2 實(shí)驗(yàn)觀察

2.2.1?任氏液灌流 用定容移液器向插管中加入1 mL任氏液，心搏曲線穩(wěn)定后記錄45s。用移液器向插管中加入30μl任氏液,心搏曲線穩(wěn)定后記錄45s數(shù)據(jù)。

2.2.2?無(wú)鈣任氏液灌流 把插管內(nèi)的任氏液全部更換為1 mL無(wú)鈣任氏液,心搏曲線穩(wěn)定后記錄45S。

2.2.3?高鈣任氏液灌流 用任氏液洗脫3次，加入1mL任氏液,待曲線穩(wěn)定45s后， 向灌流液中加0.045 mol/L CaCl2溶液20μl,心搏曲線穩(wěn)定后記錄45s。

2.2.4?高鉀任氏液灌流 用任氏液洗脫數(shù)次，曲線恢復(fù)穩(wěn)定后,加入1mL任氏液,待曲線穩(wěn)定45s后,在任氏液中加0.2 mol/L KCl溶液20μl，心搏曲線穩(wěn)定后記錄45s。

2.2.5?用新鮮任氏液換洗數(shù)次，加入1 mL任氏液,待曲線穩(wěn)定后記錄45s,在任氏液中加6×10-6?mol/L的acetylcholine (ACh)溶液15μl心搏曲線穩(wěn)定后記錄45s。再加2×10-4?mol/L atropine(Atr)15μl,心搏曲線穩(wěn)定后記錄45s。

2.2.6?用任氏液洗脫數(shù)次，曲線恢復(fù)穩(wěn)定后，加入1mL任氏液，待曲線穩(wěn)定45s后，在任氏液中加6×10-5?mol/L的adrenaline(Adr)溶液10μl,心搏曲線穩(wěn)定后記錄45s。

2.2.7?用任氏液洗脫數(shù)次,曲線恢復(fù)穩(wěn)定后，加入1 mL任氏液,待曲線穩(wěn)定45s后，在任氏液中加5×10-4?mol/L propranolol(Pro)溶液10μl,心搏曲線穩(wěn)定后記錄45s,再加入6×10-5?mol/L的Adr溶液10μl,心搏曲線穩(wěn)定后記錄45 s。

2.2.8?用任氏液洗脫數(shù)次，曲線恢復(fù)穩(wěn)定后,加入1mL任氏液，待曲線穩(wěn)定45s后，在任氏液中加0.2 mol/L乳酸溶液20μl,心搏曲線穩(wěn)定后記錄45s。

2.2.9?數(shù)據(jù)測(cè)量 測(cè)量各項(xiàng)處理前后的心率(heart rate,HR)、心臟舒張末期張力(end diastolie tension,EDT)、心臟收縮末期張力(End systolic tension，EST)。

2.3?統(tǒng)計(jì)方法 結(jié)果以?`x±s表示，統(tǒng)計(jì)采用Student t test方法。

3?結(jié)果

列各項(xiàng)處理前后心率、心室收縮末期張力和心室舒張末期張力原始數(shù)據(jù)表格和統(tǒng)計(jì)表(表1-1),對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和顯著性檢驗(yàn)。用文字、統(tǒng)計(jì)描述、統(tǒng)計(jì)結(jié)果逐一描述實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

表1-1 鈣離子、鉀離子、腎上腺素、乙酰膽堿對(duì)離體蟾蜍心臟的作用

*: P<0.05，* *: P<0.01,vs, EDT對(duì)照；#: P<0.05,##:P<0.01,vs. EST對(duì)照.

4?討論

論述各項(xiàng)處理引起心臟收縮、舒張、心率的變化機(jī)制。包括分析影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的主要干擾因素及改進(jìn)方法。

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