關(guān)鍵詞：細(xì)胞支原體污染 細(xì)胞培養(yǎng)支原體污染 ? ?細(xì)胞培養(yǎng)室支原體污染 ?細(xì)胞間支原體污染

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是一種體外增殖細(xì)胞的常規(guī)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，目前被廣泛用于教學(xué)、科研和臨床實(shí)驗(yàn)。污染控制是細(xì)胞培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵所在。引起培養(yǎng)細(xì)胞污染的微生物有細(xì)菌、霉菌、黑膠蟲(chóng)、支原體等，其中支原體是常見(jiàn)的污染物。

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支原體屬于缺乏細(xì)胞壁的原核微生物，直徑約0． 13 ～ 0． 18 μm，大小介于細(xì)菌和病毒之間，可透過(guò)一般濾膜( 0． 22 μm) ，因此在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞極易受到支原體污染。已有許多調(diào)查及研究顯示，世界范圍內(nèi)正在使用的細(xì)胞體系中支原體污染發(fā)生率達(dá)到30% ～ 60%。支原體是一種介于細(xì)菌與病毒之間的一種微小生物，可與細(xì)胞共存，是細(xì)胞培養(yǎng)較常見(jiàn)的一種污染物。

支原體感染發(fā)生后培養(yǎng)液清澈不渾濁，但pH 值變化明顯，培養(yǎng)液更換后幾小時(shí)內(nèi)變?yōu)樗嵝? 顏色變黃) 。污染初期，顯微鏡高倍鏡下觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞外形無(wú)明顯變化但有細(xì)小黑色顆粒，所以不容易被發(fā)現(xiàn)。雖然支原體可以與細(xì)胞長(zhǎng)期共存，且隨著細(xì)胞換液而緩解，但細(xì)胞遭受支原體污染后會(huì)抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，改變細(xì)胞的DNA /RNA 及蛋白表達(dá)，使細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率大大降低，并在污染后期引起細(xì)胞變形，對(duì)后續(xù)教學(xué)、科研產(chǎn)生嚴(yán)重影響。因此在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中進(jìn)行支原體檢測(cè)十分必要。

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細(xì)胞培養(yǎng)工作中，預(yù)防支原體污染尤為重要，本實(shí)驗(yàn)室長(zhǎng)期采用以下幾點(diǎn)來(lái)控制支原體污染。

( 1) 實(shí)驗(yàn)用品無(wú)菌處理: 所有用品都要經(jīng)過(guò)高溫消毒滅菌; 培養(yǎng)基、血清、胰酶等試劑均要經(jīng)過(guò)檢測(cè)確定無(wú)支原體污染后方可使用。

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( 2) 操作者遵守?zé)o菌室消毒規(guī)定: 由于正常人口腔帶有支原體，因此進(jìn)入無(wú)菌室一定要帶好口罩、帽子( 口罩必須罩住口鼻，帽子必須將頭發(fā)全遮在里面) ，鞋套，穿隔離衣，帶乳膠手套，并用75% 酒精擦拭手套表面。

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( 3) 操作過(guò)程嚴(yán)格按照無(wú)菌操作要求: 開(kāi)始要先用75%用精棉球擦拭瓶口，在火焰上燒灼瓶口，必須在火焰周圍無(wú)菌區(qū)內(nèi)打開(kāi)瓶口，瓶口要再次轉(zhuǎn)動(dòng)燒灼; 操作時(shí)盡量不要講話; 要常更換吸管，一旦發(fā)現(xiàn)吸管觸及手和其他物品應(yīng)棄去。所有操作過(guò)程要在距離超凈臺(tái)邊緣10 cm 以內(nèi)的無(wú)菌區(qū)域進(jìn)行。

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( 4) 定期進(jìn)行支原體污染檢測(cè): 對(duì)實(shí)驗(yàn)室中的培養(yǎng)物定期進(jìn)行支原體檢測(cè)，預(yù)防為主，不能等到發(fā)現(xiàn)有支原體污染時(shí)再進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)已經(jīng)污染支原體的培養(yǎng)物，滅活后棄之，嚴(yán)禁隨意傾倒、隨意丟棄。及時(shí)更換新的培養(yǎng)物，避免支原體污染。

( 5) 保持操作環(huán)境清潔: 無(wú)菌室的濾膜要定期清洗和更換; 每次進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)操作前，無(wú)菌室和超凈臺(tái)都要用徹底消毒滅菌; 每次實(shí)驗(yàn)完畢要用物表殺孢子劑擦拭操作臺(tái)，避免交叉污染; 定期對(duì)二氧化碳培養(yǎng)箱進(jìn)行消毒滅菌。

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筆者在多年的實(shí)踐過(guò)程中接觸到不少細(xì)胞支原體污染問(wèn)題，這里提供一款全新的細(xì)胞房支原體污染解決方案，供大家參考。

很多成功案例顯示：解決細(xì)胞間支原體污染，可以使用諾福支原體清除劑 + 比林科漢干霧過(guò)氧化氫滅菌設(shè)備。

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比林科漢過(guò)氧化氫干霧滅菌器，自身符合潔凈區(qū)凈化要求，不會(huì)帶入任何外源污染，同時(shí)高效根除潔凈室空間微生物，達(dá)到無(wú)菌凈化的目標(biāo)。先進(jìn)的霧化技術(shù)，可將支原體清除劑進(jìn)行霧化，霧化顆粒小于3微米，增效了空間擴(kuò)散均勻性，迅速將消毒液彌漫充滿整個(gè)密閉空間不放過(guò)每一處死角，高效去除支原體污染，滅菌效果堪稱空前絕后，其均勻性、無(wú)殘留很適合細(xì)胞房環(huán)境消毒及培養(yǎng)箱里面消毒，作用時(shí)間迅速，整個(gè)過(guò)程耗時(shí)短。

比林科漢過(guò)氧化氫消毒機(jī)配合諾福支原體清除劑可高效阻止真菌（和孢子），細(xì)菌（和孢子），支原體、噬菌體和病毒的生長(zhǎng)和污染。不含汞，甲醛，苯酚或酒精，無(wú)毒，可生物降解，環(huán)保，對(duì)人員友好。

面對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室苛刻的設(shè)備損耗條件，比林科漢具備過(guò)氧化氫消毒機(jī)優(yōu)秀的材料兼容性。對(duì)玻璃、不銹鋼、環(huán)氧樹(shù)脂等實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)材料腐蝕性小，是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室清潔消毒的更好選擇！

潤(rùn)聯(lián)致力于細(xì)胞培養(yǎng)行業(yè)多年，擁有完善的整套細(xì)胞房污染解決方案。專業(yè)解決細(xì)胞間支原體污染、真菌污染問(wèn)題、噬菌體污染問(wèn)題、黑膠蟲(chóng)污染、細(xì)菌污染、霉菌污染、螨蟲(chóng)污染、雜菌污染等問(wèn)題，治理經(jīng)驗(yàn)豐富，可提供上門消毒服務(wù)和指導(dǎo)。