Di-8-ANEPPS是一種快速響應的膜電位染料(探針)?，在質(zhì)膜的外葉中具有出色的保留能力。Di-8-ANEPPS 萘基苯乙烯基電壓敏感染料，它們的熒光激發(fā)和發(fā)射光譜會因電壓的變化而變化。Di-8-ANEPPS 熒光 :λex 498 nm, λem 713 nm in DMSO。

圖1.Di-8-ANEPPS結構式

電位探針應用?

由于 K+、Na+ 和 Cl- 濃度梯度（通過主動轉(zhuǎn)運過程維持），細胞質(zhì)膜的跨膜電位通常約為 -70 mV（內(nèi)部為負）。電位探針可提供檢測這些離子易位的間接方法。膜電位增加和減少分別被稱為膜超極化和去極化、在許多生理過程（包括神經(jīng)脈沖傳播、肌肉收縮、細胞信號轉(zhuǎn)導和離子通道門控）中發(fā)揮核心作用，電位探針是研究這些過程的重要工具。

Di-8-ANEPPSS檢測原理

Di-8-ANEPES用來測定快速膜電位改變。ANEP染料屬于快速反應膜電位染料類。它們的光學反應總夠快能檢測刺激細胞中瞬時跨膜電位的改變，能證明膜電勢依賴激發(fā)光譜的轉(zhuǎn)換。這個特性可以通過激發(fā)率的改變檢測膜電勢的改變。這些探針在水溶液中具有微弱的熒光，綁定于脂質(zhì)環(huán)境變成強烈的熒光（例如細胞膜）。由于它的磺化基團，Di-8-ANEPPS比其他ANEPP染料更少受細胞內(nèi)化的影響。

使用案例

圖2.Di-8-ANEPPS 染色的神經(jīng)節(jié)； 染料結合到外膜中，顯示出單個神經(jīng)元細胞體的輪廓。 B 說明了 A 中白色箭頭標記的神經(jīng)元響應兩次連續(xù)的 c48/80 應用（在跡線下方用條標記）的動作電位放電。跡線顯示三個記錄期間的響應，中間有 6 秒的非記錄期間 . 在這個神經(jīng)節(jié)中，19 個神經(jīng)元中有 17 個對 c48/80 有反應。 C PGP9.5 陽性培養(yǎng)的腸神經(jīng)元。 缺乏 c-kit 免疫反應性表明培養(yǎng)物中缺乏肥大細胞。 D 表明 c48/80 應用仍然會在分別使用 H1 和 H2 阻斷劑吡拉明 (1 μM) 和雷尼替丁 (10 μM) 的組合處理的培養(yǎng)物中引起尖峰。 E 顯示了豚鼠粘膜下神經(jīng)叢（左圖）和紅色 c-kit 陽性圓形光滑肥大細胞（一些在中間圖中用白色三角形標記）的整體制備中的綠色 PGP9.5 陽性神經(jīng)元，它們在形態(tài)上是 不同于 Cajal 的紡錘形間質(zhì)細胞。 右側(cè)面板顯示了兩種染色的合并圖像。