WATERSACQUITYUPLCI-CLASS/SYNAPT G2-SI液質(zhì)聯(lián)用儀的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1簡述

WATERS ACQUITY UPLC I-CLASS/SYNAPT G2-SI液質(zhì)聯(lián)用儀是通過色譜分離快速采集和處理準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)數(shù)據(jù)的超高效液相色譜質(zhì)譜系統(tǒng)。Waters 設(shè)計的 SYNAPT? G2-Si?質(zhì)譜儀可用作研究性工具，提供準(zhǔn)確的、鑒定性質(zhì)譜測量結(jié)果。 SYNAPT G2-Si?質(zhì)譜儀不適用于診斷應(yīng)用。該系統(tǒng)有兩部分組成：WATERS SYNAPT G2-SI Q-TOF質(zhì)譜和 WATERS ACQUITY UPLC I-CLASS超高效液相系統(tǒng)。SYNAPT G2-Si?MS 是一種四極桿/正交加速飛行時間 (oa-TOF) 串聯(lián)質(zhì)譜儀，由MassLynx? 軟件控制。

1.1ACQUITY UPLC系統(tǒng)

UPLC?借助于HPLC的理論及原理， 涵蓋了小顆粒填料、 非常低系統(tǒng)體積及快速檢測手段等全新技術(shù)， 增加了分析的通量、 靈敏度及色譜峰容量。ACQUITY UPLC 系統(tǒng)包括二元溶劑管理器、樣品管理器、柱溫箱以及專用的 ACQUITY UPLC 色譜柱。保持全部各路溶劑管路全都灌注過，保持柱塞清洗管路是灌注過的，啟動儀器之前重新灌注溶劑管路。

UPLC系統(tǒng)常見的故障：

1.真空脫氣機(jī)硬件錯誤?Degasser vaccum HW error脫氣機(jī)真空度達(dá)不到既定要求(0.9psia)BSM：反復(fù)灌注A1A2,B1B2,Strong Wash,Weak Wash;確認(rèn)管路中氣泡已完全排出。

2.泵硬件超壓?Pump HW over pressure系統(tǒng)壓力超過15500psi通常是由于系統(tǒng)堵塞引起的;請拆下色譜柱及柱前的在線過濾器,再嘗試開啟流速;如仍然出錯,則說明系統(tǒng)有堵塞的地方,請聯(lián)系Waters尋求解決辦法。

3.泵復(fù)位錯誤?Pump homing error重啟儀器;若仍然出現(xiàn),請記錄報錯信息并聯(lián)系Waters技術(shù)支持。

4.樣品壓力低?Sample pressure low流路壓力低于100psi確認(rèn)Weak/Strong Wash溶劑是否足夠,反復(fù)灌注清洗注射器,排除其中氣泡;反復(fù)灌注樣品注射器,排除其中氣泡;觀察樣品室內(nèi)進(jìn)樣針,確認(rèn)是否進(jìn)樣針損壞。

5.樣品流路壓力超限?Sample fluidics high pressure limit流路壓力高于210psi此常見報錯通常由于樣品管理器六通閥堵塞引起,建議直接與Waters聯(lián)系取得支持。
6.Z軸移動硬件錯誤?Zp axis move HW fault請先檢查樣品板是否正確放置;觀察進(jìn)樣針有無損壞;若只是進(jìn)樣時出現(xiàn)此報錯:請確認(rèn)工作站上選擇的樣品板類型是：ANSI-48Vial2ML Holder。

1.2軟件

IntelliStart 軟件將監(jiān)視質(zhì)譜儀的狀態(tài)，并報告儀器是否已準(zhǔn)備就緒以供使用。軟件可以對儀器自動進(jìn)行質(zhì)量數(shù)校準(zhǔn)，并顯示性能回讀值。 IntelliStart 軟件是集成了MassLynx 軟件和 Instrument Console （儀器控制臺）的軟件。IntelliStart 流路系統(tǒng)內(nèi)置在質(zhì)譜儀中。它會將樣品直接從 LC 色譜柱或三個集成儲液瓶傳輸至 MS 探頭。儲液瓶也可通過直接或混合注入的方式來輸送樣品，從而優(yōu)化分析流速下的儀器性能。

MassLynx 軟件控制該質(zhì)譜儀。它是一種采集、分析、管理和發(fā)布質(zhì)譜數(shù)據(jù)的高性能應(yīng)用程序。MassLynx 支持以下主要操作：配置儀器、創(chuàng)建用于定義運行操作參數(shù)的LC 和 MS方法、使用 IntelliStart 軟件對質(zhì)譜儀進(jìn)行調(diào)諧和質(zhì)量數(shù)校準(zhǔn)、運行樣品、監(jiān)視運行、采集數(shù)據(jù)、處理數(shù)據(jù)、查看數(shù)據(jù)。

1.3質(zhì)譜部分

質(zhì)譜儀由四個基本組件構(gòu)成：具有 StepWave? 離子導(dǎo)入器的離子源、四極桿、Triwave? 設(shè)備、TOF 質(zhì)量分析器。

離子源：將樣品導(dǎo)入系統(tǒng)進(jìn)行汽化由氣態(tài)分子變成離子。在電噴霧電離 (ESI) 中，洗脫液從噴霧器中射出時被加上強(qiáng)電荷。由于脫溶劑氣和脫溶劑溫度所得氣溶膠組成的液滴將變?。ㄈ軇┱舭l(fā)）。隨著溶劑的持續(xù)蒸發(fā)，電荷密度將一直增加直到液滴表面激射出離子 （離子蒸發(fā)）。離子可以為一價離子或多價離子。從LC 到 MS 的轉(zhuǎn)變：物態(tài)轉(zhuǎn)變: 液態(tài) - 氣態(tài)帶電狀態(tài): “中性” - 離子。

電噴霧離子化可分為三個過程：

第一階段：形成帶電小液滴（在ESI高壓電極處施以正的高電壓, 小液滴從毛細(xì)管高速噴出而帶有過量的正電荷. 從而產(chǎn)生電化學(xué)反應(yīng)：通過溶劑組分氧化而去掉負(fù)離子或通過毛細(xì)管自身的氧化而增加正離子。同樣，當(dāng)在ESI高壓電極處施以負(fù)的高電壓，小液滴從毛細(xì)管高速噴出而帶有過量的負(fù)電荷）

第二階段：溶劑蒸發(fā)和小液滴碎裂

第三階段：形成氣相離子離子蒸發(fā)模式

Sample Cone: 將帶電離子吸入錐孔，理論上錐孔電壓越高進(jìn)入的離子越多，可設(shè)范圍為25~100V。一般設(shè)為35-40V,小分子藥物設(shè)為25V。sample cone電壓過高時，會在源內(nèi)產(chǎn)生離子碎片。對于SYNAPT G2-Si，錐孔電壓對源內(nèi)裂解的影響很小，可忽略。

StepWave：離子抬升裝置，傳輸分子離子，中性分子被吸入油泵中。

四級桿：聚集的離子隨后進(jìn)入四極桿，在其中可根據(jù)質(zhì)荷比進(jìn)行分離 （過濾） 。

Triwave 區(qū)域：按質(zhì)量數(shù)分離的離子進(jìn)入 Triwave 區(qū)域，并在其中受到碰撞誘導(dǎo)解離 (CID) 。Triwave 設(shè)備包括三個 T-Wave? 離子導(dǎo)入器。它可以最佳效率將離子從四極桿傳送到 TOF，并且提供兩個獨立的碰撞室區(qū)域 （ TRAP T-Wave 和 TRANSFERT-Wave）以優(yōu)化所研究化合物的碎裂?？墒謩踊蜃詣涌刂婆鲎材芰考捌湓斐傻乃榱殉潭?。Triwave 技術(shù)包含三個 T-WaveTM 設(shè)備，每個設(shè)備分別執(zhí)行一個獨立的功能：第一個 T-Wave 離子導(dǎo)入器 (Trap) 是自動配置的。它將離子傳輸至第二個T-Wave 離子導(dǎo)入器，并且可充當(dāng)碰撞室。第二個 T-Wave 離子導(dǎo)入器將離子傳送到第三個 T-Wave 離子導(dǎo)入器。第三個 T-Wave 離子導(dǎo)入器 (Transfer) 可充當(dāng)碰撞室，并通過傳輸透鏡將離子傳送到 oa-TOF 進(jìn)行質(zhì)量數(shù)分析。

飛行時間 (TOF) 分析器: 高壓脈沖對離子進(jìn)行正交加速并將其推入到飛行管底部，雙級反射器在此反射離子使其朝向離子反射鏡運動，離子反射鏡又將離子反射回雙級反射器。然后，雙級反射器將離子反射到檢測器。質(zhì)荷比不同的離子到達(dá)檢測器的時間不同，這樣便創(chuàng)建了質(zhì)譜，來自檢測器的信號經(jīng)過放大和數(shù)字化，然后發(fā)送到 MassLynx 軟件。

補(bǔ)充：電噴霧 (ESI)的優(yōu)、缺點：

優(yōu)點：分子量信息適合范圍廣:揮發(fā)性和非揮發(fā)性分析物、適合于離子型/極性化合物、靈敏度高、高分子量測定、適合毛細(xì)管高效液相色譜。

缺點：對LC流速有一定的限制，流速較低、在溶液中必須形成離子、在高鹽濃度的條件下，容易有離子抑制。

適合于ESI分析的化合物

典型正離子分析樣品：肽和蛋白、極性化合物、環(huán)境污染物例如農(nóng)藥和污染物毒品、違禁物及其代謝產(chǎn)物。

典型負(fù)離子分析樣品：某些蛋白、寡核苷酸、寡糖和多聚糖，某些藥物的代謝物例如：葡糖苷酸復(fù)合物。

2.環(huán)境要求

2.1電壓要求：儀器室電源要求相對穩(wěn)定，電壓變化要小，最好配備不間斷穩(wěn)壓電源，防止意外停電。（220V AC，零地電壓小于1V，頻率50Hz)

2.2溫度和濕度要求：儀器室溫度應(yīng)相對穩(wěn)定，一般應(yīng)控制在18-22℃，過高溫度會造成電路板工作不穩(wěn)定，保持恒溫（晝夜波動<±2℃ ，溫度對儀器影響很大，當(dāng)溫度超過30℃會把電熱板燒壞。）定期對96小時內(nèi)的室溫進(jìn)行監(jiān)控。

相對濕度最好為50-70%，室內(nèi)應(yīng)備有溫度計和濕度計，一般采用空調(diào)和吸濕機(jī)調(diào)節(jié)溫度和濕度。

2.3儀器室要保持整潔、干凈、無塵；配套設(shè)施布局合理。及時清理防塵網(wǎng)（長時間不清理會造成電路板溫度過高），無易燃易爆和腐蝕性氣體，室內(nèi)排風(fēng)良好。

2.4儀器工作臺應(yīng)平穩(wěn)，周圍無強(qiáng)烈機(jī)械振動和電磁干擾，儀器有良好接地。