針對(duì)貼壁細(xì)胞：3-6傳代

一.消化細(xì)胞

1.觀察細(xì)胞是否達(dá)到可傳代密度(70%及以上)，取出一盤(pán)處于對(duì)數(shù)期的細(xì)胞

2.用移液器吸走剩余的培養(yǎng)基，加入2ml PBS，略微搖晃后吸走PBS

3.輕輕晃勻，使充分與細(xì)胞接觸，在37°C培養(yǎng)箱或室溫3~5min

4.加入1ml0.2%-0.25%胰酶(視細(xì)胞而定),在顯微鏡下觀察到細(xì)胞變大變圓，且晃動(dòng)時(shí)可自由移動(dòng)時(shí)，用大于等于1ml (與消化酶等量的)的含10%血清的培養(yǎng)基終止消化

5.用移液器充分吹打使細(xì)胞盡可能脫落，轉(zhuǎn)移細(xì)胞懸液至15ml|離心管

6.在顯微鏡下觀察，如有較多細(xì)胞剩余，則用1mlPBS洗

二.離心

將離心管配平后放入離心機(jī)，在1000rpm/min （視細(xì)胞而定）轉(zhuǎn)速下離心5~8min

三.重懸

1.棄去離心管中的上清液至廢液缸，棄液體時(shí)不可倒流，有細(xì)胞側(cè)朝外

2.加入 2ml 培養(yǎng)基，用移液器抽吸混勻，得到均勻的細(xì)胞懸液

四.種回

1.取出2個(gè)半徑10cm的培養(yǎng)皿，做好標(biāo)記（細(xì)胞名稱(chēng) 代次 日期），加入所需體積培養(yǎng)基至培養(yǎng)皿中

2.各取1ml已混勻的細(xì)胞懸液至2個(gè)準(zhǔn)備好的培養(yǎng)皿中，輕輕晃動(dòng)使液體充滿(mǎn)培養(yǎng)皿底部

3.用“8字搖勻法”搖勻后放回培養(yǎng)箱培養(yǎng)