多發(fā)性腦血栓形成動(dòng)物模型【北京實(shí)驗(yàn)代做】

【造模機(jī)制】采用復(fù)合血栓誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)大鼠多發(fā)性腦血栓形成方法制模。血栓形成經(jīng)多種途徑產(chǎn)生，其中以血小板聚集，血管壁損傷和收縮，血液凝固系統(tǒng)啟動(dòng)等因素占主導(dǎo)地位。本法采用 ADP、凝血酶和腎上腺素復(fù)合血栓誘導(dǎo)劑制備大鼠腦血栓模型，從病因病理上符合血栓形成的復(fù)雜過(guò)程。在此三種成分中，ADP為天然血小板聚集劑，ADP使血小板內(nèi)儲(chǔ) Ca2+釋放，與鈣調(diào)蛋白結(jié)合，促進(jìn)血小板產(chǎn)生脫顆粒反應(yīng)，釋放活性物質(zhì),Ca?+激活磷脂酶A。而促進(jìn)內(nèi)源性花生四烯酸（AA）釋放，促進(jìn)血栓素 A2(TXA2)的合成。凝血酶可使纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白，加速凝血過(guò)程；同時(shí)能激活磷脂酶C,進(jìn)一步促進(jìn) Ca?+釋放。腎上腺素促進(jìn)血管收縮,并增強(qiáng) ADP和凝血酶對(duì)血小板的激活作用。三者合用產(chǎn)生協(xié)同作用，采用此種復(fù)合血栓誘導(dǎo)劑能更好地模擬血栓形成的病理過(guò)程。

【造模方法】選用 SD大鼠，雌雄不限,體重為 250～350g。戊巴比妥鈉 40~50mg/kg 腹腔注射麻醉，仰位固定，手術(shù)分離右側(cè)頸總動(dòng)脈和頸外動(dòng)脈,夾閉頸總動(dòng)脈近心端,暫時(shí)結(jié)扎頸外動(dòng)脈，用頭皮針向頸總動(dòng)脈頭端注射復(fù)合血栓誘導(dǎo)劑（含 ADP12.5mmol/L,凝血酶1.25U/ml，腎上腺素 1mg/ml，按 100：200：5比例混合均勻，現(xiàn)配，冰箱保存)0.1ml/100g,注射后用凝膠局部止血，3~5分鐘后松開(kāi)頸外動(dòng)脈,縫合傷口。觀察指標(biāo):

1.伊文思藍(lán)的通透性造模時(shí)，當(dāng)血栓誘導(dǎo)劑注入5分鐘后，注入0.2%伊文思藍(lán)0.5ml/100g，再過(guò)5分鐘后迅速斷頭，取兩側(cè)大腦半球，稱(chēng)重，加入0.5%NazSOa3ml 及丙酮7ml，制成勻漿，密封，放置60分鐘以上，3000r/min 離心10分鐘，取上清液，以生理鹽水調(diào)零點(diǎn)，在60μm處比色，以吸收度與腦重的比值表示伊文思藍(lán)的含量。

2.記錄皮質(zhì)腦電圖于造模前，首先在枕顳部鉆孔安裝腦電極，準(zhǔn)備描記皮質(zhì)腦電圖用。緩慢推注血栓誘導(dǎo)劑，直到腦電頻率減慢，振幅降低至給藥前的10%~20%時(shí)，停止注射。

3.測(cè)定血小板聚集性。

4.測(cè)定 TXB2/6-Keto-PGFm。用放射免疫分析法測(cè)定血栓烷B(TXB)和6-酮-前列腺素Fi。（6-Keto-PGFi。）在貧血小板血漿(PPP)中的含量。模型組 TXB2/6-Keto-PGF1。比值升高，如藥物能使其比值降低，則說(shuō)明其有抗血栓形成作用。

5.病理形態(tài)學(xué)改變（光鏡和電鏡）。

【模型特點(diǎn)】造模后，由于血栓形成引起腦缺血，血管通透性增加，上清液中伊文思藍(lán)含量增加，比值加大；皮質(zhì)腦電圖記錄顯示隨著血栓誘導(dǎo)劑緩慢推注，腦電頻率減慢，振幅降低；血小板聚集性增強(qiáng)；TXB2/6-Keto-PGFi。比值升高；出現(xiàn)明顯的腦血栓病理改變：模型組右側(cè)大腦可見(jiàn)小動(dòng)脈被紅細(xì)胞充盈、毛細(xì)血管被無(wú)定形物阻塞，擴(kuò)張，蛛網(wǎng)膜有淤血，細(xì)胞間質(zhì)有水腫，腦細(xì)胞有散在的衛(wèi)星現(xiàn)象。左側(cè)大腦改變不明顯，說(shuō)明血栓形成主要位于同側(cè)大腦半球。

【應(yīng)用范圍】適于多發(fā)性腦血栓形成機(jī)制研究,防治腦血栓措施和藥物療效評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)研究。

【注意事項(xiàng)】

1.復(fù)合血栓誘導(dǎo)劑中各種成分的含量非常重要，ADP和凝血酶要經(jīng)過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索。

2.通透性實(shí)驗(yàn)伊文思藍(lán)注入量要準(zhǔn)確無(wú)誤，勻漿制備后放置時(shí)間要足夠長(zhǎng)，最好在1小時(shí)以上。

3.腦電圖的記錄適于靜脈注射給藥，造模成功后，立即靜脈注射被測(cè)試藥物，觀察給藥后不同時(shí)間對(duì)腦電圖的影響。腦電圖的記錄不宜觀察口服藥物。

【模型評(píng)估】本模型采用復(fù)合血栓誘導(dǎo)劑和結(jié)扎頸外動(dòng)脈模擬病理過(guò)程，反映腦血栓形成時(shí)的情況，而且還以右側(cè)大腦和左側(cè)大腦重量的比值來(lái)反映腦水腫程度。本模型的不足之處是：形成的血栓為血小板血栓，主要位于小動(dòng)脈與毛細(xì)血管，在同側(cè)大腦半球形成的血栓彌散、不固定。

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