DAPT (GSI-IX) 是一種有效的，口服活性的 γ 分泌酶 (γ-secretase) 抑制劑，對(duì)總 amyloid-β (Aβ) 和 Aβ42 的 IC50 分別為 115 nM 和 200 nM。DAPT 抑制 Notch 1 信號(hào)傳導(dǎo)并誘導(dǎo)細(xì)胞分化。DAPT 還可誘導(dǎo)細(xì)胞自噬 (autophagy) 和凋亡 (apoptosis)。DAPT 具有神經(jīng)保護(hù)活性，并可用于自身免疫性和淋巴增生性疾病，退化性疾病和癌癥的研究。

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　　生物活性

　　體外研究

　　DAPT 抑制 Aβ 產(chǎn)生超過(guò) 90%，僅影響培養(yǎng)基中 APPβ 的適度減少。盡管 DAPT 處理使 APPβ 降低了約 30%，但這種作用不依賴于濃度，并且通過(guò)去除 DAPT 可逆轉(zhuǎn). CNE-2 細(xì)胞用濃度增加的 DAPT（0、25、50 和 75 μM）處理，γ-分泌酶產(chǎn)生的 Notch 1 片段 Val1744-NICD 在 48 小時(shí)后以劑量依賴性方式減少（P<0.01 ）。50 μM 濃度的 DAPT 幾乎完全抑制 γ-分泌酶的激活

　　MCE 尚未獨(dú)立確認(rèn)這些方法的準(zhǔn)確性。它們僅供參考。

　　體內(nèi)研究

　　將 DAPT 施用于 PDAPP 小鼠 (100 mg/kg sc)，并檢查大腦皮層中 DAPT 和 Aβ 的水平。治療后 3 小時(shí)，大腦中的 DAPT 峰值水平達(dá)到 490 ng/g，在最初的 18 小時(shí)內(nèi)維持高于 100 ng/g (~200 nM) 的水平。這些腦內(nèi) DAPT 濃度超過(guò)其 IC50用于降低神經(jīng)元培養(yǎng)物中的 Aβ (115 nM)，并產(chǎn)生強(qiáng)大且持續(xù)的藥效學(xué)作用. DAPT 通過(guò)下調(diào)大鼠 Notch 1 和核因子 kappa B 的表達(dá)來(lái)保護(hù)大腦免受腦缺血。蛋白質(zhì)印跡分析還顯示 DAPT（0.03 mg/kg）組的 Notch 1 和 NF-κB 表達(dá)顯著降低（與 MCAO 組相比，P<0.05）

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　　實(shí)驗(yàn)參考方法

　　細(xì)胞檢測(cè)

　　轉(zhuǎn)染APP基因的人胚腎細(xì)胞751(HEK 293) 用于常規(guī) Aβ 還原測(cè)定。將細(xì)胞鋪在 96 孔板中，并使其在補(bǔ)充有 10% 熱滅活胎牛血清的 Dulbecco 改良 Eagle 培養(yǎng)基 (DMEM) 中粘附過(guò)夜。細(xì)胞在 37°C 下用 DAPT（0、0.4、2、10、50 和 250 nM）預(yù)處理 2 小時(shí)，吸出培養(yǎng)基并應(yīng)用新鮮的化合物溶液。在額外的 2 小時(shí)處理期后，取出條件培養(yǎng)基并通過(guò)對(duì)總 Aβ 特異的夾心 ELISA (266-3D6) 進(jìn)行分析。相對(duì)于用 0.1% DMSO 處理的對(duì)照細(xì)胞測(cè)量 Aβ 產(chǎn)生的減少，并表示為抑制百分比。使用 XLfit 軟件將來(lái)自至少六次重復(fù)給藥的數(shù)據(jù)擬合到四參數(shù)邏輯模型，以確定效力?https://www.medchemexpress.cn/DAPT.html

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　　動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

　　老鼠

　　三到四個(gè)月大的雜合 PDAPP 轉(zhuǎn)基因小鼠過(guò)表達(dá) APPV717F淀粉樣前體蛋白的突變形式。每個(gè)治療組 (n = 10) 由相等數(shù)量的年齡匹配的雄性和雌性動(dòng)物組成，這些動(dòng)物在治療前禁食過(guò)夜。治療組和對(duì)照組均以 10 mL/kg 的體積與 DAPT 或單獨(dú)的載體一起給藥。處理組織并進(jìn)行所有 Aβ 和 APP 測(cè)量。取出大腦后，將一側(cè)半球的皮層均質(zhì)化、離心，并將上清液用于 Aβ 測(cè)量。來(lái)自另一半球的皮層被快速冷凍以分析化合物水平。Aβ 水平表示為 ng/g 濕組織重量，并且相對(duì)于來(lái)自載體處理的對(duì)照動(dòng)物的組織的平均 Aβ 水平計(jì)算百分比減少。使用 Mann-Whitney 非參數(shù)統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)以評(píng)估顯著性。

　　大鼠

　　使用雄性 Sprague-Dawley 大鼠 (260-290 g)。在 MCAO 后立即將 DAPT 溶液立體定向注入側(cè)腦室 (LV)。左室的立體定向注射是在距前囟的-0.8 mm 前后坐標(biāo)、±1.5 mm 中外側(cè)和-4.5 mm 背腹坐標(biāo)處進(jìn)行的。30只大鼠隨機(jī)分為三個(gè)手術(shù)組（每組10只）：假手術(shù)組，接受等體積PBS，不進(jìn)行MCAO手術(shù)；MCAO 后接受等量 PBS 的 MCAO 組（MCAO）；和 DAPT 組在 MCAO 后接受 0.03 mg/kg 的 DAPT。術(shù)后 24 小時(shí)評(píng)估第一次神經(jīng)功能，然后在術(shù)后 48 小時(shí)評(píng)估第二次神經(jīng)功能。同時(shí)，測(cè)量并比較不同組間的腦含水量和梗死體積。

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