糖基化位點(diǎn)鑒定就是對(duì)糖鏈所結(jié)合的氨基酸種類以及該氨基酸殘基在肽鏈中所處的位置進(jìn)行鑒定，N糖基化的N型糖苷鍵對(duì)氨基酸序列有特殊要求，只與特定氨基酸序列中的的天冬酰胺的氨基結(jié)合，O型糖苷鍵可與任意氨基酸序列中的蘇氨酸或絲氨酸的羧基結(jié)合。只要已知發(fā)生糖基化的類型，就可以確定其氨基酸種類，只需要進(jìn)一步鑒定其所在肽鏈中的具體位置。

目前，糖基化氨基酸位點(diǎn)鑒定主要通過生物質(zhì)譜技術(shù)結(jié)合專一性糖苷內(nèi)切酶或蛋白酶的作用來開展。一般先對(duì)糖基化位點(diǎn)進(jìn)行特異性標(biāo)記，使之與未修飾的蛋白質(zhì)之間存在特定的分子質(zhì)量差異，再利用質(zhì)譜技術(shù)檢測這種差異，進(jìn)而通過串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)鑒定在哪個(gè)氨基酸發(fā)生了糖基化。一般步驟包括糖蛋白的水解消化和標(biāo)記、聚糖釋放、液相色譜法分離富集糖肽、質(zhì)譜檢測以及數(shù)據(jù)分析。

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