在試管苗增殖到一定數(shù)量時(shí)，就要使部分組培苗分流進(jìn)入到壯苗與生根階段。若不能將培養(yǎng)物大量轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上，就會(huì)使長(zhǎng)時(shí)間不轉(zhuǎn)移的苗子發(fā)黃老化，或因過(guò)分擁擠而導(dǎo)致無(wú)效苗增多，最后被迫淘汰許多材料。

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壯苗培養(yǎng)

在繼代培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞分裂素濃度的增加有助于增殖系數(shù)的提高。但伴隨著增殖系數(shù)的提高，增殖的芽往往會(huì)出現(xiàn)生長(zhǎng)勢(shì)減弱，不定芽短小、細(xì)弱，無(wú)法進(jìn)行生根培養(yǎng)的現(xiàn)象；即使能夠生根，移栽成活率也不高，必須經(jīng)過(guò)壯苗培養(yǎng)。壯苗培養(yǎng)時(shí)，可將生長(zhǎng)較好的芽分成單株培養(yǎng)，而將一些尚未成型的芽分成幾個(gè)芽叢培養(yǎng)。

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選擇適宜的細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素（種類及不同濃度配比），可以同時(shí)滿足增殖和壯苗的不同要求。如在杜鵑快繁的研究中發(fā)現(xiàn)，ZT/IAA或ZT/IBA的比值升高，芽的繁殖系數(shù)也隨之增加，但壯苗效果卻降低。高濃度的生長(zhǎng)素和低濃度的細(xì)胞分裂素的組合有利于形成壯苗。因此，在以叢生芽方式進(jìn)行增殖時(shí)，適當(dāng)降低培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素的濃度，并增加NAA等生長(zhǎng)素的濃度，就能達(dá)到壯苗培養(yǎng)的目的。在實(shí)際生產(chǎn)中，我們一般用較低濃度的細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素組成合理的比列，將有效增殖系數(shù)控制在3.0-5.0，以實(shí)現(xiàn)增殖和壯苗的雙重目的。

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生根培養(yǎng)

1、試管內(nèi)生根

試管內(nèi)生根是將成叢的試管苗分離成單苗，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)容器內(nèi)誘導(dǎo)生根的方法。試管苗生根的優(yōu)劣主要體現(xiàn)在根系質(zhì)量（粗度、長(zhǎng)度）和根系數(shù)量（條數(shù)）吸收方面。不僅要求不定根比較粗壯，更重要的是要有較多的毛細(xì)根，以擴(kuò)大根系的吸收面積，增強(qiáng)根系的吸收能力，提高移栽成活率。根系的長(zhǎng)度不宜太長(zhǎng)，在粗而少與細(xì)而多之間，可能以后者較好。

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生根階段可對(duì)培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)條件進(jìn)行調(diào)整，減少試管苗對(duì)異養(yǎng)條件的依賴，逐步增強(qiáng)光合作用的能力。對(duì)于大多數(shù)物種來(lái)說(shuō)，誘導(dǎo)生根需要有適當(dāng)?shù)纳L(zhǎng)素，其中最常用的是NAA和IBA，濃度一般為0.1-10.0mg/L。但唐菖蒲、水仙和草莓等組培苗很容易在無(wú)生長(zhǎng)素的培養(yǎng)基上生根。

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一般情況下礦質(zhì)元素濃度較高時(shí)有利于莖、葉生長(zhǎng)；較低時(shí)有利于生根。生根培養(yǎng)基中無(wú)機(jī)鹽和蔗糖濃度減少一半，光照強(qiáng)度由原來(lái)的500-1000lx提高到1000-5000lx，能刺激小植株自身進(jìn)行光合作用制造有機(jī)物，以便由異養(yǎng)型向自養(yǎng)型過(guò)渡。在這種條件下，植物能較好的生根，對(duì)水分脅迫和疾病的抗性也會(huì)有所增強(qiáng)，植株可能表現(xiàn)出生長(zhǎng)遲緩和較輕微的失綠。但生產(chǎn)實(shí)踐證明，這樣的幼苗，要比在低光強(qiáng)條件下的著綠較高的幼苗移栽成活率高。

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生根階段采用自然光照比燈光照明所形成的試管苗更能適應(yīng)外界環(huán)境條件。培養(yǎng)基中添加活性炭有利于提高生根苗質(zhì)量。例如在櫻花生根培養(yǎng)基中加入0.1%-0.2%活性炭后，試管苗不僅生長(zhǎng)健壯，無(wú)愈傷組織，而且根系較長(zhǎng)、白色、有韌性，移栽后新根發(fā)生快，質(zhì)量好，成活率高。

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2、試管外生根

有些植物種類在試管中難以生根，或有根但與莖的維管束不相通，或根與莖聯(lián)系差，或有根而無(wú)根毛，或吸收功能極弱，移栽后不宜成活，這就需要采用試管外生根法。試管外生根是將已經(jīng)完成壯苗培養(yǎng)的小苗，用一定濃度生長(zhǎng)素或生根粉浸蘸處理，然后栽入疏松透氣的基質(zhì)中。例如大花蕙蘭、非洲菊、蘋果、獼猴桃、葡萄和毛白楊等均有試管外生根成功的報(bào)道。試管外生根也是一種降低生產(chǎn)成本的有效措施，不僅可以減少無(wú)菌操作的工時(shí)消耗，而且減少了培養(yǎng)基制備材料與能源消耗。

組培室的籌建

組培室建設(shè)首要考慮的問(wèn)題就是組培室需要哪些設(shè)備條件和需要什么樣的培養(yǎng)條件。對(duì)這些有了全面了解以后，我們便可以因地制宜地新建或利用現(xiàn)有房屋建設(shè)實(shí)驗(yàn)室。在設(shè)計(jì)組培室時(shí)，一般情況應(yīng)按組培的流程來(lái)設(shè)計(jì)，同時(shí)考慮人物分流順暢，空間合理利用。植物組織培養(yǎng)要求嚴(yán)格的無(wú)菌的條件，需要一定專業(yè)儀器設(shè)備、器材和用具，同時(shí)還需要人工控制溫度、光照、濕度等培養(yǎng)條件。

實(shí)驗(yàn)室

一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)包括洗滌室、配置室、接種室、培養(yǎng)室、觀察室（冷卻室）、滅菌室、洗苗室等。在實(shí)際中可結(jié)合可行條件，合并一部分。

（一）洗滌室　

洗滌室完成玻璃器皿和其它儀器的清洗、干燥和貯存。室內(nèi)應(yīng)配備大型水槽，用于培養(yǎng)器皿的洗滌，最好是內(nèi)襯白瓷磚的水泥槽。為防止碰壞玻璃器皿，可鋪橡膠板，上下水道要暢通。備有大型塑料筐，用于放置培養(yǎng)器皿。可直接置于擱架上，以節(jié)約空間和便于運(yùn)輸工作。備有空干架，以空干涮凈的培養(yǎng)器皿。

（二）配置室、滅菌室（可分開）

準(zhǔn)備室要求明亮、通風(fēng)。在準(zhǔn)備室內(nèi)要完成培養(yǎng)基制備以及試管苗出瓶、清洗與整理工作。如果房間較多，可將準(zhǔn)備室分為洗滌室和配置室兩部分。洗滌室專門負(fù)責(zé)試管苗出瓶與培養(yǎng)器皿的清洗工作；配置室則負(fù)責(zé)培養(yǎng)基的配制、分裝、包扎和高壓滅菌等工作。

為完成培養(yǎng)基的制備工作，準(zhǔn)備室還應(yīng)配備以下儀器設(shè)備：

1．工作臺(tái)

其高度應(yīng)方便配制工作。

2．藥品柜

用以放置常用藥品。

3．普通冰箱

主要用于貯存母液、各種易變質(zhì)、易分解的化學(xué)藥品以及植物材料等。

4．電子分析天平和托盤天平

電子分析天平精確度為0.001g，用于稱取大量元素、微量元素、維生素、激素等微量藥品；托盤天平精確度為0.1g，用于稱取用量較大的糖和瓊脂等。天平應(yīng)放置在干燥、不受振動(dòng)的固定操作臺(tái)上。

5．純水儀或電蒸餾水器

純水儀提供純水，水質(zhì)好。電蒸餾水器，?采用硬質(zhì)玻璃或金屬制成。蒸餾水用于配制母液或培養(yǎng)基，配培養(yǎng)基可用自來(lái)水來(lái)代替，若實(shí)驗(yàn)要求嚴(yán)格的話，則須用蒸餾水。

6．磁力攪拌器　　

磁力攪拌器用于加速攪拌難溶的物質(zhì)，如各種化學(xué)物質(zhì)、瓊脂粉等?。磁力攪拌器還可加熱，使之更利于溶解。

7．恒溫水浴鍋或恒溫振蕩水浴

水浴鍋用于難溶藥品的溶解、瓊脂的溶化等。若沒有水浴鍋，也可用1500或2000W電爐或電飯鍋代替。電爐應(yīng)配有鋁鍋。

8．酸度計(jì)　

組織培養(yǎng)中培養(yǎng)基pＨ值的準(zhǔn)確度是十分重要的，應(yīng)當(dāng)使用酸度計(jì)，若無(wú)酸度計(jì)，也可使用pH試紙進(jìn)行粗測(cè)。首次使用酸度計(jì)前，應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)液調(diào)節(jié)定位，然后固定。測(cè)量pＨ時(shí)，待測(cè)液必須充分?jǐn)嚢杈鶆颉Ｈ绻囵B(yǎng)基溫度過(guò)高，測(cè)量時(shí)要調(diào)整pＨ計(jì)上的溫度扭使之和培養(yǎng)基溫度相當(dāng)。注意保護(hù)好玻璃電極，用后電極應(yīng)用蒸餾水沖洗凈，蓋上電極帽。

9．培養(yǎng)基分裝設(shè)備

小型組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室可采用燒杯、漏斗等作為分裝培養(yǎng)基的工具。也可采用醫(yī)用“下口杯”作為分裝工具，在“下口杯”的下口管上套一段軟膠管，加一彈簧止水夾，使用時(shí)非常合用。更大規(guī)?；蛞蟾蕰r(shí)，可考慮采用液體自動(dòng)定量灌注設(shè)備。

10．高壓滅菌鍋

用以進(jìn)行培養(yǎng)基和器械用具的滅菌。小規(guī)模實(shí)驗(yàn)室可選用小型手提式高壓滅菌鍋。如果是連續(xù)的大規(guī)模生產(chǎn)，應(yīng)選用大型立式的或臥式的高壓滅菌鍋。通常以電作能源。

11．烘箱

用于干燥洗凈的玻璃器皿，也可用于干熱滅菌和測(cè)定干物重。用于干燥需保持80～100℃；進(jìn)行干熱滅菌需保持150℃，達(dá)１～３小時(shí)；若測(cè)定干物重，則溫度應(yīng)控制在80℃烘干。

12．恒溫培養(yǎng)箱

內(nèi)有溫度調(diào)節(jié)器，生化培養(yǎng)箱還配有光源，用于植物材料的培養(yǎng)?！?/p>

（三）接種室

接種室是是進(jìn)行植物材料的分離接種及培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移的一個(gè)重要操作室。其無(wú)菌條件的好壞對(duì)組織培養(yǎng)成功與否起重要作用。

在工作方便的前提下，無(wú)菌操作室宜小不宜大，一般7～8m2；要求地面、天花板及四壁盡可能密閉光潔，易于清潔和消毒。無(wú)菌操作室應(yīng)配置拉動(dòng)門，以減少開關(guān)門時(shí)的空氣擾動(dòng)。

無(wú)菌操作室要求干爽安靜，清潔明亮，在適當(dāng)位置吊裝1～2盞紫外線滅菌燈，用以經(jīng)常地照射滅菌。最好能安置一小型空調(diào)，使室溫可控，這樣可讓門窗緊閉，減少與外界空氣對(duì)流。

無(wú)菌操作室應(yīng)設(shè)有緩沖間，面積2 m2為宜。進(jìn)入無(wú)菌操作室前在此更衣?lián)Q鞋，以減少進(jìn)出時(shí)帶入雜菌。緩沖間最好也安一盞紫外滅菌燈，用以照射滅菌。

無(wú)菌操作室的主要設(shè)備及用具有：

1．接種箱　

在投資少的情況下，可以用接種箱來(lái)代替超凈臺(tái)。接種箱依靠密閉、藥劑熏蒸和紫外燈照射來(lái)保證內(nèi)部空間無(wú)菌。但操作活動(dòng)受限制，準(zhǔn)備時(shí)間長(zhǎng)，工作效率低。

2．超凈工作臺(tái)　

超凈臺(tái)的優(yōu)點(diǎn)是操作方便自如，比較舒適，工作效率高，準(zhǔn)備時(shí)間短。開機(jī)10分鐘即可操作，可進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間使用。并可以保證無(wú)菌材料在轉(zhuǎn)移接種過(guò)程中不受污染。

3．無(wú)菌操作用的器具

按單人超凈臺(tái)上的用量計(jì)：酒精燈1個(gè)；20～25cm長(zhǎng)的醫(yī)用鑷子1把；4號(hào)解剖刀1把，解剖刀片若干；15cm醫(yī)用剪1把；500ml廣口瓶1只，內(nèi)放酒精，現(xiàn)代專業(yè)組培室多用接種器械滅菌器和容器口滅菌器，用于浸泡鑷子、刀、剪等；用于架放灼燒過(guò)的刀、鑷子的小架。

4．?dāng)R架

貯放高壓滅菌后等待接種的培養(yǎng)基。

（四）培養(yǎng)室

是將接種的材料進(jìn)行培養(yǎng)生長(zhǎng)的場(chǎng)所。培養(yǎng)室的大小可根據(jù)需要的培養(yǎng)架的大小、數(shù)目、及其它附屬設(shè)備而定。其設(shè)計(jì)以充分利用空間和節(jié)省能源為原則。高度比培養(yǎng)架略高為宜，周圍墻壁要求有絕熱防火的性能。

培養(yǎng)材料放在培養(yǎng)架上培養(yǎng)。培養(yǎng)架大多由金屬制成，一般設(shè)6層。最低一層離地高約10厘米，其它每層間隔30厘米左右，培養(yǎng)架即高1.8米左右。培養(yǎng)架長(zhǎng)度，因一般在每層上端裝置日光燈,以供照明，所以都是根據(jù)日光燈的長(zhǎng)度而設(shè)計(jì)，如采用28W日光燈，則長(zhǎng)1.25m，21 W的長(zhǎng)１米即可。寬度一般為50cm。

培養(yǎng)室最重要的因子是溫度，一般保持在20～27℃左右，可安裝窗式或立式空調(diào)機(jī)。要求溫度因熱帶植物和寒帶植物等的種類不同而異，最好不同種類有不同的培養(yǎng)室。

室內(nèi)濕度也要求恒定，相對(duì)濕度以保持在70～80%為好,可安裝加濕器。

培養(yǎng)架上裝置日光燈時(shí)，可安裝定時(shí)開關(guān)鐘控制照明時(shí)間，植物組織培養(yǎng)的光照強(qiáng)度一般在1000～4000勒克斯（lux），每天照明10～16小時(shí)，也有的需要連續(xù)照明。短日照植物需要短日照條件，長(zhǎng)日照植物需要長(zhǎng)日照條件。

現(xiàn)代組培實(shí)驗(yàn)室大多設(shè)計(jì)為采用天然太陽(yáng)光照作為能源，這樣不但可以節(jié)省能源,而且組培苗接受太陽(yáng)光生長(zhǎng)良好，馴化易成活。在陰雨天用燈光作補(bǔ)充。

補(bǔ)光光源目前專業(yè)的組培室用全光譜冷光燈或led組培專用燈。

第二、?設(shè)備和器材

（一）玻璃器皿

在組織培養(yǎng)中配制培養(yǎng)基和進(jìn)行培養(yǎng)需大量的玻璃器皿。要求由堿性溶解度小的硬質(zhì)玻璃制成，以保證長(zhǎng)期貯存藥品及培養(yǎng)的效果；培養(yǎng)用的還要求透光度好，能耐高壓高溫，能方便放入培養(yǎng)基和培養(yǎng)材料的器皿，根據(jù)培養(yǎng)的目的和要求，可以采用不同種類、規(guī)格的玻璃器皿.其中以試管、三角瓶、培養(yǎng)皿等使用較多。

最常使用的是三角瓶，規(guī)格有100、250、500毫升等， 一般使用100毫升三角瓶，無(wú)論靜止或振蕩培養(yǎng)皆適用。其培養(yǎng)面積大，利于組織生長(zhǎng)，受光也比試管好。由于瓶口較小，亦不易污染。

培養(yǎng)皿常用9、12厘米直徑等規(guī)格，要求上、下能密切吻合。這在游離細(xì)胞、 原生質(zhì)體、花粉等的靜置培養(yǎng)、看護(hù)培養(yǎng)、無(wú)菌種子的發(fā)芽、植物材料的分離等都需采用。

試管常用口徑18×180 mm或20×200mm規(guī)格。可用于培養(yǎng)較高的試管苗 ，另外也不易污染。

培養(yǎng)器皿還可就地取材，采用一些代用品。工廠化生產(chǎn)可采用廣口的200ml左右罐頭瓶，加蓋半透明的塑料蓋，由于瓶口大，所以大量繁殖時(shí)操作方便、工作效率高，也減少了培養(yǎng)材料的損傷。但缺點(diǎn)是易引起污染。

目前，培養(yǎng)容器和制備培養(yǎng)基所需的玻璃器皿漸被塑料器皿所代替。塑料容器具有質(zhì)輕、透明、不易破碎、成本低等優(yōu)點(diǎn)，如培養(yǎng)容器多為平底方盒形，可增加培養(yǎng)的植株數(shù)，并能一層層地疊摞起來(lái)，從而節(jié)約空間。這類塑料制品多是采用聚丙烯材料制成，能耐高溫，可進(jìn)行高壓滅菌。有些產(chǎn)品為一次性消耗品，不但可節(jié)省洗滌人工，還可節(jié)省時(shí)間，提率。一次性塑料容器或帶螺絲帽的玻璃瓶，無(wú)須另外配蓋，使用時(shí)是非常方便的。

瓶口封塞可用多種方法，要具有一定的通氣性和密閉性，以防止培養(yǎng)基干燥和雜菌污染。以前封口常用棉塞。不過(guò)這種封口辦法夏季極易污染，且不易保持培養(yǎng)基濕度?，F(xiàn)在多采用聚丙烯塑料膜作為封口，以線繩結(jié)扎或橡皮圈箍扎。為了增加通氣性，可在里面襯一層硫酸紙或牛皮紙。這樣經(jīng)濟(jì)方便，且通氣好。也可采用專用的封口材料如封口膜。

在組織培養(yǎng)中配制培養(yǎng)基，貯藏母液，材料的消毒等需要各種化學(xué)實(shí)驗(yàn)用的玻璃器皿，包括100、250、1000毫升燒杯；100、1000毫升量筒；100、1000毫升試劑瓶（棕色）等等。

（二）器械用具

１．鑷子類

主要采用醫(yī)療上用的鑷子。根據(jù)操作的需要有各種類型，若用100毫升的三角瓶作為培養(yǎng)瓶， 可用２20厘米長(zhǎng)的鑷子。鑷子過(guò)短.容易使手接觸瓶口， 造成污染。鑷子太長(zhǎng)，使用起來(lái)不靈活。某些微小部分的精細(xì)操作則用鐘表鑷子， 如在分離莖尖幼葉時(shí)，由于其尖端鋒利，所以幾乎可代替剪刀使用。

２．剪刀類

可采用五官科用的中型剪刀。主要用于切斷莖段、葉片等。也可以用彎形剪刀，由于其頭部彎曲，可以深入到瓶口中進(jìn)行剪切。

3．解剖刀

切割較小材料時(shí)可用解剖刀。?分離莖尖分生組織，有時(shí)也用解剖刀。常用的解剖刀刀片可以經(jīng)常調(diào)換，刀口要保持鋒利狀態(tài)，否則切割時(shí)會(huì)造成擠壓，引起周圍細(xì)胞組織大量死亡，影響培養(yǎng)效果。

４．解剖針

解剖針用于深入到培養(yǎng)瓶中，?轉(zhuǎn)移細(xì)胞或愈傷組織。也可用于分離微莖尖的幼葉。

組培室規(guī)劃設(shè)計(jì)、凈化，組培室儀器設(shè)備

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