1 前言說(shuō)明

本文培養(yǎng)基配置方案參考《分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指南》以及根據(jù)課題組實(shí)際實(shí)踐而整理的實(shí)驗(yàn)方案。

2 LB培養(yǎng)基

LB一般被解釋為L(zhǎng)uria-Bertani培養(yǎng)基，根據(jù)其發(fā)明人貝爾塔尼（Giuseppe Bertani）的說(shuō)法，這個(gè)名字來(lái)源于英語(yǔ)的lysogeny broth，即溶菌肉湯。一般用該培養(yǎng)基來(lái)預(yù)培養(yǎng)菌種，使菌種成倍擴(kuò)增，達(dá)到使用要求，可分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。

3成分說(shuō)明及配制體系

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3.1胰蛋白胨（Tryptone)）10g/L

國(guó)產(chǎn)的胰蛋白胨一般是以新鮮牛肉和牛骨經(jīng)胰酶消化而得到，與進(jìn)口的成分和工藝不同。進(jìn)口的胰蛋白胨以酪蛋白為基礎(chǔ)進(jìn)行消化，實(shí)為胰酪蛋白胨；而國(guó)產(chǎn)的是以肉、骨為原料。含有豐富的氮源、氨基酸等，可配制各種微生物培養(yǎng)基，用于細(xì)菌的培養(yǎng)、分離、增殖、鑒定

3.2酵母提取物（YE）5g/L

采用以蛋白質(zhì)含量豐富的食用酵母為原料，采用自溶、酶解、分離、濃縮等現(xiàn)代生物高新技術(shù)，將酵母細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、核酸等進(jìn)行降解后精制而成的一種棕黃色可溶性膏狀或淺黃色粉狀純天然制品。主要成分為多肽、氨基酸、呈味核苷酸、B族維生素及微量元素。

3.3氯化鈉（NaCl）10g/L

另外根據(jù)經(jīng)驗(yàn)值用NaOH調(diào)節(jié)該培養(yǎng)基的pH，使其達(dá)到7.4，該pH適合目前使用最廣的原核表達(dá)菌種大腸桿菌（E.coli）的生長(zhǎng)。

3.4氫氧化鈉（1ml 1mol/L）

3.5瓊脂或瓊脂糖（15g）

4 實(shí)驗(yàn)操作程序

4.1液體培養(yǎng)基

1.根據(jù)需要，按上述配制體系按比例使用稱量器進(jìn)行稱量（扣除瓊脂糖?。。?，稱取后轉(zhuǎn)移到清洗干凈的瓶子里（1L的大瓶子）。

2.加入目標(biāo)量超純水，上下混勻/磁力懸浮珠/玻璃棒攪勻（盡量減少泡沫產(chǎn)生），蓋子擰緊。

3.靜置5min左右，溶液呈深黃色均一液體，使用量筒按50ml or 100ml分裝在洗好錐形瓶。

4. 高壓（121℃，20min）滅菌后，結(jié)束后，取出放置4℃庫(kù)存（實(shí)際放在柜子里就行）

4.2固體培養(yǎng)基（+抗生素）

1.根據(jù)需要，按上述配制體系按比例使用稱量器進(jìn)行稱量，稱取后轉(zhuǎn)移到清洗干凈的瓶子里。

2.加入目標(biāo)量超純水，上下混勻，蓋子擰緊

3.進(jìn)行滅菌鍋（謹(jǐn)記高壓鍋使用指南）滅菌，記得高壓前擰松瓶蓋（防止爆裂）

4.高壓（121℃，20min）滅菌后，冷卻至手可以接觸的溫度（手溫）

5.加入所需要的抗生素，搖勻

6.倒板，約1/3厚度（一般250ml倒20個(gè)板子）

7.等待凝固，使用封口膜封住，并寫(xiě)上標(biāo)簽（抗生素、時(shí)間、配制人），倒置放置4℃冰箱

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5 抗生素

5.1硫酸卡那霉素

硫酸卡那霉素（簡(jiǎn)稱：卡那霉素）：?Kanamycin即Kanamycin?sulfate，中文名為硫酸卡那霉素，分子式：C18H36N4O11·H2SO4，分子量：582.58

卡那霉素為細(xì)菌培養(yǎng)常用抗生素，用于配制含卡那霉素的LB或LB平板等，也可以用于培養(yǎng)細(xì)胞的殺菌，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌及支原體都有殺滅或抑制作用。

推薦工作濃度：10-100mg/L。

用于真核細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，推薦工作濃度為100mg/L?？梢耘渲瞥?0-50mg/ml的儲(chǔ)備液。

儲(chǔ)備液4℃穩(wěn)定，-20℃可以長(zhǎng)期保存。

5.2氨芐青霉素

氨芐西林（Ampicillin），又稱氨芐青霉素，是一種β-內(nèi)酰胺類抗生素，可治療多種細(xì)菌感染。適應(yīng)癥包含呼吸道感染、泌尿道感染、腦膜炎、沙門氏菌感染癥，以及心內(nèi)膜炎。也能用于預(yù)防新生兒的B群鏈球菌感染，可經(jīng)由口服、肌肉注射以及靜脈注射給藥。

使用方法:

氨芐青霉素微溶于水，易溶于酸或堿，而氨芐青霉素鈉易溶于水。若使用氨芐青霉素配制，則應(yīng)按照摩爾比1:1進(jìn)行配制。配制OK后，需使用0.22um過(guò)濾除菌，分裝后于-20℃保存，可保存數(shù)月。