? ? ? ?平板劃線分離法是指把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)在平板培養(yǎng)基表面通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長繁殖成單菌落，通常把這種單菌落當(dāng)做微生物的純種。有時這種單菌落并非都由單個細(xì)胞繁殖而來的，故必須反復(fù)分離多次才可得到純種。

1.微生物的分離純化→保種操作步驟

清潔桌面→劃線操作→恒溫培養(yǎng)→挑單菌落→試管斜面保種→清洗培養(yǎng)皿

2.平板劃線分區(qū)

? ? ? ? 將微生物在固體培養(yǎng)基表面多次作由點到線稀釋而達(dá)到分離目的。劃線的形式有多種，其中一種先按無菌操作方法用接種環(huán)先劃A區(qū)，約劃1~2條線，劃好后，并將接種環(huán)在火焰上燒，除去接種環(huán)上的剩余菌，然后過A區(qū)的線畫B區(qū)，同樣C,D區(qū)，后一區(qū)線只與前一區(qū)相交，D區(qū)后不燒直接F區(qū)，F(xiàn)區(qū)不接觸前面的區(qū)，最后將接種環(huán)滅菌，置原處。這樣所劃線上出現(xiàn)大量的單菌落，與開始菌落相同的屬于純種，作為菌種進(jìn)行保藏。

3.劃線操作

（1）找出實驗用的菌種

（2）灼燒接種環(huán)

（3）先劃A區(qū)

①將平板倒置在酒精燈火焰旁→檢查是否有雜菌

②菌液培養(yǎng)皿過火焰 冷卻 取種

③在A區(qū)輕巧地劃1~2條線→對菌液做出初步稀釋→燒去接種環(huán)上的殘余菌種

（4）劃其余區(qū)

將燒去殘菌的接種環(huán)放在平板邊緣冷卻→使B區(qū)轉(zhuǎn)至劃線→把接種劃通過A區(qū)而轉(zhuǎn)移至B區(qū)→在B區(qū)輕巧地劃上2~3條致密的平行線。在C、D、F區(qū)同樣操作→使D、F區(qū)線條與A區(qū)平行（但F區(qū)不能與A區(qū)或B區(qū)的線條接觸） →燒去接種環(huán)上的殘菌

4.恒溫培養(yǎng)

標(biāo)記 ，將劃好線的平板裝入保鮮袋→向袋子里噴酒精→將平板放入溫箱中→設(shè)置溫度為37 ℃ →培養(yǎng)1~2天。

5.單挑菌落

良好的結(jié)果出現(xiàn)的D區(qū)域→獨立分布的單菌落在F區(qū)域→從F區(qū)挑選少量菌體至試管斜面→培養(yǎng)得到初步分離的純種。

6.清洗培養(yǎng)皿

將廢棄的帶菌平板在微波爐殺菌