細胞名稱：Hepa1-6(小鼠肝癌細胞)

細胞別稱：HEPA 1-6; Hepa-1-6; Hepa 1-6

細胞貨號:??SNL-118

生長特性:??貼壁

培養(yǎng)條件:?DMEM+10%FBS+1mM Sodium Pyruvate+1% P/S

培養(yǎng)環(huán)境:? 空氣，95%；二氧化碳 (CO2)，5%

細胞簡介:??Hepa1-6細胞是C57/L小鼠肝癌細胞系Hepa-1的衍生系。Hepa1-6細胞細胞表達白蛋白、甲胎蛋白（AFP）、α1抗胰蛋白酶、淀粉酶基因，經(jīng)檢測鼠痘病毒陰性。Hepa1-6細胞可以用于3D細胞培養(yǎng)和癌癥研究，也是一種合適的轉(zhuǎn)染宿主。

Hepa1-6細胞培養(yǎng)注意事項

01培養(yǎng)時細胞碎片可能會比較多

如果在密度較大時傳代，碎片數(shù)量也隨之增加。碎片較多時，通過PBS潤洗和換液清除碎片。

02細胞形態(tài)多變

這與細胞密度、實際培養(yǎng)條件和操作相關(guān)。Hepa1-6在低密度和高密度狀態(tài)下，形態(tài)有較大差異。低密度時細胞形態(tài)各異，呈多角形；高密度時細胞形態(tài)更均一，呈鋪路石狀。有少部分貼壁細胞呈發(fā)亮的球形，是正?，F(xiàn)象。

03細胞貼壁較弱

Hepa1-6細胞貼壁弱，消化時間偏短，注意控制消化時間。操作步驟見下文。

Hepa1-6細胞傳代方法

1. 準備所需的培養(yǎng)基、胰酶、PBS、離心管、培養(yǎng)瓶以及無菌槍頭等；（試劑提前預熱）

2.?抽走培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，加5mL PBS潤洗1-2遍，清除殘留培養(yǎng)基；

3.?盡量吸干潤洗的PBS后加1mL胰酶，搖晃使胰酶均勻覆蓋瓶底，放置培養(yǎng)箱37℃消化；

4.?消化時每隔1min拿出來觀察，鏡下可見細胞明顯回縮，輕拍培養(yǎng)瓶部分細胞開始脫落時立即加入3-4mL含血清的培養(yǎng)基終止消化，吹落貼壁的細胞；

Tips：注意控制吹打力度輕柔，吹打次數(shù)不可過多，避免機械損傷

4.?將細胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中，1000rpm，3min離心收集細胞；

5.?在新的培養(yǎng)瓶中加入適量新鮮培養(yǎng)基；（T25推薦10mL，T75推薦15mL）

6.?離心完成后，棄上清，加入適量新鮮培養(yǎng)基輕輕重懸吹散細胞，將細胞懸液均勻接種至培養(yǎng)瓶中，十字法或8字法混勻，然后放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，注意培養(yǎng)瓶蓋透氣；

Tips：推薦傳代比例1:2-1:4，首次傳代建議1:2。細胞生長至80%密度時即可傳代。

Hepa1-6細胞凍存方法

1.?配制程序性凍存液，準備相應數(shù)量凍存管并做好標記。

Tips：推薦凍存液配方92%FBS+8%DMSO或92%完全培養(yǎng)基+8%DMSO

2.?先將細胞按傳代步驟消化、離心、棄上清，獲得細胞沉淀；

3.?加入適量程序性凍存液輕輕重懸細胞，并將細胞懸液轉(zhuǎn)移至凍存管中；

4.?將凍存管放入程序性凍存盒，放入-80℃冰箱過夜；

5.?轉(zhuǎn)移凍存細胞至液氮保存并登記細胞保存位置

Tips：

• 液氮保存24h后建議復蘇一管檢測凍存細胞的活性，若活性合格即可長期保存。

• 程序性凍存液需要配合程序性凍存盒使用，若使用非程序凍存液請按產(chǎn)品說明書處理降溫過程。

• T25培養(yǎng)瓶長滿通常可凍存2-3管，10cm皿長滿通常可凍存3-4管。

• 凍存密度低將導致復蘇后細胞狀態(tài)不佳。

Hepa1-6細胞復蘇方法

1.?提前將水浴鍋預熱至37℃，培養(yǎng)基復溫至室溫或37℃，離心機設(shè)置好轉(zhuǎn)速；

2. 將細胞從液氮罐取中出，觀察管內(nèi)無液氮的情況下，捏住管蓋，將細胞凍存部分浸入水浴鍋迅速搖晃，細胞融化至米粒大小冰塊時終止水浴，融化過程不超過2min；

Tips：

• 若液氮或冰箱距離細胞房較遠，細胞需要放在干冰或冰盒上運送至細胞房。

• 凍存管在液氮長期保存過程中難免滲入液氮，取出細胞時震動不要過大。水浴前一定要觀察管內(nèi)是否存在液氮，若有液氮需靜置一會待液氮完全蒸發(fā)后再水浴。做好防護，避免凍存管炸開導致受傷。

• 水浴時使用一次性PE手套包住凍存管避免直接接觸水源，避免污染。

3.?直接將凍存管以離心力150g(約900rpm)左右離心2min，不同離心機具體轉(zhuǎn)速會有差異

4. 離心完成后棄上清，用預熱的培養(yǎng)基緩慢加入凍存管，輕柔重懸細胞后接種至培養(yǎng)瓶中，輕輕混勻后放入培養(yǎng)箱；

5. 復蘇24h后觀察并換液一次，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

Tips：整個細胞復蘇過程在盡可能5-10min內(nèi)完成。

Hepa1-6細胞收貨攻略

常溫細胞

1.?收貨后，拆開外包裝，用75%酒精消毒T25瓶表面，放37℃培養(yǎng)箱靜置4h以上；

2.?吸走大部分培養(yǎng)基并留10-12 mL，顯微鏡下拍照保存細胞狀態(tài)照片，觀察細胞密度，若細胞密度大于80%即可按比例傳代（首次傳代比例建議1：2），若細胞密度低于70%可以留10-12 mL繼續(xù)培養(yǎng)至細胞密度80%以上再進行傳代培養(yǎng)；

凍存細胞

1.?細胞收貨后盡快開箱檢查，若干冰充足可以取出細胞迅速置于-80℃冰箱（2-3天內(nèi)復蘇）短期保存或液氮中長期保存，若干冰完全揮發(fā)建議立即復蘇細胞并聯(lián)系銷售人員解決；

2.?凍存細胞建議盡快復蘇一管培養(yǎng)檢查，以免超出售后期，復蘇步驟參考復蘇攻略；

3.?復蘇一管細胞出現(xiàn)異常及時聯(lián)系銷售人員，在專業(yè)技術(shù)支持的指導下進行下一步操作；

Tips：

1.?細胞收貨出現(xiàn)漏液、培養(yǎng)瓶破損、干冰完全揮發(fā)等異常情況時，及時拍照聯(lián)系銷售人員；

2.?尚恩生物T25瓶發(fā)貨的細胞內(nèi)含對應細胞的完全培養(yǎng)基，可以收集原裝培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基經(jīng)1500rpm離心5min后，取上清于4℃保存用于后續(xù)細胞培養(yǎng)；