在之前的推文中有和大家介紹過Accell siRNA，一款不需要借助任何轉(zhuǎn)染試劑、可自行進(jìn)入細(xì)胞發(fā)揮作用的特殊siRNA，且可在幾乎所有細(xì)胞類型中成功遞送，保持細(xì)胞活力的同時(shí)，確保靶向基因的敲低效率。 ? 今天，我們帶著新鮮出爐的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，再次展現(xiàn)Accell siRNA在復(fù)雜模型中的遞送能力。

Accell siRNA是復(fù)雜模型的理想載體

1.?在很多模型中進(jìn)行有效的特異性靶點(diǎn)敲低，其中包括 ☆ 常見癌癥細(xì)胞系 ☆ 原代T細(xì)胞、NK細(xì)胞 ☆ 誘導(dǎo)多功能性干細(xì)胞（iPSC），iPS來源的神經(jīng)元 ☆ 腫瘤細(xì)胞球 2.?無需借助轉(zhuǎn)染試劑即可成功遞送 3.?始終維持較好的細(xì)胞活性 4.?適合在復(fù)雜細(xì)胞模型中進(jìn)行高通量陣列基因篩選

一步法操作，簡(jiǎn)單便捷

在不同的細(xì)胞系以及激活的T細(xì)胞中也可驅(qū)動(dòng)強(qiáng)有力的基因敲低，同時(shí)不影響細(xì)胞活性

人的原代NK細(xì)胞

1.?文獻(xiàn)支持：

研究人類自然殺傷（NK）細(xì)胞中的基因功能對(duì)于推進(jìn)NK細(xì)胞生物學(xué)的理解至關(guān)重要，有望為改善NK細(xì)胞療法鋪平道路。然而，NK細(xì)胞難以操作，傳統(tǒng)電穿孔、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染或病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)方式受遞送效率不穩(wěn)定、細(xì)胞活力下降的影響。因此，Accell siRNA的應(yīng)用價(jià)值更加凸顯，他可自行進(jìn)入NK細(xì)胞，輕松完成NK細(xì)胞功能性基因分析。在這個(gè)過程中，無血清Accell siRNA遞送培養(yǎng)基可強(qiáng)烈促進(jìn)siRNA的吸收，也可添加低濃度的重組人IL-15作為促生長因子，且不會(huì)損害NK細(xì)胞的活力

[1]

。

實(shí)驗(yàn)操作流程示意圖

Accell B2M siRNA處理CD3-?CD56+ NK細(xì)胞后，β2m和HLA平均熒光強(qiáng)度

iPSC, iPS-neurons

1.?在誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞中驅(qū)動(dòng)有效基因敲低，同時(shí)不影響細(xì)胞活力:

2.?神經(jīng)元分化： ☆ 神經(jīng)元是有絲分裂后的細(xì)胞：難以構(gòu)建細(xì)胞系

☆ 分化產(chǎn)生異質(zhì)細(xì)胞群：許多不同的神經(jīng)元亞群 ☆ 受限的遞送方法：在調(diào)控基因表達(dá)方面具有挑戰(zhàn)性

實(shí)驗(yàn)操作流程示意圖

3.?文獻(xiàn)支持： MAP4K4是促絲裂原活化蛋白激酶家族中的一員，使用Accell siRNA作用IPS-神經(jīng)元，抑制MAP4K4的表達(dá)，從而增加神經(jīng)突的長度

[2]

。

Accell siRNA成功敲低IPS-神經(jīng)元中的MAP4K4的表達(dá)

MAP4K4敲低的細(xì)胞，神經(jīng)突的長度顯著增加

3D腫瘤細(xì)胞球模型

1.?使用Accell siRNA在無基質(zhì)膠的腫瘤細(xì)胞球模型中進(jìn)行靶向基因的敲低：在HCT-116, LS174T中進(jìn)行PPIB敲低，qPCR和WB驗(yàn)證結(jié)果如下：

實(shí)驗(yàn)操作流程示意圖

在低血清培養(yǎng)基、Accell專用培養(yǎng)基中均能發(fā)揮較好基因敲低效果

2.?使用Accell siRNA在基質(zhì)膠包埋的腫瘤細(xì)胞球模型中進(jìn)行靶向基因的敲低：

實(shí)驗(yàn)操作流程示意圖

可通過補(bǔ)加Accell siRNA延長基因敲低作用時(shí)效

3.?可同時(shí)在3D腫瘤細(xì)胞球中進(jìn)行多個(gè)基因敲低：

☆?高達(dá)80%靶向基因的敲低

☆ 多基因敲低和單基因敲低一樣高效

☆ 即使是序列同源性很高的基因，也能最小化非靶向基因的敲低

優(yōu)寧維好物推薦

Reference:

[1]?Momayyezi P, Malmberg KJ, Hammer Q. Small Interfering RNA Delivery Into Primary Human Natural Killer Cells for Functional Gene Analyses. Curr Protoc. 2022;2(11):e613. doi:10.1002/cpz1.613

[2]?Wu C, Watts ME, Rubin LL. MAP4K4 Activation Mediates Motor Neuron Degeneration in Amyotrophic Lateral Sclerosis. Cell Rep. 2019;26(5):1143-1156.e5. doi:10.1016/j.celrep.2019.01.019

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