剛接觸細(xì)胞培養(yǎng)的小白，生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)理論知識(shí)一堆，但真正到操作環(huán)節(jié)手忙腳亂，一堆“黑話”一頭霧水，常常不知從哪里下手。

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01為什么要進(jìn)行細(xì)胞體外培養(yǎng)

現(xiàn)代生物技術(shù)一般認(rèn)為包括基因工程技術(shù)、細(xì)胞工程技術(shù)、酶工程技術(shù)和發(fā)酵工程技術(shù)，而這些技術(shù)的發(fā)展幾乎都與細(xì)胞培養(yǎng)有密切關(guān)系。

醫(yī)藥領(lǐng)域（基因工程藥物或疫苗在研究生產(chǎn)過(guò)程中很多是通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)來(lái)實(shí)現(xiàn)）、基因工程（乙肝疫苗很多是以 CHO 細(xì)胞作為載體）、細(xì)胞工程（雜交瘤單克隆抗體，完全是通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)來(lái)實(shí)現(xiàn)），既使是現(xiàn)在飛速發(fā)展的基因工程抗體也離不開細(xì)胞培養(yǎng)；正在倍受重視的基因治療、體細(xì)胞治療也要經(jīng)過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程才能實(shí)現(xiàn)，發(fā)酵工程和酶工程有的也與細(xì)胞培養(yǎng)密切相關(guān)。

總之，細(xì)胞培養(yǎng)在整個(gè)生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展中起到了很關(guān)鍵的核心作用。

02細(xì)胞培養(yǎng)的基本概念

細(xì)胞培養(yǎng)：將活細(xì)胞(尤其是分散的細(xì)胞) 在體外進(jìn)行培養(yǎng)的方法成為細(xì)胞體外培養(yǎng)。狹義的細(xì)胞體外培養(yǎng)主要是指分離（散）細(xì)胞培養(yǎng)，廣義的細(xì)胞體外培養(yǎng)還包括單（個(gè)）細(xì)胞培養(yǎng)又稱克隆（clone），是指單個(gè)細(xì)胞通過(guò)有絲分裂形成的細(xì)胞群體。一個(gè)細(xì)胞克隆中的所有細(xì)胞均來(lái)源于同一個(gè)祖先細(xì)胞。

原代細(xì)胞：初次培養(yǎng)。即培養(yǎng)物一經(jīng)接種到培養(yǎng)皿中就不再分割，任其生長(zhǎng)繁殖而不更換生長(zhǎng)器皿。

傳代培養(yǎng)：隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)、細(xì)胞不斷分裂繁殖，細(xì)胞之間相互接觸會(huì)發(fā)生接觸性抑制，生長(zhǎng)速度逐漸減慢甚至停止。培養(yǎng)器皿中營(yíng)養(yǎng)物逐漸不足，代謝產(chǎn)物不斷累積，不利于細(xì)胞繼續(xù)生長(zhǎng)。在這種情況下，都需要將培養(yǎng)物分割成小的部分，重新接到培養(yǎng)器皿中進(jìn)行再培養(yǎng)。

細(xì)胞系：原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)首次傳代培養(yǎng)后所繁殖的細(xì)胞群體。狹義的是指可連續(xù)傳代的細(xì)胞，廣義是指可傳代的細(xì)胞。正常細(xì)胞通常只能分裂有限的次數(shù)，隨后就會(huì)喪失增殖的能力，這是一個(gè)由遺傳決定的事件，被稱為衰老。這種細(xì)胞系被稱為有限細(xì)胞系；一些細(xì)胞系會(huì)通過(guò)被稱為轉(zhuǎn)化的過(guò)程變?yōu)橛郎约?xì)胞系，這一過(guò)程可自然發(fā)生，也可經(jīng)化學(xué)或病毒誘導(dǎo)發(fā)生。有限細(xì)胞系發(fā)生轉(zhuǎn)化獲得無(wú)限分裂能力后，就成為連續(xù)細(xì)胞系。

03細(xì)胞培養(yǎng)的環(huán)境

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的主要要求是需要維持細(xì)胞培養(yǎng)工作區(qū)域處于無(wú)菌狀態(tài)。獲得無(wú)菌條件的最為簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)的方式就是使用細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥。

細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥大小應(yīng)足夠一人使用，內(nèi)部和外部均易于清潔，具有充足的照明，使用舒適，不會(huì)導(dǎo)致體位不便。保持細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥內(nèi)工作空間整潔有序，將所有物品置于直視范圍內(nèi)。向放入細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥內(nèi)的所有物品噴灑 70% 乙醇，擦拭清潔，進(jìn)行消毒。

細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥內(nèi)物品的擺放一般遵循以下右手使用習(xí)慣，并可根據(jù)特殊實(shí)驗(yàn)中增加的物品進(jìn)行相應(yīng)的改動(dòng)。

? 在通風(fēng)櫥中部開闊區(qū)域放置細(xì)胞培養(yǎng)耗材

點(diǎn)擊查看耐思培養(yǎng)耗材

? 移液器械及耗材置于右前方易于取用的地方

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? 試劑和培養(yǎng)基置于右后方，便于吸取

點(diǎn)擊查看耐思生物試劑

? 試管架置于中后部，用于固定其他試劑

? 小型容器置于左后部，用于盛放廢液

說(shuō)在最后

養(yǎng)細(xì)胞是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)

希望大家能快速掌握這門技術(shù)！

耐思陪你共同成長(zhǎng)！