亞硝胺雜質(zhì)已成為懸在藥監(jiān)部門與生產(chǎn)商頭頂?shù)倪_(dá)摩克利斯之劍，威脅著上市藥品的質(zhì)量與患者的用藥安全。雖然亞硝胺雜質(zhì)（Nitrosamines）也有可能是基因毒性雜質(zhì)（Genotoxic Impurities），但基因毒性雜質(zhì)和亞硝胺雜質(zhì)是單獨(dú)的兩個(gè)評(píng)估模塊，他們有各自細(xì)分的法規(guī)要求，亞硝胺雜質(zhì)的控制更嚴(yán)格。

亞硝胺雜質(zhì)還是要研發(fā)人員基于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估（評(píng)估幾大要素包括工藝本身、回收溶劑、物料，包材，水等）、ICH限度計(jì)算以及三批檢測結(jié)果來最終制定控制策略，具體如下所述：

一、雜質(zhì)限度制定

1 僅有一種（亞硝胺）雜質(zhì)：按照限度（AI/MDD）進(jìn)行質(zhì)量控制

①一般亞硝胺雜質(zhì)/非NDSRIs：

▲表1-主流國家官方亞硝胺限度要求

②原料藥亞硝胺相關(guān)雜質(zhì)NDSRIs：

對(duì)于NDSRIs，F(xiàn)DA推薦了一種根據(jù)預(yù)測的致癌效力分類分配推薦限度的方法，如下表所示：

▲表2-NDSRIs物種預(yù)測致癌效力分類和相關(guān)AI限度

關(guān)于上表中NDSRIs預(yù)測致癌效力分類方法和相關(guān)AI推薦限度確認(rèn)流程如下圖所示：

注：上述決策樹中α-C及下文β-C含義如下圖：

▲圖1-NDSRIs致癌效力分類預(yù)測和確認(rèn)推薦限度流程圖

上圖中致癌效力評(píng)分由如下3個(gè)部分組成：α-氫評(píng)分（表3）+失活特征評(píng)分（所有出現(xiàn)的結(jié)構(gòu)特征得分之和） （表4）+激活特征評(píng)分（所有出現(xiàn)的結(jié)構(gòu)特征得分之和） （表5）。

▲表3-每個(gè)α-碳上的氫原子計(jì)數(shù)和相應(yīng)的α-H得分情況

注：當(dāng)亞甲基α-碳不是乙基的一部分時(shí)，得3分。當(dāng)亞甲基α-碳是乙基的一部分，得2分。

▲表4-失活特征及相關(guān)評(píng)分列表

注：*不包括N-亞硝基位于吡咯烷環(huán)、至少含有一個(gè)硫原子的六元環(huán)或嗎啉環(huán)（全部分開計(jì)算）中的例子。

**不包括羧酸和芳基（單獨(dú)計(jì)算），以及酮（數(shù)據(jù)沖突）。其它的吸電子基團(tuán)示例僅限于Cross KP和Ponting DJ, 2021, Developing Structure-Activity Relationships for N-Nitrosamine Activity, Comput Toxicol, 20:100186中描述的那些，文獻(xiàn)中它們被稱為“β-碳吸電子基團(tuán)”。

***β-碳必須處于sp3雜化狀態(tài)，這一規(guī)則才適用。

▲表5-激活特征和相關(guān)分?jǐn)?shù)列表

舉例說明：

案例1 N -亞硝基-l-奈比洛爾

效力得分=1+2+1=4，效力分類4級(jí)對(duì)應(yīng)的AI推薦限度為1500ng/天。

案例2 N -亞硝基-氯胺酮

▲圖2-N-亞硝基-氯胺酮致癌效力分類確認(rèn)思路

其它FDA公布的NDSRIs推薦AI限度詳見附件1（如需要附件，可轉(zhuǎn)發(fā)文章，憑借截圖聯(lián)系注冊圈管理員獲取）。

2 多于一種（亞硝胺）雜質(zhì)

EMA：根據(jù)決策樹兩種控制方式（①所有檢出的N-亞硝胺的總?cè)諗z入量不超過所檢出的限度最低的N-亞硝胺的AI值；②各亞硝胺雜質(zhì)實(shí)際檢出值與其限度比值的總和不大于100%）；

FDA：如果發(fā)現(xiàn)不止一種亞硝胺雜質(zhì)（NDSRIs和/或小分子亞硝胺），且亞硝胺的總水平超過了基于最大日劑量的藥品中最強(qiáng)效亞硝胺（限度最低的AI），則持有人應(yīng)聯(lián)系FDA當(dāng)局。如果個(gè)別亞硝胺的推薦AI限度差異很大，F(xiàn)DA鼓勵(lì)持有人提出一個(gè)不同于推薦的檢測到的最有效的亞硝胺雜質(zhì)AI的亞硝胺限度，并與FDA當(dāng)局聯(lián)系確認(rèn)。

二、控制策略

FDA：原控制策略超過LOQ（0.03或0.02根據(jù)MDD）ppm需要報(bào)告；

法規(guī)來源：2021-02，Control of Nitrosamine Impurities in Human Drugs （Guidance for Industry）：

The LOQ may be considered the reporting threshold for nitrosamine impurities （i.e., the limit above which an impurity should be reported in the certificate of analysis）.

2023年8月更新后：NDSRIs限度根據(jù)已有毒理學(xué)數(shù)據(jù)已經(jīng)放寬，但暫未明確更多配套控制策略。

法規(guī)來源：2023-08，Recommended Acceptable Intake Limits for Nitrosamine Drug Substance- Related Impurities （NDSRIs） Guidance for Industry

EMA：方法靈敏度做到限度的30%以下，并三批商業(yè)批數(shù)據(jù)未檢出，API中定期檢測；方法LOQ做到限度的10%以下，并三批商業(yè)批數(shù)據(jù)未檢出，則可以免檢。

法規(guī)來源：

Questions and answers for marketing authorisation holders/applicants on the CHMP Opinion for the Article 5（3）of Regulation （EC）No 726/2004 referral on nitrosamine impurities in human medicinal products ：

If quantitative testing is performed as a routine control, the LoQ should be s of the acceptable limit based on the relevant acceptable intake （AI）for the respective nitrosamine impurity;

If quantitative testing is performed to justify skip testing, the LoQ of the analytical procedure employed should be s 30%of the acceptable limit based on the AI.

三、亞硝胺雜質(zhì)研究決策樹

▲圖3-亞硝胺雜質(zhì)研究決策樹

對(duì)于亞硝胺雜質(zhì)的研究需要我們遵循質(zhì)量源于設(shè)計(jì)的理念，在項(xiàng)目開發(fā)過程中就充分將其考慮在內(nèi)，比如：在工藝路線開發(fā)的時(shí)候，應(yīng)盡可能減少或避免可能引入可能攜帶亞硝基試劑的溶試劑的使用，并對(duì)其制定嚴(yán)格的控制策略，包括供應(yīng)商審計(jì)、質(zhì)量保證協(xié)議、工藝路線清除設(shè)計(jì)等，都應(yīng)該進(jìn)行全面深入的設(shè)計(jì)。樣品的檢測在工藝路線確定以后，就應(yīng)該完成相關(guān)分析方法的開發(fā)，對(duì)其制備樣品進(jìn)行檢測和多批次數(shù)據(jù)收集，為未來限度制定提供充分的依據(jù)。

各國藥監(jiān)機(jī)構(gòu)對(duì)于亞硝胺雜質(zhì)的關(guān)注度日趨重視，國內(nèi)外對(duì)于亞硝胺雜質(zhì)的法規(guī)也日趨完善，尤其是原料藥相關(guān)的亞硝胺雜質(zhì)（NDSRIs）。NDSRI亞硝胺雜質(zhì)通常沒有明確確定的允許攝入量AI，為此FDA和EMA給NDSRI設(shè)定了苛刻的AI值。如FDA指定的臨時(shí)AI為26.5ng/天；EMA為新的NDSRI設(shè)定了18ng/天的臨時(shí)AI。隨后EMA引入了178ng/天的臨時(shí)AI，直到數(shù)據(jù)可以證明其確切的AI。這種臨時(shí)AI的使用時(shí)間為1年過渡期。這種限度設(shè)定缺乏合理性，給藥企帶來了很大的挑戰(zhàn)難度。

2023年7月底8月初，EMA及FDA先后發(fā)布了更加合理化的亞硝胺的控制策略，F(xiàn)DA在官方發(fā)布了基于上述控制策略一系列NDSRIs的臨時(shí)AI限度。相對(duì)于上一版的總雜0.03ppm的控制要求，已經(jīng)有了很大的改善。關(guān)于質(zhì)量控制策略，企業(yè)也有了更多的發(fā)言權(quán)和參與機(jī)會(huì)。隨著國內(nèi)外研究的不斷深入，毒理數(shù)據(jù)的日趨完善，將來有望改善亞硝胺風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、限度、研究控制策略及各國藥監(jiān)機(jī)構(gòu)監(jiān)管的日趨明朗和合理化。

參考文獻(xiàn)

1. Questions and answers for marketing authorization holders/applicants on the CHMP Opinion for the Article 5（3） of Regulation （EC） No 726/2004 referral on nitrosamine impurities in human medicinal products，EMA/409815/2020 Rev.17；

2. Control of Nitrosamine Impurities in Human Drugs Guidance for Industry，F(xiàn)DA，F(xiàn)ebruary 2021，Pharmaceutical Quality/ Manufacturing Standards/ Current Good Manufacturing Practice （cGMP，Revision 1）.

3. Nitrosamine impurities in medicines -Information for sponsors and manufacturers, TGA，20 July 2022.

4. WHO Information Note ：UPDATE ON NITROSAMINE IMPURITIES，WHO，20 November 2019.

5. ICH. M7（R1） Assessment and control of DNA reactive （mutagenic） impurities in pharmaceuticals of limit potential carcinogenic risk [EB/OL］.（2017-03-31）。

6. Workflows for Quality risk management of nitrosamine risks in medicines ,EPIFA，Version 2.0 ，Aug 2022.

7. Recommended Acceptable Intake Limits for Nitrosamine Drug Substance- Related Impurities （NDSRIs） Guidance for Industry，F(xiàn)DA, 04 August，2023.

8. Questions and answers for marketing authorisation holders/applicants on the CHMP Opinion for the Article 5（3）of Regulation （EC）No 726/2004 referral on nitrosamine impurities in human medicinal products，EMA，28 July，2023.

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