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前列腺素 E2快速檢測ELISA試劑盒檢測原理丨開曼生物

2022-07-12 15:08 作者:艾美捷  | 我要投稿

背景:

前列腺素E2是多種細(xì)胞內(nèi)花生四烯酸的主要代謝產(chǎn)物,象類花生酸一樣,不能在胞內(nèi)儲存.當(dāng)細(xì)胞被激活或者提供自由花生四烯酸后,PEG2才能被合成,并釋放到胞外;在體內(nèi),通過15-脫氫酶途徑,PEG2能快速轉(zhuǎn)變成為無活性的13,14-dihydro-15-keto PGE2.PEG2的半衰期為30秒,在正常血液中的含量為3-12pg/ml.

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艾美捷?開曼生物?前列腺素E2快速檢測ELISA試劑盒檢測原理

本試驗(yàn)基于PGE2和PGE2-乙酰膽堿酯酶(AChE)結(jié)合物(PGE2示蹤劑)之間的競爭,以獲得限量的PGE2單克隆抗體。由于PGE2示蹤劑的濃度在PGE2濃度變化時保持恒定,因此能夠結(jié)合到PGE2單克隆抗體的PGE2示蹤劑的量將與孔中的PGE2濃度成反比。該抗體-PGE2復(fù)合物與先前連接到微孔的山羊多克隆抗小鼠IgG結(jié)合。清洗培養(yǎng)板以去除任何未結(jié)合的試劑,然后將Ellman試劑(含有乙酰膽堿酯酶基質(zhì))添加到孔中。該酶反應(yīng)產(chǎn)物具有明顯的黃色,并在412 nm處強(qiáng)烈吸收。通過分光光度法測定的該顏色的強(qiáng)度與結(jié)合到孔中的PGE2示蹤劑的量成正比,該示蹤劑的量與孵化期間孔中存在的游離PGE2的量成反比;該過程的示意圖如下圖所示。

圖:乙酰膽堿酯酶的示意圖

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艾美捷?開曼生物?前列腺素E2快速檢測ELISA試劑盒特點(diǎn)

已經(jīng)證明能在尿液,血液或者培養(yǎng)基樣本中使用.一般情況下,尿液或者培養(yǎng)基樣本需稀釋后,直接用于試劑盒檢測;對于血液樣本,需要預(yù)先純化,因?yàn)镻EG2在血液樣本中會很快代謝掉.

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艾美捷?開曼生物?前列腺素E2快速檢測ELISA試劑盒檢測標(biāo)準(zhǔn):

用1.0 ml ELISA緩沖液重新配制PGE2 Express ELISA標(biāo)準(zhǔn)品內(nèi)容物。該溶液(散裝標(biāo)準(zhǔn)品)的濃度將為10納克/毫升。儲存在4°C下;該標(biāo)準(zhǔn)將穩(wěn)定長達(dá)四周。

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注:如果測定未用ELISA緩沖液稀釋至少10倍的培養(yǎng)基樣品,應(yīng)使用培養(yǎng)基代替ELISA緩沖液稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品。

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制備用于ELISA的標(biāo)準(zhǔn)品:獲得八個干凈的試管,并將其編號為#1到#8。等分800μl ELISA緩沖液至試管#1和500μl ELISA緩沖液至試管#2-8。將200微升散裝標(biāo)準(zhǔn)品(10納克/毫升)轉(zhuǎn)移到試管#1中,并徹底混合。標(biāo)準(zhǔn)曲線上的個點(diǎn),該標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為2納克/毫升(2000微克/毫升)。通過從管#1中去除500μl并放置在管#2中連續(xù)稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液;徹底混合。接下來,從管#2中取出500μl,放入管#3中;徹底混合。對管道4-8重復(fù)此過程。這些稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的儲存時間不應(yīng)超過24小時。


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