小鼠D-二聚體ELISA試劑盒檢測原理
二聚體(D-Dimer)是一種纖維蛋白降解產(chǎn)物,是在血凝塊被纖維蛋白溶解作用降解后存在于血液中的一個小蛋白質(zhì)片段。之所以如此命名,是因為它是由纖維蛋白的兩個D片段通過交聯(lián)連接而成的蛋白。
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當(dāng)凝血級聯(lián)蛋白被激活時,即通過與受損血管壁接觸并暴露于組織空間中的膠原蛋白(內(nèi)在途徑),或通過組織激活因子激活因子VII(外在途徑),即形成血凝塊或血栓。兩種途徑均導(dǎo)致凝血酶的產(chǎn)生,凝血酶是一種將可溶性血蛋白纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白的酶,該蛋白聚集成蛋白原纖維。凝血酶產(chǎn)生的另一種酶是因子XIII,然后在D片段位點交聯(lián)纖維蛋白原,形成一種不溶性凝膠,作為血凝塊形成的支架。
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循環(huán)酶纖溶酶是纖維蛋白溶解的主要酶,可在許多地方裂解纖維蛋白凝膠。所得的片段“高分子量聚合物”被纖溶酶多次消化,形成中間產(chǎn)物,然后形成小聚合物(纖維蛋白降解產(chǎn)物或FDPs)。但是,兩個D片段之間的交聯(lián)仍保持完整,當(dāng)纖維蛋白片段被充分消化時,它們會暴露在表面上。

二聚體通常不存在于人血漿中,除非已激活凝血系統(tǒng),例如由于血栓形成或彌散性血管內(nèi)凝血。D-二聚體濃度可以通過血液檢查確定,以幫助診斷血栓形成。自二十世紀(jì)九十年代問世以來,它已成為對可疑血栓形成疾病患者進(jìn)行的一項重要測試。另外,它還用于診斷血液疾病彌散性血管內(nèi)凝血。
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D-二聚體的定量檢測在其陰性結(jié)果中占有重要地位。D-二聚體檢測陰性可用于排除肺栓塞、深靜脈血栓形成、腦卒中和播散性血管內(nèi)凝血等疾病。雖然D-二聚體水平升高可以提示這些疾病,但陽性結(jié)果并不是結(jié)論性的,需要進(jìn)一步的醫(yī)學(xué)調(diào)查——結(jié)果并不能說明D-二聚體水平高的位置或原因。此外,也很難對D-二聚體的?"正常?"水平進(jìn)行分類,因此應(yīng)用通常依賴于陰性測試。D-二聚體分析在整個凝血及其相關(guān)疾病(包括血栓形成)的研究中非常普遍。不斷需要高準(zhǔn)確度和靈敏度的檢測方法來確定樣品中的較精確濃度。
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小鼠D-二聚體ELISA試劑盒檢測原理

該試劑盒基于競爭性酶聯(lián)免疫吸附測定技術(shù)。?將抗體預(yù)包被到96孔板上。 將標(biāo)準(zhǔn)品,測試樣品和生物素偶聯(lián)試劑添加到孔中并孵育。在預(yù)先包被的抗體上,生物素標(biāo)記的D-二聚體與未標(biāo)記的D-二聚體之間發(fā)生競爭性抑制反應(yīng)。 然后加入結(jié)合了HRP的試劑,并孵育整個平板。在每個階段使用洗滌緩沖液去除未結(jié)合的物質(zhì)。TMB底物用于定量HRP酶促反應(yīng)。添加TMB底物后,只有含有足夠D-二聚體的孔才會產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物,然后在加入酸性終止溶液后變?yōu)辄S色。黃色的強(qiáng)度與板上的D-二聚體含量成反比。在酶標(biāo)儀中于450 nm處用分光光度法測量OD,由此可計算D-二聚體的濃度。

OD值的標(biāo)曲
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