第一次作業(yè)

1.蛋白質(zhì)酸水解與堿水解各有什么特點(diǎn)？

答：酸水解：Trp完全被沸酸破壞，小部分Ser和Thr被分解。同時(shí)，Asn和GIn的酰胺基被水解。

? ?堿水解：由于水解過程中許多氨基酸都受到不同程度的破壞，產(chǎn)率不高。

2.二十種基本氨基酸中，哪種氨基酸在茚三酮反應(yīng)中呈現(xiàn)黃色？哪種氨基酸在生理PH值溶液中有明顯的緩沖能力？

答：脯氨酸與茚三酮反應(yīng)時(shí)釋放氨氣，直接生成亮黃色物質(zhì)，組氨酸在生理PH值溶液中有明顯的緩沖能力。

3.試述茚三酮反應(yīng)的基本原理。

答：茚三酮在弱堿性溶液中與氨基酸共熱，引起氨基酸脫氨、脫羧反應(yīng)，最后于還原茚三酮發(fā)生作用，生成紫色物質(zhì)。Rf值從原點(diǎn)到氨基酸停留點(diǎn)的距離與原點(diǎn)至溶劑前沿的距離之比，即相對(duì)遷移率。

4.試述Ellman試劑測(cè)定非蛋白硫基的基本原理。

答：Cys與硫雙-（硝基苯甲酸）反應(yīng)，形成硫硝基苯甲酸。在PH>8.0時(shí)，在412nm處有強(qiáng)烈的光吸收，據(jù)此可應(yīng)用分光光度計(jì)測(cè)定蛋白質(zhì)中游離態(tài)SH含量。

第二次作業(yè)

1.應(yīng)用分光光度計(jì)測(cè)量蛋白質(zhì)含量的原理是什么？

答：實(shí)驗(yàn)原理是從溶液中物質(zhì)的分子或離子對(duì)紫外和可見光譜區(qū)輻射能的選擇性吸收為基礎(chǔ)而建立起來的一種分析方法。紫外光：10-400nm,可見光：400-780nm。

2.試述柱層析的基本原理

答：柱層析法的分離原理是根據(jù)物質(zhì)在硅膠上的吸附不同而使各組分分離。一般情況下極性較大的物質(zhì)易被硅膠吸附，急性較弱的物質(zhì)不易被硅膠吸附。當(dāng)采用溶劑洗脫時(shí)，發(fā)生一系列吸附—解吸—再吸附—在解吸的過程，吸附力較強(qiáng)的組分移動(dòng)的距離小后出柱，吸附力較弱的組分，移動(dòng)的距離大先出柱。

3.如何應(yīng)用離子交換層析法分離氨基酸混合物？

答：層析柱中填充的是離子交換樹脂，是具有酸性或堿性集團(tuán)的人工合成聚苯乙烯-二乙烯等不溶性高分子化合物，能吸收水膨脹，極性集團(tuán)上的離子能與溶液中的離子起交換作用，而非極性的樹脂本能物性不變。

4.何為雙縮脲反應(yīng)？有何應(yīng)用意義？

答：雙縮脲反應(yīng)：含有兩個(gè)或兩個(gè)以上的肽鍵化合物與硫酸銅堿性溶液發(fā)生雙縮脲反應(yīng)，生成紫紅色或藍(lán)紫色復(fù)合物。意義：該反應(yīng)為肽和蛋白質(zhì)所特有的而為氨基酸所沒有的一種顏色反應(yīng)，可用于測(cè)定蛋白質(zhì)含量。

5.凱氏定氮法的基本原理是什么？

答：有機(jī)含氮化合物與濃硫酸共熱消化，氮轉(zhuǎn)化為氨再與硫酸結(jié)合成硫酸氨，硫酸銨與強(qiáng)堿反應(yīng)放出氨。將氨蒸餾到過量的標(biāo)準(zhǔn)無機(jī)溶液中，并用標(biāo)準(zhǔn)堿溶液進(jìn)行滴定。根據(jù)測(cè)得的氨量計(jì)算樣品的總氨量，既蛋白質(zhì)=蛋白氮/16%。

第三次作業(yè)

1.Sanger試劑是什么？如何測(cè)定多肽鏈氨基端第一個(gè)氨基酸？

答：Sanger試劑是2，4-二硝基氟苯。測(cè)定N端氨基酸的方法為二硝基氟苯與多肽鏈的游離末端氨基反應(yīng)，生成DNP-多肽，經(jīng)酸水解生成黃色DNP-AA和游離的多種氨基酸。其中DNP-AA分離后與茚三酮顯色或HPLC等方法即可測(cè)定其氨基酸類型。

2.如何斷裂二硫鍵？如何穩(wěn)定和保巰基？

答：斷裂二硫鍵的方法：可通過甲酸氧化法，巰基化合物（如DDT還原法、β巰基乙醇）打開二硫鍵。保護(hù)巰基的方法：又用碘乙酸或碘乙酰胺等試劑與巰基反應(yīng)，防止其再次被氧化。

3.如何利用重疊肽確定多肽鏈的順序？

答：1.用不同的酶處理同一條肽鏈段，形成兩套或者幾套短肽鏈，這樣就產(chǎn)生了不同切口的短肽鏈。這幾套肽鏈形成的不同切口重疊的部分稱為重疊肽。2.借助重疊肽可以確定肽段在原肽鏈中的次序，拼湊出整個(gè)肽鏈的氨基酸順序。3.若兩套肽段還不能提供必要的重疊肽，則需要采用第三種或第四種斷裂方法進(jìn)行裂解，確保足夠的重疊肽。

4.何為酰胺平面？為什么多肽主鏈的折疊受到空間位阻的限制？

答：酰胺平面：肽鍵中的四個(gè)原子，碳?xì)溲醯退噜彽膬蓚€(gè)a碳原子處于同一平面，形成了酰胺平面。多肽主鏈的折疊受到空間位阻的限制的原因：1.肽鍵帶有雙鍵的性質(zhì)，主鏈上1/3的鍵不同自由旋轉(zhuǎn)。2.不是任意二面角所決定的肽鏈構(gòu)象都是立體化學(xué)所允許的。3.兩個(gè)肽平面旋轉(zhuǎn)時(shí)受到a-碳原子上側(cè)鏈R基空間位阻（大小、親水性、電荷相吸或排斥等）的影響。

第四次作業(yè)

1.蛋白質(zhì)二級(jí)構(gòu)象有哪些主要特征？

答：蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)是指多肽鏈主鏈原子的局部空間排布，包括側(cè)鏈的構(gòu)象，它主要有a-螺旋，β-折疊，β-轉(zhuǎn)角和無規(guī)卷曲四種。

（1）在a-螺旋結(jié)構(gòu)中，多肽鏈主鏈圍繞中心軸以右手螺旋方式旋轉(zhuǎn)上升，每隔3.6個(gè)氨基酸殘基上升一圈，氨基酸殘基的側(cè)鏈伸向螺旋外側(cè)。每個(gè)氨基酸殘基的壓亞氨基上的氫與第四個(gè)氨基酸殘基羧基上的氧形成氫鍵，以維持a-螺旋的穩(wěn)定。（2）在β-折疊結(jié)構(gòu)中，多肽鏈的肽鍵平面折疊成鋸齒狀結(jié)構(gòu)，側(cè)鏈交錯(cuò)位于鋸齒狀結(jié)構(gòu)的上下方，兩條以上肽鏈或一條肽鏈內(nèi)的若干肽段平行排列，通過鏈間羧基氧和亞基氫形成氫鍵，維持β-折疊構(gòu)象的穩(wěn)定。（3）在球狀蛋白質(zhì)分子中，肽鏈主鏈常出現(xiàn)180℃回折，回折部分稱為β-轉(zhuǎn)角，β-轉(zhuǎn)角通常由四個(gè)氨基酸殘基組成，第二個(gè)殘基常為輔氨基。（4）無規(guī)卷曲是指肽鏈中沒有確定規(guī)律的結(jié)構(gòu)。

2.何謂超二級(jí)結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)域和功能域？

答：（1）超二級(jí)結(jié)構(gòu)：由若干相鄰的二級(jí)結(jié)構(gòu)元件組合在一起，彼此相互作用，形成有規(guī)則的二級(jí)結(jié)構(gòu)組合，以充當(dāng)三級(jí)結(jié)構(gòu)的構(gòu)建。（2）結(jié)構(gòu)域：三級(jí)結(jié)構(gòu)中相對(duì)獨(dú)立的局部折疊區(qū)。（3）功能域：蛋白質(zhì)分子中能夠獨(dú)立存在的功能單位，可以由一個(gè)或多個(gè)結(jié)構(gòu)域組成。

3.球狀蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)有哪些主要特征？

答：（1）均含有多種二級(jí)結(jié)構(gòu)元件。

（2）球狀蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)具有明顯的折疊層次。（3）球狀蛋白質(zhì)是緊密的球狀和橢圓狀實(shí)體。（4）球狀蛋白疏水側(cè)鏈埋于分子內(nèi)部親水側(cè)鏈暴露于表面與水分子親和。（5）球狀蛋白分子表面往往具有空穴，凹槽，裂溝，是結(jié)合底物等配體和行使生物功能的活性部位。該部位密集輸水氨基酸側(cè)鏈，創(chuàng)造了催化反應(yīng)所必需的疏水環(huán)境，既低價(jià)區(qū)域。

4.何謂蛋白質(zhì)變性？

答：蛋白質(zhì)變性是蛋白質(zhì)在受到物化影響，生物活性喪失，溶解度降低，不對(duì)稱性增高以及其他的物理化學(xué)常數(shù)的變化，其本質(zhì)是次級(jí)鍵的破壞，共價(jià)鍵不破壞。

第五次作業(yè)

1.尿素或鹽酸胍變性蛋白質(zhì)的可能機(jī)制是什么？

答：機(jī)制：競(jìng)爭(zhēng)氫鍵，增加了非極性基團(tuán)在水中的溶解度，降低了維持蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)的疏水相互作用。

2.鐮狀細(xì)胞貧血癥的致病機(jī)理是什么？

答：（1）鐮狀細(xì)胞貧血是血紅蛋白突變引起的。（2）鐮狀細(xì)胞血紅蛋白氨基酸序列的細(xì)微改變Hbs和HbA的a鏈?zhǔn)峭耆嗤?，但前者的β鏈從N端開始的第六位氨基酸殘基發(fā)生改變，由Glu突變?yōu)閂al。

3.什么是多克隆抗體和單克隆抗體？如何制備單克隆抗體？

答：?jiǎn)慰寺】贵w：由同一B淋巴細(xì)胞群體在應(yīng)答同一抗原時(shí)合成并分泌的抗體，均一且只識(shí)別抗原的同一表位。多克隆抗體：多個(gè)不同B淋巴細(xì)胞在應(yīng)答同一種抗原時(shí)產(chǎn)生的可特異性結(jié)合該抗原不同表位的抗體混合物，這些抗體分子的組成之間存在一定差異。

制備單克隆抗體的基本步驟：（1）用感興趣的抗原免疫小鼠脾臟，制成B淋巴細(xì)胞懸液。（2）繁殖小鼠骨髓瘤細(xì)胞。（3）將上述B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞系。（4）將該細(xì)胞系轉(zhuǎn)移至雜交瘤細(xì)胞才能生長(zhǎng)的選擇性培養(yǎng)基。（5）用ELISA篩選并找出分泌特異性結(jié)合上述抗原的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。（6）對(duì)該細(xì)胞株進(jìn)行擴(kuò)大化培養(yǎng)，純化其分泌的單克隆抗體。

4.粗分級(jí)分離和細(xì)分級(jí)分離各有哪些方法？

答：粗分級(jí)分離：將目標(biāo)蛋白與細(xì)胞其他成分分離開，鹽析，等電位沉淀，有機(jī)溶劑分級(jí)分離，還可以使用超濾，冷凍干燥等方法進(jìn)行。細(xì)分級(jí)分離：使用凝膠過濾，離子交換層析，吸附層析，親和層析等，還可以采用各種電泳的方法進(jìn)行分離。

第六次作業(yè)

1.簡(jiǎn)述ELISA的基本步驟。

答：抗原或抗體預(yù)先結(jié)合到某種固相載體表面，測(cè)定時(shí)將待測(cè)樣品和酶標(biāo)抗原或抗體按一定程序與結(jié)合在固相載體上的抗原或抗體反應(yīng)，形成抗原抗體復(fù)合物，反應(yīng)終止時(shí)，固相載體上免疫復(fù)合物與待測(cè)標(biāo)本中待檢抗體或抗原的量呈一定比例，經(jīng)洗滌去除反應(yīng)液中其他物質(zhì)。加入底物進(jìn)行顯色，最后通過定性或定量分析有色產(chǎn)物量即可確定樣品中待測(cè)物質(zhì)含量。

2.簡(jiǎn)述免疫印跡的基本原理。

答：免疫印跡法稱為Westemblot。由SDS-PAGE，蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印和酶免疫測(cè)定三項(xiàng)技術(shù)結(jié)合而成?？乖鹊鞍讟悠方?jīng)SDS處理后帶負(fù)電荷，SDS-PAGE從陰極向陽極泳動(dòng)，分子量小者泳動(dòng)速度快，然后將凝膠中已經(jīng)分離的蛋白質(zhì)條帶在電場(chǎng)作用下轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上，最后將印有蛋白質(zhì)條帶的硝酸纖維素膜依次與特異性抗體和酶標(biāo)第二抗體作用，加入能形成不溶性顯色物的酶反應(yīng)底物，使區(qū)帶染色，根據(jù)電泳時(shí)加入的分子量標(biāo)準(zhǔn)，可確定各組分的的分子量。

3.何為等電點(diǎn)和等離子點(diǎn)？

答：等電點(diǎn)：就某一蛋白質(zhì)而言，當(dāng)其所帶正電荷和負(fù)電荷相等時(shí)，其溶液的PH值。等離子點(diǎn)：蛋白質(zhì)的特征常數(shù)在沒有其他鹽類干擾時(shí)，蛋白質(zhì)質(zhì)子共體基團(tuán)解離出來的質(zhì)子數(shù)與質(zhì)子受體基團(tuán)結(jié)合的質(zhì)子數(shù)相等的PH值。

4.沉淀蛋白質(zhì)有哪些方法？

答：（1）鹽析法：加入中性鹽脫去水化層導(dǎo)致沉淀，不變性。（2）有機(jī)溶劑沉淀：極性有機(jī)溶劑乙醇，丙酮等脫去水化層，降低介電常數(shù)，導(dǎo)致沉淀。（3）重金屬鹽：PH大于PI時(shí)，帶負(fù)電，與重金屬結(jié)合，形成不溶解的鹽沉淀。（4）生物堿及某些酸類沉淀：?jiǎn)螌幩?，苦味酸，二氯乙酸等主要在PH小于PI時(shí)，帶正電，與酸或生物堿的帶負(fù)電基團(tuán)作用。（5）加熱變性沉淀：破壞蛋白分子的天然構(gòu)象，導(dǎo)致疏水基團(tuán)外露，破壞了水化層和雙電層。

第七次作業(yè)

1.何謂鹽溶和鹽析？

答：鹽溶：在蛋白質(zhì)水溶液中加入少量的中性鹽，如硫酸銨、氯化鈉等，會(huì)增加蛋白質(zhì)分子表面的電荷，增強(qiáng)蛋白質(zhì)分子與水分子的作用，從而使蛋白質(zhì)在水溶液中的溶解度增大。

鹽析：一般是指溶液中加入無機(jī)鹽類，而使某種物質(zhì)溶解度降低而析出的過程。

2.簡(jiǎn)述有機(jī)溶劑沉淀蛋白質(zhì)的基本原理。

答：改變?nèi)芤旱慕殡姵?shù)，降低相關(guān)蛋白質(zhì)的溶解度。

3.簡(jiǎn)述凝膠過濾的基本原理。

答：凝膠過濾層析也稱分子篩層析，排阻層析，是利用具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠的分子篩作用，根據(jù)被分離物質(zhì)的分子的分子大小不同來進(jìn)行層離。層析柱中的填料是某些惰性的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物質(zhì)，多是交聯(lián)的聚糖類物質(zhì)，小分子物質(zhì)能進(jìn)入其內(nèi)部，流下來路程較長(zhǎng)，而大分子物質(zhì)則被排除在外部，下來路程短，當(dāng)一混合溶液通過凝膠過濾層析時(shí)，溶液中的物質(zhì)就按不同分子篩分開了。

4.簡(jiǎn)述親和層析的基本原理。

答：親和層析是應(yīng)用生物高分子與配基可逆結(jié)合的原理，將配基通過共價(jià)鍵牢固結(jié)合于載體上而制得的層析系統(tǒng)。這種可逆結(jié)合的作用主要靠生物高分子對(duì)它的配基的空間結(jié)構(gòu)的識(shí)別。

5.正相HPLC與反相HPLC有何區(qū)別？

答：正相HPLC：固定相是極性的，流動(dòng)相是非極性的。反相HPLC：固定相是非極性的，惰性的。流動(dòng)相是相對(duì)極性的。

第 8 次作業(yè)

名詞解釋：

Cot1/2和Tm值

Cot1/2(半變Cot值)：DNA初始濃度（Co)與復(fù)性完成一半時(shí)的時(shí)間的答乘積。反應(yīng)完內(nèi)成一半時(shí)所需的Cot值，它直接與復(fù)性DNA 成正比容。

Tm值：DNA熔解溫度，指把DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)降解一半時(shí)的溫度。不同序列的DNA，Tm值不同。DNA中G－C含量越高，Tm值越高，成正比關(guān)系。

1)蛋白質(zhì)變性

天然蛋白質(zhì)受到某些物理或化學(xué)因素的影響，使其內(nèi)部分子原有的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生變化時(shí)，生物理化性質(zhì)改變，生物喪失活性，但并未導(dǎo)致蛋白質(zhì)以及結(jié)構(gòu)的改變，該過程稱為蛋白質(zhì)變性。

2)DNA 變性

核酸雙螺旋堿基對(duì)之間的氫鍵斷裂，雙鏈轉(zhuǎn) 變成單鏈，從而使核酸的天然構(gòu)象和性質(zhì)發(fā)生改變。核酸 在260nm下的紫外吸收值升高，粘度降低，浮力密度升高，比旋下降，酸堿滴定曲線改變等。核酸的變性不涉及共價(jià)鍵斷裂。

3)Km 值和 Ks 值

Km值等于酶促反應(yīng)速度為最大速度工半時(shí)的底物濃度。Km可以近似表示酶與底物的親和力，Km值愈大，表明酶與底物親和力小，反之Km值愈小,表明酶與底物親和力愈大。Km值是酶的特征性常數(shù)之一，只與酶的結(jié)構(gòu)、酶催化的底物、環(huán)境的pH、溫度有關(guān)，與酶的濃度無關(guān)。

Ks值：指不透明物質(zhì)的深度值，是一個(gè)經(jīng)驗(yàn)值，也是一個(gè)相對(duì)值。

4)別構(gòu)酶的 S 形曲線

正協(xié)同效應(yīng)中酶結(jié)合底物或調(diào)節(jié)物后，酶構(gòu)象改變，親和力增加，速度變快，呈現(xiàn)S型曲線。

5)別構(gòu)酶的表觀雙曲線

負(fù)協(xié)同效應(yīng)中在底物濃度較低的范圍內(nèi)，酶活力上升快，隨后底物濃度上升，但速率上升很低，呈現(xiàn)表觀雙曲線。

填空題：

1)（? km值 ）是酶的特征性物理常數(shù)。

2)雙鏈 DNA 分子中兩條鏈的堿基之間以（ 氫鍵 ）鍵相連，而同一條鏈上相鄰脫氧戊糖之間以（? ?磷酸二酯鍵 ）鍵相連。

3)維持蛋白質(zhì)分子一級(jí)結(jié)構(gòu)的共價(jià)鍵包括（ 肽 ）鍵和（ 二硫 ）鍵；維持蛋白質(zhì)空間構(gòu)象穩(wěn)定性的是一些次級(jí)鍵，包括氫鍵、（離子）鍵、（疏水）鍵、（范德華） 引力等。

4)NAD+、FAD、CoA 都是（ 腺苷酸 ）的衍生物。

5)Km 愈大，則表示酶與底物（親和力?。t表示（親和力大）。

第 9 次作業(yè)

名詞解釋：

1)疏水相互作用層析

是利用表面偶聯(lián)弱疏水性基團(tuán)（疏水性配基）的疏水性吸附劑為固定相，根據(jù)蛋白質(zhì)與疏水性吸附劑之間的弱疏水性相互作用的差別進(jìn)行蛋白質(zhì)類生物大分子分離純化的一種層析法。

2)酶的活性中心

酶的活動(dòng)中心是指酶分子中結(jié)合底物并起催化作用的少數(shù)氨基酸殘基形成的一定空間結(jié)構(gòu)，包括底物結(jié)合部位和催化部位。

3)酶的別構(gòu)效應(yīng)

酶分子的費(fèi)催化部位（調(diào)節(jié)部位）與某些化合物產(chǎn)生非共價(jià)可遞結(jié)合，導(dǎo)致酶分子構(gòu)想發(fā)生改變，從而改變酶的活性狀態(tài)的現(xiàn)象。

4)親和層析

利用生物分子與配基建具有轉(zhuǎn)義而不可逆的親和力使生物分子分離純化的方法。

5)抗體酶

一種具有催化能力的蛋白質(zhì)，其本質(zhì)是免疫球蛋白，但是在易變區(qū)被賦予酶的屬性，所以又稱“催化性抗體”。

6)核酸酶

能夠?qū)⒕酆塑账徭湹牧姿岫ユI切斷的酶，稱為核酸酶。核酸酶屬于水解酶，作用于磷酸二酯鍵的P-O 位置。

7)DNA 的二級(jí)結(jié)構(gòu)

DNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)是指兩條多核苷酸鏈反向平行盤繞所生成的雙螺旋結(jié)構(gòu)。

8)蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)

蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)是指蛋白質(zhì)多肽鏈中主鏈原子的局部空間排列即構(gòu)象，不涉及側(cè)鏈部分的構(gòu)象。蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的基本形式：α—螺旋結(jié)構(gòu)和β—片層結(jié)構(gòu)。

9)Tm 值

DNA熔解溫度，指把DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)降解一半時(shí)的溫度。不同序列的DNA，Tm值不同。DNA中G－C含量越高，Tm值越高，成正比關(guān)系。

10）Ta值 ：最大時(shí)間提前量 。

填空題：

1.鑒定多肽鏈氨基末端常用的方法有 FDNB 法即（ 2,4—二硝基氟苯法 ）法和 Edman

降解法即（苯異硫氰酸酯 ）法。

2.蛋白質(zhì)在 280nm 附近有強(qiáng)吸收是因?yàn)槠渲械模?苯丙氨酸 ）和 （ 絡(luò)氨酸 ） 在 280nm 附近有強(qiáng)吸收。

3.α-氨基酸的水合茚三酮反應(yīng)呈現(xiàn)（ 藍(lán)紫色 ）色，可用于 α-氨基酸的定性和定量。

4.酶的可逆共價(jià)修飾作用是通過（ 別構(gòu) ）酶進(jìn)行的，該酶的某些基團(tuán)可被共價(jià)修飾，處于活性與非活性的互變狀態(tài)。

第 10 次作業(yè)

名詞解釋：

1)DNA 主帶與衛(wèi)星帶

DNA主帶：密度離心中由一個(gè)寬峰度組成，不包括可見的衛(wèi)星DNA組成的分離條帶。

衛(wèi)星帶：真核生物基因組DNA含有大量重復(fù)序列，在CsCl2密度梯度離心時(shí)，除主帶外還得到量較少的次帶，即衛(wèi)星帶。它由一些短的高度重復(fù)序列組成，因其堿基組成與DNA的主要部分不同，浮力密度也就不同。

2)酶活力

酶活力是指酶催化一定化學(xué)反應(yīng)的能力，用在一定條件下所催化的某化學(xué)反應(yīng)的速度（底物減少或產(chǎn)物生成的量）來表示。

3)酶比活力

酶比活力是酶制品純度的一個(gè)衡量標(biāo)準(zhǔn)，用每毫克蛋白質(zhì)所含的酶活力單位數(shù)表示。

4)等電點(diǎn)

就某一蛋白質(zhì)而言，當(dāng)其所帶正負(fù)電荷相等時(shí)其溶液的PH值。

5)等離子點(diǎn)

（蛋白質(zhì)的特征常數(shù)）在沒有其它鹽類干擾時(shí)，蛋白質(zhì)質(zhì)子供體基團(tuán)解離出來的質(zhì)子數(shù)與質(zhì)子供體基團(tuán)結(jié)合的質(zhì)子數(shù)相等時(shí)的PH值。

6）輔酶與輔基

輔酶：是一大類有機(jī)輔助因子的總稱，是酶催化氧化還原反應(yīng)、基團(tuán)轉(zhuǎn)移和異構(gòu)反應(yīng)的必須因子。它們?cè)诿复呋磻?yīng)中承擔(dān)傳遞電子、原子或基團(tuán)的功能。輔酶也可以被視為第二底物，因?yàn)樵诖呋磻?yīng)發(fā)生時(shí)，輔酶發(fā)生的化學(xué)變化與底物正好相反。

輔基：酶的輔因子或結(jié)合蛋白質(zhì)的非蛋白部分，與酶或蛋白質(zhì)結(jié)合的非常緊密，用透析法不能除去。按照化學(xué)組成，酶可以分為 簡(jiǎn)單蛋白質(zhì) 和 結(jié)合蛋白質(zhì) 兩大類。

（1）輔酶與脫輔酶結(jié)合得比較松弛，可以通過透析方法去除，如輔酶I 和輔酶II等，而輔基以共價(jià)鍵和脫輔酶結(jié)合，不能通過透析除去，如細(xì)胞色素氧化酶中的鐵卟啉、FAD等。

（2）同一種輔酶或輔基往往可以與多種不同的脫輔酶結(jié)合而表現(xiàn)出多種不同催化作用，脫輔酶決定酶催化的專一性。

（3）輔酶或輔基在酶催化中通常起著電子、原子和某些化學(xué)基團(tuán)的傳遞作用。

判斷題：

ELISA 和 Western blotting 實(shí)驗(yàn)的基本原理均為特異性抗體與抗原之間的反應(yīng)

（ √）

酶通過降低活化自由能提高反應(yīng)速率。（√）

超速離心法可用于純化蛋白質(zhì)和鑒定蛋白質(zhì)的純度。（√ ）

2-D 電泳分離蛋白質(zhì)分子時(shí)，先進(jìn)行 IEF，再進(jìn)行 SDS-PAGE。（√ ）

SDS-PAGE 分離蛋白質(zhì)的原理是根據(jù)蛋白質(zhì)分子質(zhì)量及其表面疏水性的不同。

（× ）

等離子點(diǎn)是蛋白質(zhì)的一個(gè)特征常數(shù)。（√ ）

凝膠過濾法測(cè)定蛋白質(zhì)分子量是根據(jù)不同蛋白質(zhì)帶電荷多少進(jìn)行的

（ ×）

DNA 雙螺旋的穩(wěn)定作用主要靠堿基間的氫鍵和堿基間的堆積力（√ ）

第 11 次作業(yè)

名詞解釋：

1)肽鍵與酰胺平面

肽鍵：蛋白質(zhì)中前一氨基酸的α-羧基與后一氨基酸的α-氨基脫水形成的酰胺鍵。酰胺平面：不能自由旋轉(zhuǎn)，與肽鍵相關(guān)的六個(gè)原子共處于一個(gè)平面，此平面結(jié)構(gòu)被稱為酰氨平面或肽平面。

2)蛋白質(zhì)降解與 DNA 降解

蛋白質(zhì)降解：指食物中的蛋白質(zhì)要經(jīng)過蛋白質(zhì)降解酶的作用降解為多肽和氨基酸然后被人體吸收的過程。

DNA 降解:是DNA 分子中的堿基和戊糖間的氮糖苷鍵發(fā)生水解， 使DNA鏈發(fā)生斷裂。

3)單克隆抗體與多克隆抗體

單克隆抗體：由同一B淋巴細(xì)胞群體在應(yīng)答同一種抗原時(shí)合成并分泌的抗體，均一，且只識(shí)別抗原的同一表位。

多克隆抗體: 多個(gè)不同B淋巴細(xì)胞在應(yīng)答同一種抗原時(shí)產(chǎn)生的可特異性結(jié)合該抗原不同表位的抗體混合物，這些抗體分子的組成之間存在一定差異。

4)單一蛋白質(zhì)與綴合蛋白質(zhì)

單一蛋白質(zhì)：僅有氨基酸組成的蛋白質(zhì)。

綴合蛋白質(zhì)：輔基或配體和脫輔基蛋白質(zhì)構(gòu)成的蛋白質(zhì)。

判斷題：

1)同工酶的分子組成雖然不同，但其作用基本是相同的( √ )

2)

3)2)專一的酸堿催化不受緩沖液濃度的影響( √ )

4)

5)3)酶的激活劑未必都是無機(jī)離子，也可以是有機(jī)小分子( √ )

6)

7)4)最適溫度和pH值也是酶的特征常數(shù)(? ×? )

8)

9)5) Hill系數(shù)>1時(shí)，產(chǎn)生負(fù)協(xié)同效應(yīng); < 1時(shí)產(chǎn)生正協(xié)同效應(yīng)。 ( ×? )

10)

11)9)一個(gè)加工后的胰島素分子中存在2個(gè)鏈間二硫鍵和1個(gè)鏈內(nèi)二硫鍵( √ )

12)

13)10) Hill系數(shù)等于1時(shí)表示配體與受體之間的結(jié)合為非協(xié)同效應(yīng)，大于1表示負(fù)協(xié)同效應(yīng)(? ×? )

14)

15)6)用陽離子交換樹脂層析時(shí)，氨基酸用酸處理，樹脂用堿處理成鈉型。( √ )

11)HbS和HbA的a鏈相同,但β鏈存在一-個(gè)氨基酸類型的差異(√? )

12)典型的免疫球蛋白G分子中存在16對(duì)二硫鍵( √ )

第 12 次作業(yè)

名詞解釋：

1)抗體酶和核酶

抗體酶：一種具有催化能力的蛋白質(zhì)，其本質(zhì)是免疫球蛋白，但是在易變區(qū)被賦予酶的屬性，所以又稱“催化性抗體”。

核酶：是指一類具有催化功能的RNA分子，通過催化靶位點(diǎn)RNA鏈中磷酸二酯鍵的斷裂，特異性地剪切底物RNA分子，從而阻斷基因表達(dá)。

2)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)域與功能域

蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)域：介于超二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)之間，多肽鏈在超二級(jí)結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上進(jìn)一步盤繞折疊，形成緊密的近乎于球狀的結(jié)構(gòu)，稱為結(jié)構(gòu)域。

功能域：是蛋白質(zhì)分子中能獨(dú)立存在的功能單位。功能域可以是一個(gè)結(jié)構(gòu)域，也可是由兩個(gè)結(jié)構(gòu)域或兩個(gè)以上的結(jié)構(gòu)域組成。

3)離子交換層析

是以離子交換劑為固定相，根據(jù)物質(zhì)的帶點(diǎn)性質(zhì)不同而進(jìn)行分離的一種層析技術(shù)。

4)雙縮脲反應(yīng)

雙縮脲是由兩分子尿素縮合而成的化合物,將尿素加熱到180度,則兩分子尿素縮合成一分子雙縮脲,并放出一分子氨.雙縮脲在堿性溶液中能與硫酸銅反應(yīng)產(chǎn)生紅紫色絡(luò)合物,此反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)。

判斷題：

1.蛋白聚糖中的核心蛋白與糖胺聚糖之間以共價(jià)鍵相連接（ √ ）

2.氨基酸的等電點(diǎn)除了可應(yīng)用酸堿滴定法測(cè)定外，還可根據(jù)氨基酸的可解離基團(tuán)的 pK 值計(jì)算（ √ ）

3.肌紅蛋白與血紅蛋白屬于同源蛋白質(zhì)（ √ ）

4.用透析法可解開蛋白質(zhì)中的二硫鍵（ × ）

5.不可逆抑制劑與酶的必需基團(tuán)之間以非共價(jià)鍵結(jié)合。（ × ）

6. RNase P 的 RNA 組分是核酶。（× ）

7.添加競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑后Km增大，Vmax減小。（? × ）

8.可逆抑制劑與酶的必需基團(tuán)之間以共價(jià)鍵結(jié)合。（ √ ）

9. 添加飽和硫酸銨可實(shí)現(xiàn)鹽溶和鹽析。（ × ）

10. 聯(lián)系糖異生作用與三羧酸循環(huán)的酶是丙酮酸羧化酶。（ ? √? ）

第13次作業(yè)

問答題

（1）酶具有高催化能力的原因有哪些？

答：（1）鄰近效應(yīng)和定向效應(yīng)

（2）底物形變和誘導(dǎo)契合

（3）多元催化和協(xié)同效應(yīng)

（4）活性部位微環(huán)境

（2）簡(jiǎn)述生物酶的內(nèi)涵和外延

答：內(nèi)涵：生物酶包括核酶，脫氧核酶和蛋白質(zhì)性質(zhì)的酶。

外延：酶具有催化反應(yīng)活性的生物分子。

（3）簡(jiǎn)述2，6—二磷酸果糖調(diào)控糖酵解的主要機(jī)制。

答：2，6—二磷酸果糖是一個(gè)變構(gòu)激活劑，他控制磷酸果糖激酶的構(gòu)象轉(zhuǎn)換，維持構(gòu)象之間的平衡關(guān)系，減輕ATP對(duì)磷酸果糖激酶的抑制作用。

（4）SDS—PAGE，測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的基本原因是什么？

答：SDS是一種變性劑，它能破壞蛋白質(zhì)分子中的氫鍵和疏水相互作用，而硫其蘇糖醇能打開二硫鍵，因此有sds或同時(shí)有疏基蘇糖醇存在下蛋白質(zhì)或亞基的多肽鏈處于展開狀態(tài)，SDS以其烴鏈，與蛋白質(zhì)分子的側(cè)鏈通過疏水相互作用結(jié)合成復(fù)合體，在一定條件下，SDS，與大多數(shù)蛋白質(zhì)的結(jié)合比為1.4gSDS/1g蛋白質(zhì)，相當(dāng)于每?jī)蓚€(gè)氨基酸殘基結(jié)合一個(gè)SDS。在SDS存在下的電涌幾乎完全基于分子質(zhì)量分離蛋白質(zhì)的多肽愈小遷移的愉快，電泳完畢，蛋白質(zhì)可用染料顯示。

填空題：

（1）當(dāng)氨基酸溶液ph=PR已時(shí)，氨基酸以兩性離子形式存在，當(dāng)pH＞pI時(shí)，氨基酸以（負(fù)離子）形式存在，當(dāng)pH小于PI時(shí)，氨基酸以（陽離子）形式存在。

（2）對(duì)角線電泳可用于判斷（二硫）鍵在肽鏈間或肽鏈內(nèi)的位置。

（3）尿素和鹽酸胍能增加非極性側(cè)鏈在水中的（溶解度），從而降低維持蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)的（疏水相互）作用。

（4）NADH呼吸鏈參與三大物質(zhì)分解代謝中的脫氫氧化反應(yīng)，而FADH 2呼吸鏈中的黃酶只能催化某些代謝物脫氫，不能催化（NADH）或（NADPH）脫氫。

（5）FADH2的電子通過輔酶Q進(jìn)入電子傳遞鏈傳遞到氧氣時(shí)，p/o比例為(2)。

14 次作業(yè)

填空題：

1) 1mol 葡萄糖分子在糖酵解過程中產(chǎn)生 （ 2 ） mol NADH，其中的 H 通過( FADH2呼吸鏈 )途徑進(jìn)入線粒體呼吸鏈可產(chǎn)生 3mol ATP。

2) 一種酶有多種底物時(shí)，其中 Km 值最小的底物稱為酶的（ 最適 ）底物。

3) 別構(gòu)酶除含有( 活性 )部位外，還具有( 調(diào)節(jié) )部位，可與某些化合物可逆地非共價(jià)結(jié)合，進(jìn)而改變酶的結(jié)構(gòu)和活性。

4) 用于蛋白質(zhì)組成分析和水解的方法主要是酸水解法，同時(shí)輔以堿水解測(cè)定( Trp )

的含量。

5) 甘油氧化先經(jīng)甘油激酶作用，變成（ 甘油-3-磷酸 ），再在磷酸甘油脫氫酶作用下變成（ 磷酸二羥丙酮 ）后，循酵解途徑變成（ 丙酮酸 ），再進(jìn)入有氧氧化階段。

問答題：

1) 如何分離單、雙鏈 DNA? 如何純化 mRNA??

答:可利用羥基磷灰石柱層析分離單、雙鏈DNA,因?yàn)楹怂岬牧姿峄鶊F(tuán)可與羥基磷灰石的鈣離子作用從而被吸附其上；雙鏈核酸的吸附力比單鏈強(qiáng)；還可利用CsCl密度梯度離心分離。

純化mRNA? 可用寡聚脫氧胸苷酸親和柱層析將mRNA從總RNA中分離出來。

2) 甘油能否代謝成CO2和H2O？若能夠，請(qǐng)寫出其主要代謝步驟。

答:能，甘油在甘油激酶作用下生成甘油-3-磷酸再在甘油磷酸脫氫酶作用下生成磷酸二羥丙酮，進(jìn)入糖酵解途徑，最終生成丙酮酸。丙酮酸生成乙酰輔酶A進(jìn)入三羧酸循環(huán)徹底氧化，經(jīng)過四次脫氫反應(yīng)生成二氧化碳和水。

第 15 次作業(yè)

判斷題：

1) 有一天然小肽，用測(cè)定N端法未能測(cè)出α-NH2，則可以認(rèn)為此小肽為環(huán)肽（× ）

2) 典型的α-螺旋又稱 3.613-螺旋（ √）

3) 肌紅蛋白存在三級(jí)結(jié)構(gòu)，血紅蛋白存在四級(jí)結(jié)構(gòu)，二者不屬于同源蛋白質(zhì)（×）

4) 牛脾磷酸二酯酶切割 DNA 鏈后產(chǎn)生 5&apos;-核苷酸（× ）

5) 雙向電泳第一次分離是 IEF，第二次分離是 SDS-PAGE（√ ）

6) 一種構(gòu)型轉(zhuǎn)變?yōu)榱硪环N構(gòu)型時(shí)要求共價(jià)鍵的斷裂和重新生成。(× )?

7) 原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的 tRNA 基本相同，但二者的 rRNA 和 mRNA 的差異較大。（√ ）

8) 生物膜中的脂質(zhì)分子可被氧化成為丙二醛，后者可引起蛋白質(zhì)交聯(lián)以及酶的失活。（√ ）

問答題：

1)生物代謝過程中生成的丙酮酸可進(jìn)入哪些代謝徑??

答：在糖代謝過程中生成的丙酮酸具有多條代謝途徑。 (1) 在供氧不足時(shí)，丙酮酸在LDH催化下，NADH+H + 供氫還原生成乳酸。 (2) 在供氧充足時(shí)，丙酮酸進(jìn)入線粒體，在丙酮酸脫氫酶復(fù)合體的催化下，氧化脫羧生成乙酰CoA，再經(jīng)三羧酸循環(huán)和氧化磷酸化，徹底氧化生成二氧化碳 、水和ATP。 (3) 丙酮酸進(jìn)入線粒體在丙酮酸羧化酶催化下生成草酰乙酸，后者經(jīng)磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶催化生成磷酸烯醇式丙酮酸，再異生為糖。 (4) 丙酮酸進(jìn)入線粒體在丙酮酸羧化酶催化下生成草酰乙酸，后者與乙酰CoA縮合成檸檬酸，可促進(jìn)乙酰CoA進(jìn)入三羧酸循環(huán)徹底氧化。 (5) 丙酮酸進(jìn)入線粒體在丙酮酸羧化酶催化下生成草酰乙酸，后者與乙酰CoA縮合成檸檬酸；檸檬酸出線粒體在細(xì)胞質(zhì)中經(jīng)檸檬酸裂解酶催化生成乙酰CoA，后者可作為脂酸、膽固醇等的合成原料。 (6) 丙酮酸可經(jīng)氨基化生成丙氨酸等非必需氨基酸。 決定丙酮酸代謝的方向是各條代謝途徑中關(guān)鍵酶的活性，這些酶受到別構(gòu)效應(yīng)劑與激素的調(diào)節(jié)。

16) 乳酸在體內(nèi)能否異生成葡萄糖？若能夠異生成葡萄糖，試寫出主要代謝步驟；若不能夠，請(qǐng)闡明理由。

17)答:能，主要代謝步驟如下:①乳酸經(jīng)LDH催化生成丙酮酸；②丙酮酸在線粒體內(nèi)經(jīng)丙酮酸羧化酶催化生成草酰乙酸，后者經(jīng)GOT催化生成天冬氨酸出線粒體，在胞液中經(jīng)GOT催化生成草酰乙酸，后者在磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶作用下生成磷酸烯醇式丙酮酸；③磷酸烯醇式丙酮酸循糖酵解途徑逆行至1，6-雙磷酸果糖；④1，6-雙磷酸果糖經(jīng)果糖雙磷酸酶-1催化生成F-6-P，再異構(gòu)為G-6-P；⑤G-6-P在葡萄糖-6-磷酸酶作用下生成葡萄糖。

18)

19)第 16 次作業(yè)

20)名詞解釋：

21)1) 氧化磷酸化

22)伴隨著電子傳遞，同時(shí)氫離子進(jìn)入內(nèi)外膜間隙，內(nèi)外膜間隙積累的氫離子通過F1F2－ATP合酶返回到線粒體基質(zhì)，氫離子的轉(zhuǎn)移能夠驅(qū)動(dòng)ATP的合成。

23)

2) 底物水平磷酸化

底物分子中高能鍵斷裂釋放的自由能轉(zhuǎn)移到ATP中。

填空題：

1) 甘油氧化先經(jīng)甘油激酶作用，變成（甘油-3-磷酸 ），再在磷酸甘油脫氫酶作用下變成磷酸二羥丙酮，循酵解途徑變成丙酮酸，再進(jìn)入有氧氧化。

2) 1mol乙酰CoA經(jīng)三羧酸循環(huán)一周可發(fā)生四次脫氫反應(yīng)，所形成NADH+H+和FADH2摩爾

數(shù)之比為（3:1 ）。

3) 要將線粒體外的 NADH 的 H 轉(zhuǎn)運(yùn)至線粒體呼吸鏈進(jìn)行氧化，可通過(3-磷酸甘油 )穿梭途徑和(蘋果酸-天冬氨酸)穿梭途徑進(jìn)行完成。

4) 在糖酵解途徑中，有（ 3 ）處不可逆反應(yīng)，最關(guān)鍵的限速酶是（磷酸果糖激酶-1 ）。

問答題：

1) 簡(jiǎn)述 2,6-二磷酸果糖調(diào)控糖酵解的主要機(jī)制

答:①2，6-二磷酸果糖能夠提高磷酸果糖激酶-1催化活性；

②2，6-二磷酸果糖可削弱ATP對(duì)磷酸果糖激酶-1的抑制作用。

2) 簡(jiǎn)述氧化磷酸化作用的機(jī)制

答:電子在沿著呼吸鏈向下游傳遞的時(shí)候，釋放的自由能轉(zhuǎn)化為跨線粒體內(nèi)膜或跨細(xì)菌質(zhì)膜的質(zhì)子梯度，質(zhì)子梯度中蘊(yùn)藏的電化學(xué)勢(shì)能直接驅(qū)動(dòng)ATP的合成。

3) SDS-PAGE 測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的基本原理是什么？

答:在SDS作用下，蛋白質(zhì)中的氫鍵和疏水相互作用被破壞，多肽鏈表面都覆蓋上相同的負(fù)電荷，掩蓋了不同蛋白質(zhì)間原有的電荷差異。蛋白質(zhì)分子的天然構(gòu)象發(fā)生改變，都呈現(xiàn)了類似的棒狀。在電泳過程中，這些變性后的蛋白質(zhì)分子幾乎完全基于分子質(zhì)量的大小進(jìn)行分離。

4) 1 分子葡萄糖分子在糖酵解過程中可產(chǎn)生多少分子 NADH？這些 NADH 是如何將 H 傳

遞到線粒體呼吸鏈的？可產(chǎn)生多分子 ATP？

答:可產(chǎn)生兩分子NADH,通過3-磷酸甘油穿梭途徑和蘋果酸-天冬氨酸穿梭途徑能把氫離子傳遞到線粒體呼吸鏈上。糖酵解產(chǎn)生2mol的NADH+H+，若NADH+H+傳給線粒體內(nèi)的FADH2呼吸鏈，最終經(jīng)氧化磷酸化產(chǎn)生1.5molATP。若NADH+H+傳給線粒體內(nèi)的NADH呼吸鏈,最終經(jīng)氧化磷酸化產(chǎn)生2.5molATP。所以這兩分子的NADH有三種分配方式，導(dǎo)致結(jié)果有三種可能，可能產(chǎn)生30/31/32分子ATP。

作業(yè) 17?

(1) 名詞解釋：

1.酶的酸堿催化和共價(jià)催化

①酸堿催化:通過瞬時(shí)的向反應(yīng)物提供質(zhì)子或從反應(yīng)物中接受質(zhì)子以穩(wěn)定過渡態(tài)，加速反應(yīng)的一類催化機(jī)制。

②共價(jià)催化:又稱親核催化或親電子催化，在催化時(shí)，親和催化劑或親電子催化劑能分別放出電子或汲取電子并作用于底物的缺電子中心或負(fù)電中心，迅速形成不穩(wěn)定的共價(jià)中間復(fù)合物，降低反應(yīng)活化能，加速反應(yīng)。

2.Tm 和 Ta?

①Tm:溶解溫度，在DNA熱變性過程中，引起DNA物化性質(zhì)改變一半時(shí)的溫度。

②Ta:退火溫度，是指引物和模板結(jié)合時(shí)候的溫度參數(shù)，DNA復(fù)性過程中，DNA物化性質(zhì)恢復(fù)到一半時(shí)的溫度。

3.Km 與 Tm?

①Km值:是酶反應(yīng)初速率達(dá)到Vmax一半時(shí)的底物濃度。

②Tm值:溶解溫度，在DNA熱變性過程中，引起DNA物化性質(zhì)改變一半時(shí)的溫度。

4.底物的水平磷酸化與氧化磷酸化

①底物水平磷酸化:底物分子中高能鍵斷裂釋放的自由能轉(zhuǎn)移到ATP中。

②氧化磷酸化:伴隨著電子傳遞，同時(shí)氫離子進(jìn)入內(nèi)外膜間隙，內(nèi)外膜間隙積累的氫離子通過F1F2－ATP合酶返回到線粒體基質(zhì)，氫離子的轉(zhuǎn)移能夠驅(qū)動(dòng)ATP的合成。

5.酶的活力與比活力

①酶活力:一個(gè)溶液中酶的總單位數(shù)，代表酶量的多少

②酶比活力:每毫克總蛋白中酶的單位數(shù)代表酶的純度。

(2) 填空題：

1. 在 pH7.0 時(shí)帶正電荷的 R 基氨基酸有(賴氨酸 )、(精氨酸 )、( 組氨酸),

帶負(fù)電荷的 R 基氨基酸有(谷氨酸 )和(天冬氨酸 )；?

2. Cys 可與 Ellman 試劑發(fā)生硫醇一二硫化物交換反應(yīng)，在 pH8.0 時(shí)，在 412nm處有強(qiáng)烈的吸收，可用于測(cè)定(-SH )基團(tuán)；

3. 蛋白質(zhì)因含有( Trp )、Phe 和( Tyr), 在 280nm 處有最大吸收峰，因此能利用分光光度計(jì)測(cè)定蛋白質(zhì)含量；

4. 分離氨基酸混合物通常選擇( 強(qiáng)酸 )型陽離子交換樹脂，該樹脂需要堿處理成鈉型，而氨基酸混合液需要處理成( 酸 )型；

5. PCR 擴(kuò)增的每個(gè)循環(huán)都包括（ 變性 ）、（退火 ）和（延伸 ）三個(gè)階段；

＊6. 有機(jī)溶劑能夠降低水溶液的( 介電 )常數(shù)，導(dǎo)致蛋白質(zhì)溶解度下降，有機(jī)溶劑還能爭(zhēng)奪( 可溶解 )水，致使蛋白質(zhì)沉淀；

7. 別構(gòu)酶除含有( 活性 )部位外，還具有( 調(diào)節(jié) )部位，可無某些化合物可逆地非共價(jià)結(jié)合，進(jìn)而改變酶的結(jié)構(gòu)和活性。

作業(yè) 18?

1. 述 NADH 呼吸鏈的基本組成,并圖示 ATP 的生成部位？

答:NADH呼吸鏈的基本組成為:復(fù)合體Ⅰ、輔酶Q、復(fù)合體Ⅲ、復(fù)合體Ⅳ、一對(duì)電子可產(chǎn)生2個(gè)氫離子梯度、細(xì)胞色素c。

由圖可知NADH呼吸鏈在復(fù)合體Ⅰ、復(fù)合體Ⅲ、復(fù)合體Ⅳ三處生成ATP

2. 何謂蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)？簡(jiǎn)述蛋白質(zhì)的 α－螺旋的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)；

3.答:蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)是多肽鏈的主鏈骨架在空間上有規(guī)律的盤繞和折疊形成的一定空間結(jié)構(gòu)；主要有α-螺旋、β折疊、β轉(zhuǎn)角、Ω環(huán)和無規(guī)則卷曲等；

4.①α－螺旋結(jié)構(gòu)中，多肽鏈主鏈圍繞中心軸以右手螺旋方式旋轉(zhuǎn)上升，每隔3.6個(gè)氨基酸殘基上升一圈。氨基酸殘基的R基團(tuán)位于螺旋的外側(cè)。肽鏈骨架上由n位氨基酸殘基上的-C＝O與n＋4位殘基上的-NH之間形成的氫鍵起著穩(wěn)定的作用。

5.②β－折疊結(jié)構(gòu)中，肽段幾乎完全伸展，呈現(xiàn)平行排列，相鄰肽段之間的肽鍵形成氫鍵，肽平面之間呈鋸齒狀，側(cè)鏈基團(tuán)交替分布在折疊片層的兩側(cè)。肽段平行的走向有平行和反平行兩種，反平行β-折疊的每一個(gè)氨基酸殘基上升0.347nm，正平行的每個(gè)氨基酸殘基上升0.325nm。

6.③在β-轉(zhuǎn)角中，肽鏈骨架以180°回折而改變了肽鏈的方向。通常以四個(gè)連續(xù)的氨基酸殘基組成，其中n位氨基酸的殘基的-C=O與n＋4位殘基上的-NH之間形成氫鍵，脯氨酸和甘氨酸經(jīng)常出現(xiàn)在這種結(jié)構(gòu)中。

7.④Ω環(huán)形式上可看成β-轉(zhuǎn)角的延伸。

8.⑤無規(guī)卷曲是指肽鏈中沒有確定規(guī)律的結(jié)構(gòu)。

9.

3.真核生物胞液中 1 mol 葡萄糖分子通過糖酵解過程能夠生成多少 NADH？這些 NADH 是如何傳遞到線粒體呼吸鏈的？可能生成多少 ATP？

答:可產(chǎn)生兩分子NADH,通過3-磷酸甘油穿梭途徑和蘋果酸-天冬氨酸穿梭途徑能把氫離子傳遞到線粒體呼吸鏈上。糖酵解產(chǎn)生2mol的NADH+H+，若NADH+H+傳給線粒體內(nèi)的FADH2呼吸鏈，最終經(jīng)氧化磷酸化產(chǎn)生1.5molATP。若NADH+H+傳給線粒體內(nèi)的NADH呼吸鏈,最終經(jīng)氧化磷酸化產(chǎn)生2.5molATP。所以這兩分子的NADH有三種分配方式，導(dǎo)致結(jié)果有三種可能 可能產(chǎn)生30/31/32分子ATP。

作業(yè) 19

1.蛋白質(zhì)變性與 DNA 變性有何區(qū)別?

答：DNA變性是指核酸雙螺旋堿基對(duì)的氫鍵斷裂，雙鏈變成單鏈，從而使核酸的天然構(gòu)象和性質(zhì)發(fā)生改變。變性時(shí)維持雙螺旋穩(wěn)定性的氫鍵斷裂，堿基間的堆積力遭到破壞，但不涉及到其一級(jí)結(jié)構(gòu)的改變。變性DNA常發(fā)生一些理化及生物學(xué)性質(zhì)的改變：（1）溶液粘度降低（2）溶液旋光性發(fā)生改變。（3）增色效應(yīng)。指變性后DNA溶液的紫外吸收作用增強(qiáng)的效應(yīng)。?

蛋白質(zhì)變性是指蛋白質(zhì)在某些物理和化學(xué)因素作用下其特定的空間構(gòu)象被改變，從而導(dǎo)致其理化性質(zhì)的改變和生物活性的喪失，這種現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)變性。（一）生物活性喪失（二）某些理化性質(zhì)的改變，如溶解度降低而產(chǎn)生沉淀，因?yàn)橛行┰瓉碓诜肿觾?nèi)部的疏水基團(tuán)由于結(jié)構(gòu)松散而暴露出來，分子的不對(duì)稱性增加，因此粘度增加，擴(kuò)散系數(shù)降低。（三）生物化學(xué)性質(zhì)的改變，分子結(jié)構(gòu)松散，不能形成結(jié)晶，易被蛋白酶水解。

1.甘油在人體內(nèi)通過哪些途徑最終被代謝為H2O和CO2？

答：甘油氧化: 反應(yīng)過程如下： 甘油 + ATP→α-磷酸甘油 + ADP；α-磷酸甘油 + NAD+→ NADH+H+ + 磷酸二羥丙酮；磷酸二羥丙酮→甘油醛-3-磷酸；甘油醛-3-磷酸 + NAD++ Pi→甘油酸1,3-二磷酸 + NADH+H+；甘油酸1,3-二磷酸 + ADP→甘油酸-3-磷酸 + ATP；甘油酸-3-磷酸→甘油酸-2-磷酸→磷酸稀醇式丙酮酸； 磷酸稀醇式丙酮酸+ ADP→ 丙酮酸 + ATP；丙酮酸 + NAD+→乙酰輔酶A + NADH+H+ + CO2；然后進(jìn)入乙酰輔酶A三羧酸循環(huán)徹底氧化。

2.甘油通過哪些途徑可異生成葡萄糖？圖示其主要途徑；

答：甘油——（3—磷酸甘油）——（磷酸二羥丙酮）——（3—磷酸甘油醛）——（1，6—二磷酸果糖）——（6—磷酸果糖）——（6—磷酸葡萄糖）——（葡萄糖）

作業(yè) 20

1.線粒體呼吸鏈有哪些主要類型？其主要電子傳遞體的組成有哪些？如何推?

測(cè)其 ATP 生成位點(diǎn)？可圖示之；

答：由于線粒體中需要經(jīng)呼吸鏈氧化和電子傳遞的主要是NADH，而FADH2較少，可將呼吸鏈分為主、次呼吸鏈。?

（1）主呼吸鏈(NADH呼吸鏈)--由NADH開始的呼吸鏈由復(fù)合物Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ構(gòu)成，從NADH來的電子依次經(jīng)過這三個(gè)復(fù)合物，進(jìn)行傳遞。?

（2）次呼吸(FADH2呼吸鏈)--由FADH2開始的呼吸鏈由復(fù)合物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ構(gòu)成，來自FADH2的電子不經(jīng)過復(fù)合物Ⅰ 。

2.請(qǐng)闡敘 Sanger 雙脫氧終止法測(cè)序的主要原理并圖示之。

答：原理是采用核苷酸鏈終止劑-2'，3'雙脫氧核苷酸終止DNA的延長(zhǎng)。由于它缺少形成3'，5'-磷酸二脂鍵所需要的3'-OH，一旦摻入到DNA鏈中，此DNA鏈就不能進(jìn)一步延長(zhǎng)。根據(jù)堿基配對(duì)原則，每當(dāng)DNA聚合酶需要dNMP摻入到正常延長(zhǎng)的DNA鏈中時(shí)，就有兩種可能性：一、摻入ddNTP，結(jié)果導(dǎo)致脫氧核苷酸鏈延長(zhǎng)的終止；二、摻入dNTP，使DNA鏈仍可繼續(xù)延長(zhǎng)，直至摻入下一個(gè)ddNTP。根據(jù)這一方法，就可得到—組以ddNTP結(jié)尾的長(zhǎng)短不一的DNA片段。分成四組分別為ddAMP、ddGMP、ddCMP、ddTMP反應(yīng)后，聚丙烯酰胺凝膠電泳按泳帶可讀出DNA序列。?

3.真核生物胞液中 NADH 中的 H 是如何傳遞到線粒體內(nèi)膜并通過呼吸鏈傳遞的？為何肌肉組織中的1mol葡萄糖徹底氧化后比其它組織少產(chǎn)生2 ATP? 可?

以圖示之；?

答：DADH中的H通過蘋果酸-天冬氨酸穿梭或甘油磷酸穿梭進(jìn)入線粒體內(nèi)膜并傳遞的。在骨骼肌和腦組織中，酵解產(chǎn)生的NADH進(jìn)入線粒體要經(jīng)過甘油磷酸穿梭系統(tǒng)，比其他組織的蘋果酸穿梭系統(tǒng)少一個(gè)ATP,兩個(gè)NADH就少兩個(gè)ATP。

作業(yè)21

一、名詞解釋

1.蛋白酶、核酸酶和抗體酶

蛋白酶：可以水解蛋白質(zhì)肽鍵的酶。

核酸酶：催化核酸酯鍵水解的酶。

抗體酶：具有酶活性的抗體。

2. 蛋白質(zhì)降解與DNA降解

蛋白質(zhì)降解：是指食物中的蛋白質(zhì)要經(jīng)過蛋白質(zhì)降解酶的作用降解為多肽和氨基酸被人體吸收的過程。

DNA降解：是DNA分子中的堿基和戊糖間的氮糖苷鍵發(fā)生水解，使DNA鏈發(fā)生斷裂。

3.單克隆抗體與多克隆抗體

單克隆抗體：有同一B淋巴細(xì)胞在應(yīng)答同一種抗原時(shí)合成并分泌的抗體，均一，只識(shí)別抗原的同一表位。

多克隆抗體：多個(gè)不同的B淋巴細(xì)胞在應(yīng)答同一種抗原時(shí)，產(chǎn)生的可特異性結(jié)合該抗原不同表位的抗體混合物，這些抗體分子的組成之間存在一定差異。

4.酶的專一性與立體異構(gòu)專一性

酶的專一性:是指酶對(duì)催化的反應(yīng)和反應(yīng)物有嚴(yán)格的選擇性。一種酶只能催化一種或一類十分相似的反應(yīng)。

立體異構(gòu)專一性:酶除了對(duì)底物分子的化學(xué)結(jié)構(gòu)有要求外，對(duì)其立體異構(gòu)也有一定的要求。

5.蛋白質(zhì)變性與DNA變性

蛋白質(zhì)變性：是在某些物理和化學(xué)因素作用下，其一級(jí)結(jié)構(gòu)不變，高級(jí)結(jié)構(gòu)改變，從而改變或者失去生物活性的現(xiàn)象。

DNA變性：是破壞堿基堆積力和氫鍵的相互作用，實(shí)質(zhì)是DNA雙螺旋區(qū)的氫鍵的斷裂，不涉及共價(jià)鍵的斷裂，由雙鏈變?yōu)閱捂湣?/p>

二、簡(jiǎn)答題：?

1.簡(jiǎn)述Edman化學(xué)降解法測(cè)定氨基酸序列的基本原理。?

答：PITC+peptide生成PTC-肽，然后在無水三氟乙酸中，最靠近PTC處的AA肽鍵斷鍵，生成苯氨基噻唑啉酮，在三氟乙酸水溶液中，ATZ轉(zhuǎn)化為PTH-氨基酸，每次只水解下來一個(gè)AA,剩余的肽鍵暴露出一個(gè)新的N殘基。在于PITC發(fā)生第二輪反應(yīng)，依次類推。

2.簡(jiǎn)述ELISA的基本步驟。?

答：1.用樣品包被表面樣品中含待檢抗原和其他抗原。

2.用非特異性蛋白質(zhì)封閉未被結(jié)合的部位，

3.于待檢抗原的第一抗體溫育。

4.與酶聯(lián)的第二抗體溫育。

5.加入底物。

6.形成有色產(chǎn)物表明待測(cè)抗體的存在。

3.簡(jiǎn)述氧化磷酸化的基本原理。

答：氧化磷酸化是生物體內(nèi)細(xì)胞的重要能量轉(zhuǎn)化過程是細(xì)胞呼吸的最終代謝途徑，位于糖酵解和三羧酸循環(huán)之后，是產(chǎn)生“能量通貨"ATP的主要步驟。這一過程可看作電子傳遞過程中偶聯(lián)ADP磷酸化，生成ATP。氧化磷酸化發(fā)生在原核生物的細(xì)胞膜，或者真核生物的線粒體內(nèi)膜_上。ADP得到電子，是氧化過程;同時(shí),ADP得到磷酸根，生成ATP。

4.如何鑒定蛋白質(zhì)和RNA的純度??

答：鑒定蛋白質(zhì)：電泳分析法，超速離心法，HPLC分析法，N-末端分析法。

?鑒定RNA：1.電泳分析和免疫學(xué)分析2.免疫學(xué)分析和活性濃度測(cè)定3.比活力測(cè)定和電泳分析4.活性濃度測(cè)定和Km測(cè)定5.Km測(cè)定和比活力測(cè)定。

5.簡(jiǎn)述糖酵解途徑中三個(gè)不可逆反應(yīng)步驟?

?答：1，葡萄糖的磷酸化。2，磷酸果糖的磷酸化。3，第二處底物水平的磷酸化。

作業(yè)22

一、名詞解釋：

1.酰胺平面 ：肽鍵具有一定程度的雙鍵性質(zhì)，位于同一平面參與肽鍵的六個(gè)質(zhì)子C、H、O、D、Cα1、Cα2不能自由轉(zhuǎn)動(dòng)，此平面為酰胺平面也呈肽平面。

2.構(gòu)型與構(gòu)象

構(gòu)型：是指分子中由化學(xué)鍵所固定的原子在空間的排列，這種排列是穩(wěn)定的。構(gòu)象是由分子內(nèi)單鍵的內(nèi)旋轉(zhuǎn)而產(chǎn)生的結(jié)構(gòu)異構(gòu)體。

3.結(jié)構(gòu)域與功能域

結(jié)構(gòu)域：多肽鏈在二級(jí)結(jié)構(gòu)或超二級(jí)結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上形成三級(jí)結(jié)構(gòu)的局部折疊區(qū)，為獨(dú)立的緊密球狀突體。

功能域：蛋白質(zhì)分子中能夠獨(dú)立存在的功能，單位可以由一個(gè)或多個(gè)結(jié)構(gòu)域組成。

4.蛋白質(zhì)變性與降解

蛋白質(zhì)變性：蛋白質(zhì)在受到物理、化學(xué)因素影響時(shí)，生物活性喪失，溶解度降低，不對(duì)稱性增多以及其他物理化學(xué)常數(shù)的變化。

降解：指食物中蛋白質(zhì)經(jīng)過蛋白質(zhì)降解酶的作用，降解為多肽和氨基酸，然后被人體吸收的過程。

二、填空題

1.別構(gòu)酶除含有(活性)部位外，還具有(調(diào)節(jié))部位，可無某些化合物可逆地非共價(jià)結(jié)合，進(jìn)而改變酶的結(jié)構(gòu)和活性；

2.嘌呤環(huán)結(jié)構(gòu)中的C4、C5和N7來源于（Gly）(用氨基酸縮寫符號(hào)表示)；

3.蛋白質(zhì)通過(共價(jià))鍵連接或(氫)鍵連接被磷酸化；

4.在丙酮酸脫氫酶復(fù)合體中，丙酮酸脫氫酶的輔酶是(TPP)，二氫硫辛酰轉(zhuǎn)乙酰酶的輔酶是(硫辛酸)，二氫硫辛胺脫氫酶的輔酶是(FAD)。

作業(yè)23

一、判斷題

1.共價(jià)調(diào)節(jié)酶是通過其它酶對(duì)其多肽鏈上某些基團(tuán)進(jìn)行可逆的共價(jià)修飾，使共

價(jià)調(diào)節(jié)酶處于活性與非活性的互變可逆過程。（√）

2.牛脾磷酸二酯酶切割DNA鏈后產(chǎn)生5'-核苷酸。（×）

3、酶的可逆抑制劑和不可逆抑制劑都與酶以非共價(jià)鍵結(jié)合。（×）

4、S型曲線代表負(fù)協(xié)同效應(yīng)，表觀雙曲線代表正協(xié)同效應(yīng)。（×）

5、Hill系數(shù)＞1時(shí)，產(chǎn)生負(fù)協(xié)同效應(yīng)；＜1時(shí)產(chǎn)生正協(xié)同效應(yīng)。（×）

6、ATP是ATCase的激活劑，CTP是ATCase的抑制劑。（√）

7、ATCase和3-磷酸甘油脫氫酶均屬于正協(xié)同效應(yīng)別構(gòu)酶。（×）

8、Km和Ks都能準(zhǔn)確反映酶與底物的親和力。（×）

9、根據(jù)L=T＋W，當(dāng)△W＜0時(shí)，該DNA處于負(fù)超螺旋狀態(tài)。（√）

10、氨基酸、多肽鏈、蛋白質(zhì)和核苷酸都有對(duì)應(yīng)的等電點(diǎn)。（×）

二、簡(jiǎn)答題

1.簡(jiǎn)述酶活性部位的基本特點(diǎn)。

答：酶活性部位都位于酶分子表面呈裂縫狀，都有兩個(gè)功能部位：第一個(gè)結(jié)合部位有一些參與底物結(jié)合的有一定特性基因組成。第二個(gè)是催化部位，有一些參與催化反應(yīng)的基因組成底物的鍵在此被打斷或形成新的鍵。

2.簡(jiǎn)述原核生物與真核mRNA結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)。

答：從分子結(jié)構(gòu)上看，真核和原核mRNA是一樣的，都是核糖核酸，并且都由基因轉(zhuǎn)入而來，兩者的區(qū)別：

①原核mRNA常以多順反子形式存在真核一單順反子形式存在;

②原核mRNA轉(zhuǎn)錄與翻譯一般是偶聯(lián)的，真核轉(zhuǎn)錄的mRNA前體則需憑轉(zhuǎn)錄后加工，為成熟的mRNA和蛋白質(zhì)結(jié)合生成信息體開始工作;

③原核mRNA半收期短，真核則較長(zhǎng);

④原核與真核生物mRNA的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)也不同。

3.簡(jiǎn)述生物體代謝過程中丙酮酸的可能去路。

答:①乳酸（人體），乙醇（微生物），草酰乙酸;

②進(jìn)入檸檬酸循環(huán)是其重要的代謝途徑;

③進(jìn)入線粒體轉(zhuǎn)變?yōu)橐阴oA連接糖酵解和三羧酸循環(huán)的紐帶。

4.如何鑒定蛋白質(zhì)的純度？如何定量蛋白質(zhì)含量？

答:蛋白質(zhì)的純度鑒定可通過SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法。定量蛋白質(zhì)含量可通過凱式定氮法或雙縮脲試劑法。

作業(yè)24

1.在生物體代謝過程中生成的丙酮酸可進(jìn)入哪些代謝途徑是寫出代謝步驟？

答：（1） 供氧不足時(shí)，丙酮酸在乳酸脫氫酶的催化下，NADH + H+供氫，還原生成乳酸。

（2） 供氧充足時(shí)，丙酮酸進(jìn)入線粒體，在丙酮酸脫氫酶復(fù)合體的催化下，氧化脫羧生成乙酰CoA，再經(jīng)

過三羧酸循環(huán)和氧化磷酸化，徹底氧化生成CO2、H2O和ATP。

（3） 丙酮酸進(jìn)入線粒體，在丙酮酸羧化酶的催化下生成草酰乙酸，后者經(jīng)磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶催化

生成磷酸烯醇式丙酮酸，再異生為糖。

（4） 丙酮酸進(jìn)入線粒體，在丙酮酸羧化酶的催化下生成草酰乙酸，后者與乙酰CoA縮合成檸檬酸；可促

進(jìn)乙酰CoA進(jìn)入三羧酸循環(huán)徹底氧化。

（5） 丙酮酸進(jìn)入線粒體在丙酮酸羧化酶的催化下生成草酰乙酸，后者與乙酰CoA縮合成檸檬酸；檸檬酸

出線粒體在細(xì)胞漿中經(jīng)檸檬裂解酶催化生成乙酰CoA，后者可作為脂酸、膽固醇等的合成原料。

（6） 丙酮酸可經(jīng)還原性氨基化生成丙氨酸等非必需氨基酸。

決定丙酮酸代謝的方向是各條代謝途徑中關(guān)鍵酶的活性，這些酶受到變構(gòu)效應(yīng)劑與激素的調(diào)節(jié)。

2.軟脂酰COA進(jìn)入β-氧化的主要途徑有哪些，計(jì)算在理論上可產(chǎn)生多少ATP？

答：脂肪酸β-氧化在線粒體中進(jìn)行，經(jīng)過脫氫(輔酶為FAD)、加水、再脫氫(輔酶為NAD+)、硫解4步反應(yīng)。

1分子軟脂酸徹底氧化分解凈生成129分子ATP

軟脂酸氧化生成軟脂酰輔酶A,軟脂酰輔酶A有16個(gè)C,反應(yīng)過后生成8個(gè)乙酰輔酶A.每個(gè)乙酰輔酶A經(jīng)三羧酸循環(huán)生成12個(gè)ATP,一共96個(gè).

每生成一個(gè)乙酰輔酶A,同時(shí)生成1個(gè)FADH2和1個(gè)NADH.在生成8個(gè)乙酰輔酶A的過程中（最后一個(gè)不算）一共生成7個(gè)FADH2和7個(gè)NADH,呼吸鏈氧化生成35個(gè)ATP.

開始時(shí)軟脂酸變成軟脂酰輔酶A的過程中耗去兩個(gè)ATP,所以一共是96+35-2=129個(gè)

3.1mol飽和硬脂酸(18c)在體內(nèi)被徹底氧化分解后能凈生成多少ATP?簡(jiǎn)述主要代謝計(jì)算步驟。

答：120molATP。1mol硬脂酸（ 18 碳飽和酸）經(jīng)過β－氧化（脫氫、水化、再脫氫、硫解），產(chǎn)生9mol乙酰輔酶A。1次β－氧化產(chǎn)生4molATP，1mol乙酰輔酶A經(jīng)三羧酸循環(huán)徹底氧化產(chǎn)生10molATP，則 1mol 硬脂酸徹底氧化凈生成 ATP 數(shù)為：

8×4＋9×10－2（活化消耗）＝120mol。

作業(yè)25

一.名詞解釋

1.DNA主帶與衛(wèi)星帶

DNA主帶：密度離心中有一個(gè)寬峰度組成，不包括可見的衛(wèi)星DNA組成的分離條帶即DNA主帶。

衛(wèi)星帶：由一些短的高度重復(fù)序列組成的即衛(wèi)星帶。

2.肽鍵與酰胺平面

肽鍵：一分子氨基酸的α-氨基與另一分子氨基酸的α-羧基脫水縮合形成的共價(jià)鍵。

酰胺平面：肽鍵中的C—N鍵具有部分雙鍵的特征，不能自由旋轉(zhuǎn)，這些現(xiàn)象是因共振而產(chǎn)生的。其結(jié)果使肽鍵處在一個(gè)剛性的平面上，此平面被稱為肽鍵平面(酰胺平面）。

3.Cot2/1和Ta值

COT2/1：DNA初始濃度（co）與復(fù)性完全一半時(shí)的時(shí)間的乘積。

Ta值：退火溫度。是指引物和模板結(jié)合時(shí)候的溫度參數(shù) 當(dāng)50%的引物和互補(bǔ)序列表現(xiàn)為雙鏈DNA分子時(shí)的溫度。

4.鹽溶與鹽析

鹽溶：在蛋白質(zhì)水溶液中，加入少量的中性鹽，如硫酸鈉、氯化鈉等，會(huì)增加蛋白質(zhì)分子表面的電荷，增強(qiáng)蛋白質(zhì)分子與水分子的作用，從而使蛋白質(zhì)在水溶液中的溶解度增大。這種現(xiàn)象稱為鹽溶。

鹽析：是指在蛋白質(zhì)水溶液中加入中性鹽，隨著鹽濃度增大而使蛋白質(zhì)沉淀出來的現(xiàn)象。

5.抗體酶與核酶

抗體酶：又稱催化抗體，是一類具有催化能力的免疫球蛋白，即通過一系列化學(xué)與生物技術(shù)方法制備出的具有催化活性的抗體，它既具有相應(yīng)的免疫活性，又能像酶那樣催化某種化學(xué)反應(yīng)。

核酶：是具有催化功能的小分子RNA? ，屬于生物催化劑，可降解特異的mRNA序列。

6.單純蛋白質(zhì)和綴合蛋白質(zhì)

單純蛋白質(zhì)：簡(jiǎn)單蛋白質(zhì)是水解后只產(chǎn)生氨基酸而不產(chǎn)生其他物質(zhì)的蛋白質(zhì)。

綴合蛋白質(zhì)： 結(jié)合蛋白質(zhì)的分子中除氨基酸組分之外，還含有非氨基酸物質(zhì)，后者稱為輔因子，二者以共價(jià)或非共價(jià)形式結(jié)合，往往作為一個(gè)整體從生物材料中被分離出來。

二、簡(jiǎn)答題和論述題

1.簡(jiǎn)述Sanger雙脫氧鏈終止法測(cè)序的基本原理

答：雙脫氧鏈終止法測(cè)序的基本原理是：以待測(cè)DNA片段為模板，利用酶法合成與待測(cè)片段互補(bǔ)的DNA鏈。在正常的合成體系中，分別加入4種3'位缺少羥基的雙脫氧核苷酸底物，即ddATP、ddGTP、ddCTP、ddTTP，制備出四套末端標(biāo)記的DNA片段。由于ddNTPs一旦摻入合成的DNA鏈，其鏈的合成即被終止，這樣得到一套長(zhǎng)短不一的片段，而每套片段被打斷的位置卻位于同一堿基，4套片段分別打斷在A、T、C、G處。當(dāng)對(duì)這4個(gè)不同堿基產(chǎn)生的4套DNA片段進(jìn)行變性膠電泳分離時(shí)，即可產(chǎn)生一個(gè)可以直接讀出DNA順序的梯狀區(qū)帶。

2.簡(jiǎn)述酶的化學(xué)本質(zhì)

答：酶的化學(xué)本質(zhì)是蛋白質(zhì)。具有酶活性的蛋白質(zhì)分為簡(jiǎn)單蛋白質(zhì)類和結(jié)合蛋白質(zhì)類。簡(jiǎn)單蛋白質(zhì)類的酶是由氨基酸組成的，不含任何其他物質(zhì)，如胃蛋白酶。結(jié)合蛋白質(zhì)類的酶是由簡(jiǎn)單蛋白質(zhì)與輔基組成的，如乳酸脫氫酶、轉(zhuǎn)氨酶。組成酶的簡(jiǎn)單蛋白質(zhì)部分叫做酶蛋白或主酶，輔基部分叫做輔酶。一般是主酶與輔酶相結(jié)合，成為全酶，才能起到酶的作用。蛋白質(zhì)所具有的理化性質(zhì),酶都具有。

3.簡(jiǎn)述親和層析的基本原理。

答：親和層析是應(yīng)用生物高分子與配基可逆結(jié)合的原理，將配基通過共價(jià)鍵牢固結(jié)合于載體上而制得的層析系統(tǒng)。這種可逆結(jié)合的作用主要靠生物高分子對(duì)它的配基的空間結(jié)構(gòu)的識(shí)別。

4.簡(jiǎn)述凝膠過濾法的基本原理

答：凝膠過濾層析也稱分子篩層析、排阻層析。是利用具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠的分子篩作用，根據(jù)被分離物質(zhì)的分子大小不同來進(jìn)行分離。層析柱中的填料是某些惰性的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物質(zhì)，多是交聯(lián)的聚糖(如葡聚糖或瓊脂糖)類物質(zhì)，小分子物質(zhì)能進(jìn)入其內(nèi)部，流下時(shí)路程較長(zhǎng)，而大分子物質(zhì)卻被排除在外部，下來的路程短，當(dāng)一混合溶液通過凝膠過濾層析柱時(shí)，溶液中的物質(zhì)就按不同分子量篩分開了。

5.簡(jiǎn)述酶活性部位的基本特點(diǎn)。

答：酶的活性部位都位于酶分子表面呈裂縫狀，都有兩個(gè)功能部位：

第一個(gè)是結(jié)合部位，由一些參與底物結(jié)合的有一定特性基團(tuán)組成；

第二個(gè)是催化部位，由一些參與催化反應(yīng)的基團(tuán)組成，底物的鍵在此被打斷或形成新的鍵。

6.簡(jiǎn)述凝膠過濾法分離蛋白質(zhì)的基本原理

答：凝膠過濾法分離蛋白質(zhì)其基本原理是利用被分離的分子大小不同及固定相（凝膠）具有分子篩的特點(diǎn)：本實(shí)驗(yàn)使用交聯(lián)葡聚凝膠，其具有一定孔徑的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。高親水，在水溶液里吸水可膨脹。當(dāng)其填充完成后，加入混合分子大小不同的分離液。由于大分子物質(zhì)只能沿著膠粒之間的間隙向下流動(dòng)，所經(jīng)路短，最先流出；而涌入膠粒內(nèi)部的小分子物質(zhì)，受迷宮效應(yīng)的影響，要經(jīng)過層層擴(kuò)散向下流動(dòng)，所經(jīng)路程長(zhǎng)，最后流出，通透性居中的分子則后于大分子而先于小分子流出。從而按大到小的順序流出實(shí)現(xiàn)分離的目的。

7.簡(jiǎn)述免疫親和層析的基本原理

答：免疫層析法的原理是將特異的抗體先固定于硝酸纖維素膜的某一區(qū)帶，當(dāng)該干燥的硝酸纖維素一端浸入樣品（尿液或血清）后，由于毛細(xì)管作用，樣品將沿著該膜向前移動(dòng)，當(dāng)移動(dòng)至固定有抗體的區(qū)域時(shí)，樣品中相應(yīng)的抗原即與該抗體發(fā)生特異性結(jié)合，若用免疫膠體金或免疫酶染色可使該區(qū)域顯示一定的顏色，從而實(shí)現(xiàn)特異性的免疫診斷。

8.如何鑒定核酸的純度并測(cè)定其濃度？

答：鑒定核酸的純度① 如果是看DNA或者RNA的純度，可以通過OD260/OD280比值來衡量，DNA OD260/OD280比值在1.8-2.0；RNA ＞2.0。如果比值＜1.8，說明有蛋白質(zhì)殘留。

② 如果是多個(gè)核酸樣品混合物，則通過電泳來看目的條帶在混合物中比例。

測(cè)定其濃度：核酸的定量與純度的測(cè)定目前實(shí)驗(yàn)室常用的測(cè)定方法主要有分光光度法、熒光染料法、PCR法和雜交定量法等。分光光度法包括紫外分光光度法，定糖定磷法及基于酶催化的核酸定量方法等。

9.2，6-二磷酸果糖調(diào)控EMP途徑的主要機(jī)制是什么？

答：2，6-二磷酸果糖可被二磷酸果糖激酶-2去磷酸而生成6-磷酸果糖，失去其調(diào)節(jié)作用。2，6-二磷酸果糖的作用在于增強(qiáng)磷酸果糖激酶-1對(duì)6-磷酸果糖的親和力和取消ATP的抑制作用。

作業(yè)26

一、名詞解釋

1.DNA變性與蛋白質(zhì)變性

DNA變性：是指核酸雙螺旋堿基對(duì)的氫鍵斷裂，堿基間的堆積力遭到破壞，雙鏈變成單鏈，使核酸的天然構(gòu)象和性質(zhì)發(fā)生改變，但不涉及其一級(jí)結(jié)構(gòu)的改變。

蛋白質(zhì)變性：是受物理或化學(xué)因素的影響，改變其分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)和性質(zhì)的作用。

2.蛋白質(zhì)降解與DNA降解

蛋白質(zhì)降解：指食物中的蛋白質(zhì)要經(jīng)過蛋白質(zhì)降解酶的作用降解為多肽和氨基酸然后被人體吸收的過程。

DNA 降解：DNA 分子中的堿基和戊糖間的氮糖苷鍵發(fā)生水解， 使DNA鏈發(fā)生斷裂。DNA降解的因素很多。DNA降解對(duì)法醫(yī)DNA檢測(cè)的影響較大，克服DNA降解的影響是法醫(yī)物證學(xué)研究的主要方向之一。

3.紅皇后假說

紅皇后假說：”由美國(guó)芝加哥大學(xué)進(jìn)化生物學(xué)家范瓦倫（L. van Valen）于1973年根據(jù)《愛麗絲鏡中奇遇記》的故事提出的假說?！凹t皇后假說”描述了物種之間持續(xù)的演化競(jìng)爭(zhēng)，其由美國(guó)芝加哥大學(xué)進(jìn)化生物學(xué)家利·范·瓦倫提出，用以解釋他所觀察到的物種恒定滅絕風(fēng)險(xiǎn)定律，即一個(gè)分類群的滅絕可能性，與其存在的時(shí)間長(zhǎng)度沒有關(guān)系。?

4.Ks和Km值

Ks:指不透明物質(zhì)的深度值，他是一個(gè)經(jīng)驗(yàn)值，也是一個(gè)相對(duì)值。

Km:是表示當(dāng)反應(yīng)速率達(dá)到最大反應(yīng)速率一半時(shí)的底物濃度。

5.基因組印記

基因組印記（Genomic imprinting）：又稱遺傳印記，是通過生化途徑，在一個(gè)基因或基因組域上標(biāo)記其雙親來源信息的遺傳學(xué)過程。

6.等電點(diǎn)與等離子點(diǎn)

等電點(diǎn)：等電點(diǎn)是兩性電解質(zhì)所帶電荷因溶液的PH值不同而改變，當(dāng)兩性電解質(zhì)正負(fù)電荷數(shù)值相等時(shí)，溶液的PH值既稱為該物質(zhì)的等電點(diǎn)。

等離子點(diǎn)：蛋白質(zhì)在純水中的帶電狀態(tài)，沒有其他離子干擾完全由氫離子的解離和結(jié)合來決定，這種條件下的等電點(diǎn)稱為等離子點(diǎn)。

7.RNA世界假說

RNA世界假說：是科學(xué)依據(jù)多年的科學(xué)研究而提出的一條關(guān)于生命科學(xué)的理論。

8.鹽溶與鹽析

鹽溶：在蛋白質(zhì)水溶液中，加入少量的中性鹽，如硫酸鈉、氯化鈉等，會(huì)增加蛋白質(zhì)分子表面的電荷，增強(qiáng)蛋白質(zhì)分子與水分子的作用，從而使蛋白質(zhì)在水溶液中的溶解度增大。這種現(xiàn)象稱為鹽溶。

鹽析：是指在蛋白質(zhì)水溶液中加入中性鹽，隨著鹽濃度增大而使蛋白質(zhì)沉淀出來的現(xiàn)象。

9.蛋白質(zhì)功能域和結(jié)構(gòu)域

蛋白質(zhì)功能域：是蛋白質(zhì)分子中能獨(dú)立存在的功能單位。

結(jié)構(gòu)域：是位于超二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)間的一個(gè)層次。結(jié)構(gòu)域是在蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu)內(nèi)的獨(dú)立折疊單元，通常都是幾個(gè)超二級(jí)結(jié)構(gòu)單元的組合。

10.基因家族與基因簇

基因家族：是來源于同一個(gè)祖先，由一個(gè)基因通過基因重復(fù)而產(chǎn)生兩個(gè)或更多的拷貝而構(gòu)成的一組基因，它們?cè)诮Y(jié)構(gòu)和功能上具有明顯的相似性，編碼相似的蛋白質(zhì)產(chǎn)物， 同一家族基因可以緊密排列在一起，形成一個(gè)基因簇，但多數(shù)時(shí)候，它們是分散在同一染色體的不同位置，或者存在于不同的染色體上的，各自具有不同的表達(dá)調(diào)控模式。

基因簇：指基因家族中的各成員緊密成簇排列成大串的重復(fù)單位，位于染色體的特殊區(qū)域。

二、簡(jiǎn)答題和論述題

1.簡(jiǎn)述Edman化學(xué)降解法測(cè)定多肽鏈氨基酸序列的基本原理是什么？

答：5，5’-dithiobis-2-nitrobenzoic acid(DTNB) 5,5-二硫基-雙（2-硝基苯甲酸） 5，5-二硫基-雙（2-硝基苯甲酸）(DTNB)在412nm沒有吸收，與巰基反應(yīng)后，生成TNB,TNB在412nm有很強(qiáng)的吸收，可以用于對(duì)肽段的自由巰基進(jìn)行定量分析。

2.什么是免疫親和層析？

答：免疫親和層析或免疫親和色譜，是利用生物體內(nèi)存在的抗原、抗體之間高度特異性的親和力進(jìn)行分離的方法。 親和層析的應(yīng)用主要是生物大分子的分離、純化。

3.蛋白質(zhì)a-螺旋結(jié)構(gòu)有什么特征？

答：（1）肽鏈骨架圍繞一個(gè)軸，以螺旋的方式伸展。

（2）螺旋形成是自發(fā)的肽鏈，肽鏈骨架上由n位氨基酸殘基上的-C=O與n+4位殘基上的-NH之間形成的氫鍵起著穩(wěn)定的作用。

（3）每隔3.6個(gè)殘基，螺旋上升一圈，每一個(gè)氨基酸殘基繞螺旋軸100度，螺距為0.54nm，每個(gè)氨基酸殘基沿軸上升0.15nm,螺旋的半徑是0.23nm，和中角分別為負(fù)57度和負(fù)48度。

（4）a螺旋有左手和右手之分，蛋白質(zhì)中的a螺旋主要是右手螺旋。

（5）氨基酸殘基的R集團(tuán)位于螺旋的外側(cè)，并不參與螺旋的形成，但其大小形狀和帶電狀態(tài)都能影響螺旋的形成和穩(wěn)定。

4.氧化磷酸化作用的機(jī)制是什么？

答：指電子從NADH或FADH 2 經(jīng)電子傳遞鏈傳遞到分子氧形成水同時(shí)耦聯(lián)ADP磷酸化生成ATP稱為電子傳遞耦聯(lián)的磷酸化或氧化磷酸化是生成ATP的主要途徑。目前大家一致認(rèn)為化學(xué)滲透學(xué)說是解釋氧化磷酸化的最佳學(xué)說,此學(xué)說的主要內(nèi)容如下：1)呼吸鏈中的電子傳遞體在線粒體內(nèi)膜中有著特定的不對(duì)稱分布,遞氫體和電子傳遞體是間隔交替排列的。催化反應(yīng)是定向的。2)在電子傳遞過程中,復(fù)合物Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ中的傳遞體起質(zhì)子泵的作用,將H+從線粒體內(nèi)膜基質(zhì)側(cè)定向的泵至內(nèi)膜外側(cè)空間而將電子(2e)傳給其后的電子傳遞體。3)線粒體內(nèi)膜對(duì)質(zhì)子是不透性的,泵到內(nèi)膜外側(cè)H+不能自由返回,這樣就能在電子傳遞過程在內(nèi)膜兩側(cè)建立起質(zhì)子梯度。形成膜電位。這種跨膜的質(zhì)子電化學(xué)梯度就是推動(dòng)ATP合成的原動(dòng)力,成為質(zhì)子推動(dòng)力。4)線粒體F1一F0一ATPase復(fù)合物能利用ATP水解能量將質(zhì)子泵出內(nèi)膜,但當(dāng)存在足夠高的質(zhì)子電化學(xué)梯度時(shí),強(qiáng)大的質(zhì)子流通過F1一F0一ATPase進(jìn)入線粒體基質(zhì)時(shí),釋放的自由能推動(dòng)ATP合成。

5.為什么在一定程度上RNA“抗酸”不“抗堿”？

答：RNA的磷酸酯鍵易被水解。在堿性環(huán)境下，RNA能夠形成2’，3’-環(huán)磷酸酯，繼續(xù)水解生成2’-核苷酸和3’-核苷酸。所以RNA在一定程度上“抗酸”不“抗堿”。

6.Ala在體內(nèi)能否異生成葡萄糖？

答：能。（1）丙氨酸經(jīng)GPT催化生成丙酮酸；（2）丙酮酸在線粒體內(nèi)經(jīng)丙酮酸羧化酶催化生成草酰乙酸，后者經(jīng)蘋果酸脫氫酶催化生成蘋果酸出線粒體，在胞液中經(jīng)蘋果酸脫氫酶催化生成草酰乙酸，后者在磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶作用下生成磷酸烯醇式丙酮酸；（3）磷酸烯醇式丙酮酸循糖酵解途徑至1,6-雙磷酸果糖；（4）1,6-雙磷酸果糖經(jīng)果糖雙磷酸酶-1催化生成6-磷酸果糖，在異構(gòu)為6-磷酸葡萄糖；（5）6-磷酸葡萄糖在葡萄糖-6-磷酸酶作用下生成葡萄糖 。

7.與離子交換樹脂比較，纖維素離子交換劑有哪些優(yōu)越性？

答：離子交換纖維素比離子交換樹脂的優(yōu)越性在于它本身并不含有可能存在的某些雜質(zhì)，人工合成的樹脂有可能存在單體和二聚體等，用離子交換樹脂分離酶和生物活性大分子，其上的雜質(zhì)可能會(huì)造成酶和生物大分子失活。按照道理說離子交換纖維素的制備比離子交換樹脂復(fù)雜，但是明顯離子交換纖維素更能保證分離后得到產(chǎn)物的純度和效率。

8.Emp途徑中有哪些不可逆反應(yīng)步驟？

答：糖酵解途徑中有3個(gè)不可逆反應(yīng)：分別由己糖激酶（葡萄糖激酶）、6-磷酸果糖激酶1和丙酮酸激酶催化的反應(yīng)。它們是糖無氧酵解途徑的三個(gè)調(diào)節(jié)點(diǎn)，其中以6-磷酸果糖激酶1的活性是該途徑中的主要調(diào)節(jié)點(diǎn)。

9.如何純化出mRNA？

答：寡聚（dT）－纖維素柱層析法，即分離mRNA的標(biāo)準(zhǔn)方法；

（2）寡聚（dT）－纖維素液相離心法，即用寡聚（dT）－纖維素直接加入到總的 RNA溶液中并使mRNA與寡聚（dT）－纖維素結(jié)合，離心收集寡聚（dT）－纖維素／mRNA復(fù)合物，再用洗脫液分離mRNA，然后離心除去寡聚（dT）－纖維素；

（3）其它一些方法：如寡聚（dT）－磁性球珠法等。

10. 乳酸在理論上能否異生成葡萄糖??

答：能。①乳酸經(jīng)LDH催化生成丙酮酸；②丙酮酸在線粒體內(nèi)經(jīng)丙酮酸羧化酶催化生成草酰乙酸，后者經(jīng)GOT催化生成天冬氨酸出線粒體，在胞液中經(jīng)GOT催化生成草酰乙酸，后者在磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶作用下生成磷酸烯醇式丙酮酸；③磷酸烯醇式丙酮酸循糖酵解途徑逆行至1，6-雙磷酸果糖；④1，6-雙磷酸果糖經(jīng)果糖雙磷酸酶-1催化生成F-6-P，再異構(gòu)為G-6-P；⑤G-6-P在葡萄糖-6-磷酸酶作用下生成葡萄糖。

作業(yè)27

1.1mol葡萄糖分子在糖酵解過程中可產(chǎn)生多少mol的NADH？此NADH中的H是通過何種途徑傳遞到線粒體呼吸鏈的？可能產(chǎn)生多少摩爾ATP？

答：1分子葡萄糖經(jīng)糖酵解過程,生成2分子丙酮酸。該過程產(chǎn)生2個(gè)NADH,消耗2分子ATP,生成4分子ATP。酵解產(chǎn)生的NADH是通過電子傳遞系轉(zhuǎn)運(yùn)至線粒體。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的NADH是通過蘋果酸-天冬氨酸穿梭途徑進(jìn)入線粒體開始進(jìn)一步的氧化的。首先，在胞漿中蘋果酸脫氫酶與NADH作用生成蘋果酸以及NAD+。

然后，第一個(gè)反向轉(zhuǎn)運(yùn)體將蘋果酸從胞漿引入線粒體基質(zhì)與此同時(shí)并將α-酮戊二酸從線粒體基質(zhì)中導(dǎo)出到胞漿中。當(dāng)蘋果酸到達(dá)線粒體基質(zhì)后，它被線粒體蘋果酸脫氫酶轉(zhuǎn)換成草酰乙酸，與此同時(shí)NAD+被其中的兩個(gè)電子還原成NADH且氫離子被釋放出來。最后，NADH和線粒體中生成的NADH一樣，將電子傳遞給NADH脫氫酶復(fù)合體，進(jìn)入氧化電子鏈。 1mol葡萄糖分子在糖酵解過程中可產(chǎn)生2mol的NADH?？赡墚a(chǎn)生4摩爾ATP。

2.甘油在人體內(nèi)通過哪些途徑最終被代謝為H2O和CO2？

答：通過以下途徑甘油+ATP→α-磷酸甘油+ADP；α-磷酸甘油 + NAD+→ NADH+H+ + 磷酸二羥丙酮； 磷酸二羥丙酮→甘油醛-3-磷酸； 甘油醛-3-磷酸 + NAD++ Pi→甘油酸1,3-二磷酸 + NADH+H+； 甘油酸1,3-二磷酸 + ADP→甘油酸-3-磷酸 + ATP； 甘油酸-3-磷酸→甘油酸-2-磷酸→磷酸稀醇式丙酮酸； 磷酸稀醇式丙酮酸+ ADP→ 丙酮酸 + ATP； 丙酮酸 + NAD+→乙酰輔酶A + NADH+H+ + CO2； 然后進(jìn)入乙酰輔酶A三羧酸循環(huán)徹底氧化。經(jīng)過4次脫氫反應(yīng)生成3摩爾NADH+H+、1摩爾FADH2、以及2摩爾CO2，并發(fā)生一次底物水平磷酸化，生成1摩爾GTP。

3.1mol飽和硬脂酸（18C）在體內(nèi)被徹底氧化分解后能夠凈生成多少ATP？簡(jiǎn)述主要代謝和計(jì)算步驟

答：1mol硬脂酸（ 18 碳飽和酸）經(jīng)8次β－氧化（脫氫、水化、再脫氫、硫解），產(chǎn)生9mol乙酰輔酶A。

1次β－氧化產(chǎn)生4molATP，1mol乙酰輔酶A經(jīng)三羧酸循環(huán)徹底氧化產(chǎn)生10molATP，則 1mol 硬脂酸徹底氧化凈生成 ATP 數(shù)為：

8×4＋9×10－2（活化消耗）＝120mol

4.甘油通過哪些途徑可異生成葡萄糖？試闡明主要途徑并說明之

答：甘油——（3—磷酸甘油）——（磷酸二羥丙酮）——（3—磷酸甘油醛）——（1，6—二磷酸果糖）——（6—磷酸果糖）——（6—磷酸葡萄糖）——（葡萄糖）各種糖異生前體（除甘油外）轉(zhuǎn)變成磷酸烯醇式丙酮酸； 磷酸烯醇式丙酮酸轉(zhuǎn)變?yōu)?-磷酸葡萄糖，再生成各種單糖或多糖。從丙酮酸開始合成糖的過程雖然與糖酵解的逆反應(yīng)類似，但是由于己糖激酶、磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶所催化的三個(gè)反應(yīng)很難逆向進(jìn)行。在糖異生作用中，己糖激酶和磷酸果糖激酶催化的兩個(gè)反應(yīng)的逆過程分別由葡萄糖-6-磷酸酶和果糖1，6-二磷酸酶催化完成。丙酮酸激酶催化的反應(yīng)的逆過程，則通過丙酮酸羧化酶催化丙酮酸生成草酰乙酸，再由磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶催化生成磷酸烯醇式丙酮酸。糖異生調(diào)節(jié)饑餓時(shí)，體內(nèi)脂肪及蛋白質(zhì)分解加強(qiáng)，劇烈運(yùn)動(dòng)時(shí)肌肉糖酵解加強(qiáng)，均可提供較多的前體加速肝中的糖異生。?

5.簡(jiǎn)述飽和脂肪酸β-氧化的主要循環(huán)途徑？

6.? 答：飽和脂肪酸β-氧化的主要循環(huán)途徑是：

1．脫氫反應(yīng)由脂酰CoA脫氫酶活化,輔基為FAD,脂酰CoA在α和β碳原子上各脫去一個(gè)氫原子生成具有反式雙鍵的α,β-烯脂肪酰輔酶A.

2．加水反應(yīng)由烯酰CoA水合酶催化,生成具有L-構(gòu)型的β-羥脂酰CoA.

3．脫氫反應(yīng)是在β－羥脂肪酰CoA脫飴酶（輔酶為NAD+）催化下,β-羥脂肪酰CoA脫氫生成β酮脂酰CoA.

4．硫解反應(yīng)由β－酮硫解酶催化,β-酮酯酰CoA在α和β碳原子之間斷鏈,加一分子輔酶A生成乙酰CoA和一個(gè)少兩個(gè)碳原子的脂酰CoA。

6.一分子軟脂酸在體內(nèi)徹底氧化分解能夠生成多少ATP？

答:1mol軟脂酸（含16個(gè)碳）徹底氧化產(chǎn)生8個(gè)乙酰輔酶a.1mol乙酰輔酶a進(jìn)入三羧酸循環(huán)產(chǎn)生10個(gè)ATP,8個(gè)總共產(chǎn)生80個(gè)，一次b-氧化有兩次脫氫，一次交給fad+，一次交給NAD+，兩者得到氫后氧化磷酸化，分別產(chǎn)生1.5,2.5個(gè)ATP，所以一次下來產(chǎn)生4個(gè)ATP,1mol軟脂酸（含16個(gè)碳）徹底氧化要經(jīng)過7次b-氧化，總共生成28個(gè)ATP.因此，1mol軟脂酸（含16個(gè)碳）徹底氧化產(chǎn)生108個(gè)ATP.但是，脂肪酸的活化階段要消耗1分子ATP中的兩個(gè)高能磷酸鍵，相當(dāng)于2分子ATP，所以要減去這過程消耗的，最后凈生成是106個(gè)ATP。

7.線粒體呼吸鏈有哪些主要類型？各有哪些組成？

答：由于線粒體中需要經(jīng)呼吸鏈氧化和電子傳遞的主要是NADH,而FADH2較少,可將呼吸鏈分為主、次呼吸鏈兩種類型。組成：主呼吸鏈（NADH呼吸鏈）——由NADH開始的呼吸鏈, 由復(fù)合物Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ構(gòu)成,從NADH來的電子依次經(jīng)過這三個(gè)復(fù)合物,進(jìn)行傳遞,次呼吸（FADH2呼吸鏈）——由FADH2開始的呼吸鏈, 由復(fù)合物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ構(gòu)成,來自FADH2的電子不經(jīng)過復(fù)合物Ⅰ。

作業(yè) 28

一、判斷題?

1. 凝膠過濾法測(cè)定蛋白質(zhì)分子量是根據(jù)不同蛋白質(zhì)帶電荷多少進(jìn)行的。（ ×）?

2. DNA 雙螺旋的穩(wěn)定作用主要靠堿基間的氫鍵和堿基間的堆積力（√ ）?

3. SDS-PAGE 測(cè)定蛋白質(zhì)分子量的方法是根據(jù)不同蛋白質(zhì)帶電荷多少進(jìn)行的。( ×）?

4. 蛋白質(zhì)的變性是蛋白質(zhì)分子空間結(jié)構(gòu)的破壞，因此常涉及肽鍵的斷裂（× ）?

5. 變性蛋白質(zhì)溶解度降低是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)分子的電荷被中，且除去了蛋白質(zhì)外面的水化層所?

引起的。（× ）?

6. 酶活性中心通常為酶分子表面的一個(gè)裂縫、空隙或口袋?；钚灾行亩辔挥谑杷园被?

殘基，但起催化作用的是親水性氨基酸殘基。(√ )?

7. 別構(gòu)酶動(dòng)力學(xué)曲線都是 S 形曲線。（× ）?

8. 有一天然小肽，用測(cè)定N端法未能測(cè)出α-NH2，則可以認(rèn)為此小肽為環(huán)肽。（× ）?

二、填空題?

1. 別構(gòu)酶除了有活性中心以外，還有別構(gòu)中心，一種典型的別構(gòu)酶的反應(yīng)速率對(duì)底物濃度 曲線為（ S ）形，對(duì)競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑的作用表現(xiàn)出雙相反應(yīng)。?

2. 真核生物 mRNA 一般是單順反子，其前體是不均一核 RNA。在成熟過程中。其 5 端加 上帽子結(jié)構(gòu) 7-甲基鳥苷, 在其 3 端加上尾巴結(jié)構(gòu)多聚腺苷酸, 并借助 Sn RNA 除去（內(nèi) 含）子和拼接（外顯 ）子。?

3. 從葡萄糖到丙酮酸的糖酵解途徑中，有（3 ）處不可逆反應(yīng)，最關(guān)鍵的限速酶是（果糖磷酸 ）激酶；?

4. 根據(jù)酶催化反應(yīng)的類型可把酶分成六大類。在 EC 4.3.2.1 中，“4”代表（裂合 ）酶。?

5. 氨的代謝轉(zhuǎn)變途徑包括：（谷氨酰胺的合成 ）、（ 尿素的生成）和嘧啶環(huán)的合成。?

6. 具有抗氧化的三種維生素是 C、A 和 E?？梢砸暈榧に氐膬煞N維生素是 D 和 A。不能作為輔酶或輔基的維生素是 A、D 和( E)。?

7. （硫胺素 ）可轉(zhuǎn)變?yōu)?TPP，后者是催化丙酮酸或 α-酮戊二酸氧化脫羧反應(yīng)的輔酶，又稱為羧化輔酶。?

8. 真核生物核糖體由（60 ）S 和（40 ）S 兩種亞基組成。?

9.真核細(xì)胞mRNA的轉(zhuǎn)錄后加工過程包括（在5’端加“帽子”結(jié)構(gòu)）（在3’端加多聚A“尾巴”結(jié)構(gòu)）和（去除內(nèi)含子，拼接外顯子）。

10.維持蛋白質(zhì)分子一級(jí)結(jié)構(gòu)的共價(jià)鍵包括（肽）鍵和（二硫）鍵；維持蛋白質(zhì)空間構(gòu)象穩(wěn)定性的是一些次級(jí)鍵，包括（氫）鍵、（鹽）鍵、（疏水）鍵、（范德華）吸引力等。