艾美捷人蛋白C(HCPC-0070)解決方案
人蛋白C背景:
維生素K依賴性酶原C蛋白在肝臟中合成為單鏈多肽,隨后通過從前體分子。在血漿中觀察到痕量的單鏈形式。輕鏈負責蛋白C與磷脂囊泡的鈣依賴性結合,包含11個g-羧基谷氨酸(gla)殘基、1個b-羥基天冬氨酸殘基和2個表皮生長因子(EGF)同源結構域。絲氨酸催化三聯(lián)體位于重鏈中,已鑒定出其中的2種形式。形式“a”和“b”已顯示存在一個糖基化位點的差異,但未觀察到“a”和“b”之間的功能區(qū)別。人C蛋白重鏈Arg-12(牛中的?Arg-14)的單次切割將酶原轉化為絲氨酸蛋白酶,活化的C蛋白。這種切割由α-?凝血酶和內(nèi)皮細胞表面之間的復合物催化 蛋白凝血調(diào)節(jié)蛋白。與其他維生素K依賴性凝血因子不同,活化蛋白通過催化因子Va和VIIIa的蛋白水解失活而起到抗凝血劑的作用。APC還通過與纖溶酶原激活劑抑制劑形成復合物來促進纖維蛋白溶解反應。牛蛋白C是通過修改Walker程序從新鮮的檸檬酸鹽牛血漿制備的,如Haley等人所述使用常規(guī)層析技術從新鮮冷凍的檸檬酸鹽血漿中制備小鼠蛋白C。使用免疫親和層析和常規(guī)技術的組合從新鮮冷凍的檸檬酸鹽人血漿中制備人蛋白C。蛋白C以50%(體積/體積)甘油/水的形式提供,應儲存在-20°C下。通過SDS-PAGE分析確定純度,并使用基于顯色底物的測定法測量活性。
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艾美捷人蛋白C#HCPC-0070參數(shù):
本地化:等離子
血漿濃度:4-5μg/ml(人)(6)
5-10μg/ml(牛)(2)
作用方式:Zymogen;絲氨酸蛋白酶激活蛋白的前體
C(APC)
分子量:62000(人)(7)
5.8萬(牛)(7)
62000(鼠)-根據(jù)人類價值推斷
消光系數(shù):E1 cm,280 nm=14.5(人)(7)
=13.7(牛)(7)
=14.5(鼠)-根據(jù)人類價值推斷
等電點:4.4-4.8(人)(8)
4.2-4.5(牛)(8)
結構:兩條鏈,Mr=4100和21000,二硫鍵連接,
NH2-末端gla結構域兩個EGF結構域
碳水化合物百分比:23%(人體)(7)
14%(牛)(7)
翻譯后修飾:11個gla殘基(牛),
一種β-羥基天冬氨酸
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人蛋白C文獻參考:
1 . ?Esmon, C .T ., Progress in Thromb . and Hemostas ., 10, 25 (1984) .
2 . ?Stenflo, J ., Semin . in Thromb . and Hemostas ., 10, 109 (1984) .
3 . ?Walker, F .J ., et al., Biochim . Biophys . Acta, 571, 333 (1979) .
4 . ?Haley, P .E ., et al., J . Biol . Chem ., 264, 16303 (1989) .
5 . ?Jenny, R .J ., et al., Prep . Biochem ., 16, 227 (1986) .
6 . ?Griffen, J .H ., et al.,Blood, 60, 261 (1982) .
7 . ?Kisiel, W ., et al., Methods Enzymol ., 80, 320 (1981) .
8 . ?Discipio, R .G ., et al., Biochemistry, 18, 899 (1979) .
9 . ?Bajaj, S .P ., et al., Prep . Biochem ., 11, 397 (1981) .
10 . Kalafatis, M . et al., J . Biol . Chem ., 291, 1578 (2016)