Alexa Fluor 647標(biāo)記鏈霉親和素,關(guān)于AF647可用于熒光顯微成像?
Alexa Fluor 647標(biāo)記鏈霉親和素,關(guān)于AF647可用于熒光顯微成像?
今天小編整理并分享關(guān)于AF647可用于熒光顯微成像:
熒光顯微技術(shù):
熒光分子吸收一些顏色的光并幾乎立即發(fā)射相較吸收光能量低,波長更長的另一些顏色的光。這一過程稱為激發(fā)和發(fā)射,發(fā)射的光稱為熒光。而發(fā)射熒光的波長相對于激發(fā)波長的改變的現(xiàn)象被稱為斯托克斯位移(Stokes shift)。斯托克斯位移正是熒光顯微成像的關(guān)鍵:根據(jù)波長的差異選擇性地濾除激發(fā)光而不過濾發(fā)射光,如此僅發(fā)射熒光的物體能被成像。時至今日,熒光標(biāo)記的特異性使熒光顯微成為強(qiáng)大的生物學(xué)研究手段。
熒光顯微使用的熒光標(biāo)記物探針主要有有機(jī)合成染料(dyes),熒光蛋白
(fluorescent proteins, FP),半導(dǎo)體量子點(diǎn)(quantum dots, QDs)等??捎玫难坠馓结樋缭搅丝梢姽夤庾V的所有部分。同時,發(fā)展了用熒光探針標(biāo)記生物分子的許多特異性方法。
定位顯微中使用的有機(jī)合成染料的狀態(tài)轉(zhuǎn)變的主要的形式有:
熒光狀態(tài)轉(zhuǎn)變: 這是最常見的狀態(tài)轉(zhuǎn)變形式。有機(jī)合成染料通常在非激發(fā)狀態(tài)下處于基態(tài),當(dāng)受到適當(dāng)波長的激發(fā)光后,它們會轉(zhuǎn)移到激發(fā)態(tài)。在激發(fā)態(tài)下,染料分子可以發(fā)出熒光。這種狀態(tài)轉(zhuǎn)變是熒光顯微鏡成像的基礎(chǔ),可以用來可視化和研究細(xì)胞和分子結(jié)構(gòu)。
熒光基團(tuán)的結(jié)構(gòu)改變以紅色花青類(cyanine)染料(如Cy5,Alexafluor 637)為典型,與其他化學(xué)物質(zhì)的反應(yīng)(通常是含疏基的物質(zhì),比如疏基乙醇(BME))造成熒光基團(tuán)結(jié)構(gòu)改變,這一過程需要耗氧環(huán)境和激發(fā)光誘導(dǎo)。
吸收狀態(tài)轉(zhuǎn)變: 在吸收狀態(tài)轉(zhuǎn)變中,染料分子吸收特定波長的光并轉(zhuǎn)移到激發(fā)態(tài),但不會發(fā)出熒光。這種狀態(tài)轉(zhuǎn)變可以用于一些光學(xué)技術(shù),如光熱成像,其中染料吸收光能并將其轉(zhuǎn)化為熱能。
光化學(xué)狀態(tài)轉(zhuǎn)變: 有些有機(jī)合成染料具有光敏性,可以在受到特定波長的激發(fā)光后發(fā)生化學(xué)反應(yīng),導(dǎo)致其分子結(jié)構(gòu)發(fā)生變化。這種狀態(tài)轉(zhuǎn)變在光控制的分子工具中具有重要應(yīng)用,如光控制的離子通道。
光解狀態(tài)轉(zhuǎn)變: 光解狀態(tài)轉(zhuǎn)變中,染料分子受到光激發(fā)后發(fā)生分解或分子結(jié)構(gòu)改變。這種狀態(tài)轉(zhuǎn)變在光刻和光解的應(yīng)用中有用。
能量轉(zhuǎn)移狀態(tài)轉(zhuǎn)變: 能量轉(zhuǎn)移狀態(tài)轉(zhuǎn)變涉及到染料分子之間的能量傳遞。在熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)中,兩種不同的染料分子之間發(fā)生能量傳遞,其中一個染料分子的熒光會被另一個染料分子吸收,從而產(chǎn)生信號變化。
這些狀態(tài)轉(zhuǎn)變形式是在定位顯微鏡成像和其他光學(xué)技術(shù)中常見的,它們允許研究者可視化和控制分子和細(xì)胞的特定屬性和行為。
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