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艾美捷羅丹明標(biāo)記鬼筆環(huán)肽——快問(wèn)快答

2021-07-13 16:32 作者:艾美捷  | 我要投稿

作為一種實(shí)驗(yàn)室工具,鬼筆環(huán)肽的用途已被證實(shí),并在于它抑制微絲去聚合的能力。因此,鬼筆環(huán)肽穩(wěn)定的微絲被用作鑒定和表征不斷增加的微絲相關(guān)蛋白的底物。此外,羅丹明鬼筆環(huán)肽可用于染色細(xì)胞中的肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架,也可作為用于運(yùn)動(dòng)測(cè)定的微絲的熒光標(biāo)記物/穩(wěn)定劑。羅丹明鬼筆環(huán)肽以凍干粉形式提供。當(dāng)用500μl甲醇重新配制時(shí),其濃度為14μM(200 x儲(chǔ)備)。

Figure 1. A Swiss 3T3 fibroblast stained with rhodamine phalloidin (PHDR1).

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羅丹明標(biāo)記鬼筆環(huán)肽用途包括:

1.固定細(xì)胞染色F-肌動(dòng)蛋白

2.體外穩(wěn)定肌動(dòng)蛋白絲

3.肌動(dòng)蛋白絲的體外可視化

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關(guān)于羅丹明標(biāo)記鬼筆環(huán)肽的兩個(gè)問(wèn)題:

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1.能用熒光標(biāo)記的phalloidin染色活細(xì)胞中的F-肌動(dòng)蛋白嗎?

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沒(méi)有,鬼筆環(huán)蛋白不能用來(lái)染色活細(xì)胞中的F-肌動(dòng)蛋白。Phalloidins用于固定細(xì)胞中的F-肌動(dòng)蛋白染色。熒光鬼筆蛋白只結(jié)合到F-肌動(dòng)蛋白的天然四級(jí)結(jié)構(gòu),這提供了一個(gè)低背景。phalloidin結(jié)合的正確固定條件是PBS中3.7%(v/v)多聚甲醛10min,因?yàn)樗A袅藀halloidin高親和力結(jié)合所必需的四級(jí)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。甲醇固定破壞了天然構(gòu)象,因此不適用于F-肌動(dòng)蛋白與phalloidin染色。為了監(jiān)測(cè)活細(xì)胞中肌動(dòng)蛋白的動(dòng)態(tài),微量注射羅丹明標(biāo)記的肌動(dòng)蛋白(Cat.)建議使用APHR或AR05)。

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2.熒光標(biāo)記的phalloidin中哪一個(gè)zui穩(wěn)定/zui亮?

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Acti染色zui亮、zui穩(wěn)定的是Acti染色488(綠色熒光)。

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Cytoskeleton公司成立于1993年,專注于生物化學(xué)和細(xì)胞過(guò)程研究中的純化蛋白和便捷試劑盒開(kāi)發(fā)與生產(chǎn)。公司提供藥物篩選、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄后修飾(PTM)、細(xì)胞骨架研究相關(guān)的系列試劑盒和產(chǎn)品,尤其以細(xì)胞骨架相關(guān)研究見(jiàn)長(zhǎng),既能滿足于樣品較少的科學(xué)研究,也可以用于小規(guī)模篩選研究和高通量大規(guī)模篩選研究。艾美捷科技是Cytoskeleton的中國(guó)總代理商,為您提供優(yōu)質(zhì)的羅丹明標(biāo)記鬼筆環(huán)肽。


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