Fluo-4 AM鈣離子熒光探針（染色原理、使用步驟、光譜）
Fluo-4 AM 是一種可滲透細(xì)胞的熒光 Ca2+ 指示劑 (Kd Ca2+ = 345 nM)。 在 Ca2+ 結(jié)合時不顯示靜止信號，發(fā)射強度增加 100 倍。 激發(fā)/發(fā)射 λ 494/506 nm。
Fluo-4 AM鈣離子熒光探針染色原理
Fluo-4 acetoxymethyl ester (Fluo-4 AM) 是一種可滲透細(xì)胞的熒光鈣指示劑。 它被細(xì)胞內(nèi)酯酶裂解以釋放 Fluo-4，它以 345 nM 的 Kd 值與鈣結(jié)合，并分別顯示 490/520 nm 的激發(fā)/發(fā)射最大值。 Fluo-4 AM 已用于通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞術(shù)測量活細(xì)胞中的細(xì)胞內(nèi)鈣水平。
Fluo-4 AM鈣離子熒光探針使用步驟：
1、所需試劑：
※ 2 mM的 Fluo-4, AM（DMSO）試劑溶液，將1mg的Fluo-4, AM溶進442μL的DMSO中；
※ Pluronic F127； Hanks balanced salt solution（HBSS）
※ HEPES buffer saline（10mM HEPES，1mM Na2HPO4，137mM NaCl，5mM KCl，1mM CaCl2，0.5mM MgCl2，5mM glucose，0.1% BSA，pH 7.4）
2、實驗步驟：
※ 向Fluo-4, AM/DMSO溶液中加入16.5mg的Pluronic F127，Pluronic F127可以防止 Fluo-4, AM在HBSS緩沖液中聚合，同時可以幫助其進入細(xì)胞；
※ 用 HBSS緩沖液 稀釋 Fluo-4, AM溶液，制備出 4μM的Fluo-4, AM溶液；
※?將制備好的Fluo-4, AM溶液加入細(xì)胞中，在37℃條件下培養(yǎng)約20分鐘；
※ 加5倍體積且含有 1%胎牛血清 的HBSS緩沖液后，繼續(xù)培養(yǎng)月40分鐘；
※ 用 HEPES buffer saline進行洗滌細(xì)胞3次后，再用 HEPES buffer saline使細(xì)胞重懸浮，制備成 1×105 cells/mL溶液。
※ 37℃條件下培養(yǎng)約10分鐘，再該細(xì)胞進行熒光鈣離子的檢測。熒光波長：激發(fā)波長494nm，發(fā)射波長516nm。
HeLa cells loaded with Fluo 4 AM
Fluo-4 AM鈣離子熒光探針光譜
