PE標記雞卵白蛋白，關于鹽析法分離雞卵白蛋白的工作原理以及過程

今天小編整理并分享關于鹽析法分離雞卵白蛋白的工作原理以及過程：

鹽析法，也稱為逆向鹽析或鹽提取，是一種將蛋白質(zhì)從溶液中分離出來的方法，通常用于將蛋白質(zhì)從其他雜質(zhì)分離出來，或者將蛋白質(zhì)從高濃度溶液中稀釋以便進一步處理的目的。

鹽析法的工作原理是基于蛋白質(zhì)的溶解性與鹽濃度之間的關系。當在蛋白質(zhì)溶液中添加足夠的鹽時，鹽會與水分子競爭與蛋白質(zhì)結(jié)合，從而降低蛋白質(zhì)的水合層，導致蛋白質(zhì)發(fā)生沉淀。然后，可以通過離心等方法將沉淀的蛋白質(zhì)分離出來。

分離過程：

雞蛋清原液的制備：

取新鮮雞蛋,用雙層滅菌紗布過濾得到水樣成分,充分攪拌30 min(攪拌劇烈程度以不起泡沫為準)。為了降低雞蛋清黏度以利于后續(xù)試驗,取5 mL雞蛋清用pH值9.0的Tris - HCl緩沖液(50 mL 0. 1 mol/LTris - base溶液與5.7 mL0. 1 molLHCI溶液混勻后,冷卻到室溫,加水定容到100 mL)進行5倍稀釋,4℃下靜置至少6 h。

雞蛋清卵白蛋白鹽析法分離：

將靜置蛋清4 ℃、10 000 r/ min離心10 min,取上清液,緩慢多次加人烘干研磨成粉末的硫酸銨,磁力攪拌,使加入粉末溶解,并參考硫酸銨溶液飽和度計算表,使其飽和度分別達到 30% 、40% ,50% 、60% 、70%和80%。4℃靜置過夜,于4 ℃,12 000 r/min離心10 min,不同飽和度離心所得沉淀均用pH值9.0的Tris - HCl緩沖液溶解,并在4℃.0.05 molL的 Tris -HCl緩沖液中進行透析。其間更換透析液2~4次,透析過夜。

以雞蛋清為原料,使用 Tris - HCl 緩沖液進行稀釋,降低雞蛋清黏度,增加可溶性蛋白質(zhì)的溶出和提取率,以利于后續(xù)試驗。采用60%硫酸銨進行鹽析的方法獲得卵白蛋白的粗提物,回收率達到18.02% , SDS -PAGE顯示卵白蛋白為主要條帶,可有效分離雞蛋中卵白蛋白,操作過程簡單、快捷、成本低。綜合考慮卵白蛋白純度和提取率,可采用60%飽和度的硫酸銨鹽析分離卵白蛋白。

東莨菪內(nèi)酯修飾牛血清白蛋白

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