Propure??His-Tag-Ni-NTA樹(shù)脂能承受一定濃度的還原劑、變性劑或偶聯(lián)劑等惡劣條件，能簡(jiǎn)單、快速、高效、高特異性地純化His-Tag-蛋白。Propure??His?Tag-Ni-NTA樹(shù)脂能夠有效地從可溶性蛋白質(zhì)提取物中純化聚組氨酸標(biāo)記的蛋白質(zhì)。該樹(shù)脂由固定在4%交聯(lián)瓊脂糖上的帶鎳的次氮基三乙酸（NTA）螯合物組成。Ni NTA樹(shù)脂通常被選擇用于His標(biāo)記的蛋白質(zhì)純化，因?yàn)轵衔锷嫌兴膫€(gè)金屬結(jié)合位點(diǎn)，這允許高結(jié)合能力和低金屬離子浸出

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艾美捷His標(biāo)簽蛋白純化試劑盒：

Cat #: D-AKTP201

Size: 1 mL/1 mL*5

Storage: Stable for 12 months at 4°C

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His標(biāo)簽蛋白純化試劑盒樣品制備：

A從細(xì)菌或酵母中提取蛋白質(zhì)

1.誘導(dǎo)蛋白質(zhì)表達(dá)后，將細(xì)菌或酵母培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到離心管中，在

7000轉(zhuǎn)/分以收集細(xì)菌或酵母。

2.與10倍體積的裂解緩沖液（收集的細(xì)菌或酵母：裂解緩沖液=1:10）混合，加入最終濃度為1mM的PMSF。建議添加最終濃度為0.2-0.4mg/mL的溶菌酶。

3.對(duì)細(xì)胞進(jìn)行復(fù)蘇。如果細(xì)胞濃度較高，則添加10μg/ml RNase A和5μg/ml DNase I。將懸浮液混合并在冰中浸泡，保持裂解液清潔。

4.將干凈的裂解物轉(zhuǎn)移到新的離心管中，以10000rpm，4C離心20-30分鐘。取上清液，在-20℃的冰上儲(chǔ)存。

B從酵母、昆蟲(chóng)或哺乳動(dòng)物細(xì)胞中提取的可溶性蛋白質(zhì)

1.將細(xì)胞培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到離心管中，以5000rpm離心10分鐘以收集懸浮液。如果懸浮液中含有EDTA、組氨酸和其他還原劑，則應(yīng)使用賴(lài)氨酸緩沖液對(duì)懸浮液進(jìn)行透析。

2.大體積懸浮液應(yīng)采用硫酸銨分級(jí)沉淀法濃縮，然后用賴(lài)氨酸緩沖液透析。

C用于在變性條件下純化的包涵體蛋白質(zhì)提取

1.將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到離心管中，以7000rpm離心15分鐘以收集沉淀。拆下懸架。

2.與10倍體積的賴(lài)氨酸緩沖液混合，如收集的沉淀：賴(lài)氨酸緩沖劑=1:10（W/N）。裂解緩沖液不含8M尿素?；謴?fù)降水。將懸浮液在冰中混合并超聲處理。

3.將裂解物轉(zhuǎn)移到新的離心管中，在10000rpm、4℃下離心20-30分鐘。處理上清液，再次重復(fù)步驟2和3。

4.與10倍體積的賴(lài)氨酸緩沖液混合，如收集的沉淀：賴(lài)氨酸緩沖劑=1:10（W/N）。在變性條件下，重新懸浮培養(yǎng)液進(jìn)行純化。

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通常，在需要用金屬離子重新充電之前，Ni NTA樹(shù)脂可以至少使用五次。當(dāng)背壓過(guò)高或容量顯著降低時(shí)，需要?jiǎng)冸x金屬離子，并按照以下程序?qū)?shù)脂充電：

1.用5個(gè)樹(shù)脂床體積的去離子水洗滌樹(shù)脂；

2.100mM EDTA（pH 8.0），5個(gè)樹(shù)脂床體積；

3.用10個(gè)樹(shù)脂床體積的去離子水洗滌樹(shù)脂；

4.用5個(gè)樹(shù)脂床體積的0.5M NaOH洗滌樹(shù)脂，并停留10-15分鐘；

5.用10個(gè)樹(shù)脂床體積的去離子水洗滌樹(shù)脂；

6.100mM Nitso8324；3-5個(gè)樹(shù)脂床體積；

7.用10個(gè)樹(shù)脂床體積的去離子水洗滌樹(shù)脂；再生后，培養(yǎng)基可以立即使用，也可以在4°C下儲(chǔ)存在含有20%乙醇的PBS中。

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His標(biāo)簽蛋白純化試劑盒化學(xué)相容性：