N糖基化位點怎么確認(rèn)
目前,糖基化氨基酸位點鑒定主要利用生物質(zhì)譜技術(shù)結(jié)合蛋白酶以及專一性糖苷內(nèi)切酶的作用。一般先對糖基化位點進(jìn)行特異的質(zhì)量標(biāo)記,使之與未修飾的蛋白質(zhì)質(zhì)量之間有一個特定的差異,然后通過質(zhì)譜分析檢測差異,進(jìn)而通過串聯(lián)質(zhì)譜鑒定是在哪個氨基酸殘基上發(fā)生了糖基化。?
N-聚糖蛋白的鑒定最常用的方法是N-糖苷酶F(PNGase F)酶解法。N-糖苷酶F作為脫氨基酶,可以將原先糖基化的天冬酰胺脫氨基后轉(zhuǎn)變?yōu)樘於彼?,造成相對分子質(zhì)量增加1,再通過質(zhì)譜比較含有天冬氨酸的肽與含有非糖基化天冬酰胺的肽的相對分子質(zhì)量,即可獲得發(fā)生N-糖基化的氨基酸位點。N糖基化位點鑒定的步驟主要包括N-糖苷酶F酶消化、聚糖分離釋放、LC分離糖肽和質(zhì)譜分析。?
百泰派克生物科技提供N-糖修飾位點分析服務(wù),可對修飾位點、特定的聚糖種類進(jìn)行鑒定,對N糖修飾類型及修飾位置進(jìn)行分析,解析N糖的結(jié)構(gòu)及位置,且可實現(xiàn)聚糖修飾定量分析,歡迎免費(fèi)咨詢。?
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