作者利用非病原性大腸桿菌尼斯氏菌作為多功能平臺（SYNB1891），以開發(fā)用于治療癌癥的免疫療法。該工程菌可靶向激活腫瘤中的吞噬性抗原提呈細(xì)胞（APC）的STING通路，并激活先天性免疫途徑。SYNB1891治療可產(chǎn)生有效的抗腫瘤免疫，并在鼠腫瘤模型中形成免疫記憶。

STING通過激活A(yù)PC，產(chǎn)生I型IFN，新抗原交叉呈遞給細(xì)胞毒性T細(xì)胞，隨后啟動腫瘤特異性T細(xì)胞反應(yīng)，是連接天然免疫和獲得性免疫的橋梁。環(huán)二核苷酸(CDNs，如CDA)與STING結(jié)合并激活STING，觸發(fā)I型IFN反應(yīng)。作者開發(fā)了一種產(chǎn)生刺激劑的ECN治療菌株，首先作者篩選了產(chǎn)生CDNs的酶，篩選了誘導(dǎo)型啟動子。利用四環(huán)素誘導(dǎo)啟動子(PTET)在ECN中表達了由編碼dncv的霍亂弧菌、編碼CDA的枯草芽孢桿菌和編碼DACA的單核細(xì)胞增生性李斯特菌表達的3種CDA產(chǎn)生酶，并對其體外表達水平進行了評價。

最終，二腺苷酸環(huán)化酶(DACA)被選作進一步評價，因為它在ECN中的基因誘導(dǎo)后產(chǎn)生最高水平的CDA。表達DACA的ECN(SYN-PTET-DACA)與RAW 264.7巨噬細(xì)胞系共培養(yǎng)后，IFN-β1的分泌呈劑量依賴性，而未誘導(dǎo)的SYN-PTECT-DACA則無法誘導(dǎo)IFN-β1的產(chǎn)生。為評價體內(nèi)活性，B16.F10被選為相關(guān)的腫瘤模型，因為這是一種炎癥程度較低的腫瘤，這種腫瘤通常對免疫治療是無效的。在B16.F10黑色素瘤荷瘤小鼠腹腔注射(i.p.)無水四環(huán)素(ATC)后將SYN-Ptet-DACA或非工程ECN瘤內(nèi)注射。與體外獲得的結(jié)果相似，在體內(nèi)與非工程ECN相比，工程ECN產(chǎn)生CDA導(dǎo)致IFN-β1誘導(dǎo)增加。此外，SYN-PTET-DACA治療在治療開始后8天顯著降低了腫瘤生長。雖然用工程和非工程ECN治療均導(dǎo)致先天免疫相關(guān)的細(xì)胞因子(如腫瘤壞死因子α、GM-CSF、IL-6、IL-1β和CCl-2)在治療24小時后增加，但僅SYN-PTET-DACA治療在治療8天后引起T細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子(如IL-2、顆粒酶B和IFN-γ)的表達。綜上所述，這些數(shù)據(jù)提示CDA在ECN中的工程表達能夠額外激活I(lǐng)型IFN反應(yīng)，并可在體內(nèi)啟動有效的T細(xì)胞抗腫瘤免疫。

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