液氮冷凍性股骨頭無(wú)菌性壞死動(dòng)物模型【動(dòng)物實(shí)驗(yàn)外包】

【造模機(jī)制】液氮冷凍可引起股骨頭內(nèi)血管痙攣，血管內(nèi)皮損傷及血管內(nèi)凝血，繼而出現(xiàn)血管壁通透性增加，股骨頭髓腔內(nèi)出血，復(fù)溫后血管再通誘發(fā)缺血再灌注損傷，最終導(dǎo)致股骨頭缺血性壞死。此外液氮冷凍還可對(duì)軟骨細(xì)胞和骨細(xì)胞產(chǎn)生直接的損害作用。

【造模方法】取8～12個(gè)月齡健康新西蘭白兔，常規(guī)用速眠新Ⅱ號(hào)注射液(0.2ml/kg)耳緣靜脈注射麻醉，取側(cè)臥位，剪去術(shù)側(cè)髖部毛發(fā)后消毒鋪巾。采用髖前外側(cè)切口，長(zhǎng)約4cm，逐層切開(kāi)皮膚、皮下組織及深筋膜，部分切斷臀中肌與臀小肌止點(diǎn)向深層組織分離，向后外側(cè)提起大轉(zhuǎn)子，顯露髖關(guān)節(jié)囊，T型切開(kāi)關(guān)節(jié)囊，顯露股骨頸前上方，以下可按兩種方法液氮冷凍股骨頭：

1.股骨頭不脫位法 即不切斷股骨頭圓韌帶，髖關(guān)節(jié)不脫位造模。在股骨頭與頸交界處用直徑3.5~4.0mm的鉆頭向股骨頭負(fù)重區(qū)方向鉆孔開(kāi)窗，深約4mm，用微小刮匙（可以自做）向內(nèi)上清除鉆孔時(shí)遺留的碎骨渣，并稍適擴(kuò)髓腔。鋪干紗布保護(hù)股骨頭周?chē)M織，將特制紗布小團(tuán)蘸取液氮即刻填于髓腔冷凍，持續(xù)1分鐘，溫生理鹽水復(fù)溫即可造模；另一方法是不鉆孔，將髖關(guān)節(jié)內(nèi)收外旋即可顯露股骨頭的2/3~4/5，用蘸有液氮的棉球敷在股骨頭上3分鐘造模。

2.股骨頭脫位法切斷股骨頭圓韌帶，將股骨頭脫位取出，把浸有液氮的棉球迅速敷于股骨頭10秒，間隔30秒左右，再重復(fù)冷凍2次；或用橡皮管套住股骨頭并在頭頸交界處扎緊以防液氮漏出，向管內(nèi)灌入液氮冷凍3分鐘，溫生理鹽水復(fù)溫。此時(shí)可施加或不施加處理因素，逐層閉合關(guān)節(jié)囊及合層組織。對(duì)側(cè)股骨頭可作為假手術(shù)組以作對(duì)照。術(shù)后將動(dòng)物放回籠中飼養(yǎng)，自由活動(dòng)。

【模型特點(diǎn)】兔股骨頭直徑約6mm左右，上述兩種方法造模均可造成股骨頭組織的大范圍壞死，壞死的程度和范圍與冷凍的時(shí)間長(zhǎng)短呈正相關(guān)。術(shù)后 1~2周股骨頭內(nèi)骨陷窩空虛，髓腔內(nèi)充滿(mǎn)壞死組織并伴有局灶性出血，有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和壞死組織的吸收現(xiàn)象。2周后壞死組織邊緣有肉芽組織生成，成骨細(xì)胞增生逐漸有透明軟骨島(帶）生成，新生骨形成活躍。4周后幼稚骨小梁形成骨髓組織生長(zhǎng)，有新的骨陷窩形成，并向壞死中心長(zhǎng)入。脫位法軟骨及軟骨下骨壞死較嚴(yán)重；鉆孔法冷凍從骨內(nèi)開(kāi)始，對(duì)關(guān)節(jié)軟骨損傷相對(duì)較小，但它造成股骨頭骨缺損，這一點(diǎn)與臨床實(shí)際不同。

【應(yīng)用范圍】液氮冷凍不同于用藥物或化學(xué)方法造成壞死，它不會(huì)因殘留化學(xué)物質(zhì)而干擾植骨研究，因此冷凍模型主要用于股骨頭壞死治療方法的評(píng)價(jià)，如向壞死區(qū)植入成骨蛋白（BMP)）、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)、轉(zhuǎn)基因種子細(xì)胞或體外構(gòu)建的骨組織工程材料等。

【注意事項(xiàng)】

1.預(yù)防感染術(shù)前肌注慶大霉素1次，術(shù)后肌注2~3次，每次8萬(wàn)U以預(yù)防感染。

2.防止冷凍液揮發(fā)液氮易于揮發(fā)，應(yīng)用棉球等材料蘸取和冷凍時(shí)操作要輕柔準(zhǔn)確，既要防止凍傷股骨頭以外的其他動(dòng)物組織，也要防止傷及操作者本人。

3.注意及時(shí)發(fā)現(xiàn)脫位并復(fù)位股骨頭脫位法造模的動(dòng)物由于切斷了股骨頭圓韌帶，髖關(guān)節(jié)穩(wěn)定性差，術(shù)后發(fā)生髖關(guān)節(jié)脫位及關(guān)節(jié)炎較多，要注意觀察，及時(shí)發(fā)現(xiàn)脫位并復(fù)位。

【模型評(píng)價(jià)】液氮冷凍造模時(shí)間短，效果確切，對(duì)動(dòng)物機(jī)體物質(zhì)代謝和器官功能干擾小，因而能比較真實(shí)地模仿臨床上由于骨折脫位等創(chuàng)傷因素造成的股骨頭壞死情況。

文章轉(zhuǎn)載于北京吉田生物科技有限公司?可承接動(dòng)物實(shí)驗(yàn)外包