目前rAppDNA合成方式有兩種：酶法合成和化學(xué)合成。其中酶法合成步驟復(fù)雜，需要在酶的作用下將ATP分解成AMP和PPi，然后將AMP轉(zhuǎn)移到寡核酸5‘磷酸基團(tuán)上，生成腺苷?；a(chǎn)物。而化學(xué)合成，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)將rApp修飾連接到寡核苷酸5‘端，無(wú)需酶和ATP的參與。具有純度高、成本低等優(yōu)勢(shì)。

迪贏生物基于專業(yè)的核酸化學(xué)科學(xué)家團(tuán)隊(duì)的研發(fā)和成熟穩(wěn)定的合成純化生產(chǎn)平臺(tái)，現(xiàn)提供5‘腺苷?；揎?，可化學(xué)合成5’腺苷?；疧ligo，用于下游miRNA建庫(kù)等相關(guān)場(chǎng)景。

高純度 高質(zhì)量

迪贏生物自主合成的rApp腺苷?；怂?，經(jīng)過(guò)質(zhì)譜檢測(cè)和HPLC純化，合成產(chǎn)物具有純度高、準(zhǔn)確率高的特點(diǎn)。

Mass質(zhì)譜

HPLC高效液相

rApp在miRNA文庫(kù)構(gòu)建中的應(yīng)用

體內(nèi)miRNA較短（21-23nt），具有5'-磷酸和3'-OH末端。因此使用T4 RNA連接酶和ATP將接頭連接到miRNA末端會(huì)發(fā)生miRNA自連接。5'-App修飾的接頭可以很好的解決這個(gè)問(wèn)題，通過(guò)使用RNA連接酶在不存在ATP的情況下將5'-App修飾的接頭連接到miRNA的3'-OH端，而不能將一個(gè)RNA的5'端與另一個(gè)RNA的3'端連接，從而避免了 RNA分子間的自連，減少了文庫(kù)中RNA嵌合體的存在。

rApp的其他應(yīng)用

核酶/脫氧核酸酶體外選擇的活化核酸底物

在RNA結(jié)構(gòu)功能研究中通常需要結(jié)合位點(diǎn)特異性修飾。然而，由于這種修飾目前不可能通過(guò)體外轉(zhuǎn)錄方法實(shí)現(xiàn)，因此必須將修飾的化學(xué)合成RNA寡核苷酸和RNA轉(zhuǎn)錄物的各種組合連接在一起，以產(chǎn)生所需的長(zhǎng)的修飾RNA分子。含有所需位點(diǎn)特異性修飾的5'-App寡核苷酸可作為開(kāi)發(fā)核糖/脫氧核糖酶的體外選擇和隨后構(gòu)建用于結(jié)構(gòu)功能研究的特定長(zhǎng)RNA的活化底物。

活化5‘端富含嘧啶的RNA

在5'端富含嘧啶的RNA通常很難甚至不可能用噬菌體聚合酶在體外轉(zhuǎn)錄。因此，獲得5'-磷酸化的富含嘧啶的RNA，從而適合于連接，是一項(xiàng)重大挑戰(zhàn)。這種RNA分子的5'-腺苷酸化可能是激活它們進(jìn)行連接的可行策略。

5’標(biāo)記

連接到寡聚物上的腺苷酸基團(tuán)包含核糖2'，3'-二醇部分，可使用高碘酸鈉氧化為醛。因此，5’-App核酸在這種氧化后，可以通過(guò)醛的還原胺化在5’端用熒光染料或其他生物物理探針標(biāo)記。這種標(biāo)記策略可用于在不可能或不希望使用固相合成插入特定的5’端修飾的情況。

【參考文獻(xiàn)】

[1]?Chiuman W , ?Li Y . Making AppDNA using T4 DNA ligase[J]. Bioorganic Chemistry, 2002, 30(5):332-349.

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