JC-1線粒體膜電位熒光探針染色原理

JC-1 是一種可滲透膜的陽離子染料，用于研究細(xì)胞凋亡背景下的線粒體完整性。?

jc-1結(jié)構(gòu)式

它選擇性地進(jìn)入線粒體并隨著線粒體跨膜電位 (ΔΨm) 的改變而改變熒光特性。 在具有高線粒體 ΔΨm 的健康細(xì)胞中，JC-1 形成稱為 J-聚集體的復(fù)合物，其發(fā)出紅色/橙色熒光，并且可以通過流式細(xì)胞術(shù)使用 FL2 設(shè)置進(jìn)行檢測。 ΔΨm 的下降是細(xì)胞凋亡的一個非常早期的事件，導(dǎo)致 JC-1 單體發(fā)出綠色熒光（流式細(xì)胞儀上的 FL1 設(shè)置）。JC-1 也可用于熒光顯微鏡或讀板機(jī)，使用 520-570 的激發(fā) 對于 J 聚集體，在 570-610 nm 處發(fā)射和在 485 nm 處激發(fā)，對于單體在 535 nm 處發(fā)射。

JC-1如何檢測膜電位？

JC-1 形成帶有紅色熒光的聚集體（在健康的線粒體中）。
隨著膜電位的降低，JC-1 變成單體，呈綠色熒光。
紅綠熒光比例的變化被用作線粒體狀況的指標(biāo)。

JC-1線粒體膜電位熒光探針染色步驟（流式細(xì)胞儀法）：

1. 于6-，12或24-孔板上進(jìn)行細(xì)胞鋪板，密度為5×105 cells/mL。37℃，5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。選擇合適的化合物根據(jù)特定的步驟進(jìn)行凋亡誘導(dǎo)。 注：進(jìn)行凋亡誘導(dǎo)時的細(xì)胞密度建議不超過1×106 cells/mL，也可根據(jù)自己的細(xì)胞類型培養(yǎng)至合適的密度。
2. 取0.5 mL細(xì)胞懸液至無菌的離心管內(nèi)；
3. 室溫條件400 x g離心5 min；吸掉上清。
4. 用0.5 mL JC-1工作液重懸細(xì)胞，于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱孵育15-30 min；注意：一般情況，15 min足以進(jìn)行充分的染色。
5. 室溫條件400 x g離心5 min；吸掉上清；
6. 用2 mL細(xì)胞培養(yǎng)液或者緩沖液重懸細(xì)胞，之后室溫條件400 x g離心5 min；吸掉上清；
7. 重復(fù)步驟6）；
8. 用0.5 mL新鮮培養(yǎng)液或者緩沖液重懸細(xì)胞，即可進(jìn)行后續(xù)的流式分析。注意：請馬上進(jìn)行流式定量分析，此細(xì)節(jié)很重要。
數(shù)據(jù)分析：含有紅色JC-1聚集物的健康細(xì)胞線粒體用FL2通道檢測；含有綠色JC-1單體的凋亡或不健康細(xì)胞用FL1（FITC）通道檢測。

JC-1光譜圖

光譜特性：
※ 消光系數(shù)(cm -1 M -1) 1950001
※ 激發(fā)波長 (nm) 515
※ 發(fā)射波長(nm) 530

標(biāo)簽：