RNAi實(shí)驗(yàn)是研究基因功能的常用實(shí)驗(yàn)之一，shRNA的持續(xù)性表達(dá)通常借助于pol III型啟動(dòng)子，包括U6和H1，但要想實(shí)現(xiàn)特定組織中的基因沉默，幾乎少不了特異性啟動(dòng)子及pol II型啟動(dòng)子的助力，然而U6和H1并不具有組織特異性，顯然無(wú)法達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康?。那么有什么方法可以解決這個(gè)問(wèn)題呢？

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基于miR30的shRNA

大家還記得之前關(guān)于shRNA的干貨內(nèi)容嗎？（沒(méi)有印象的小伙伴可以查找“siRNA和shRNA的區(qū)別”閱覽哦）shRNA和miRNA具有相似的作用機(jī)制（見(jiàn)圖1），因此我們可以用miRNA的骨架（目前常用miR30）構(gòu)建shRNA載體，即可由pol II型啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)干擾載體，實(shí)現(xiàn)特定組織中的基因沉默。

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圖1 miRNA和siRNA作用機(jī)制

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具體構(gòu)建方案為將miR30的5'flanking region和3'flanking region序列保留，然后將其成熟區(qū)域的序列替換成靶點(diǎn)序列，示意圖如下：

圖2 基于miR30結(jié)構(gòu)的shRNA載體

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Mir30結(jié)構(gòu)的優(yōu)勢(shì)

（1）啟動(dòng)子選擇性多：基于miR30的shRNA可以通過(guò)多種pol II啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄，包括CMV、CAG和特異性啟動(dòng)子等。

（2）可與報(bào)告基因共表達(dá)：報(bào)告基因與shRNA共表達(dá)，方便檢測(cè)shRNA的轉(zhuǎn)錄。

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案例分享

安徽醫(yī)科大學(xué)的王學(xué)富教授在題為“G protein-coupled receptor 35 attenuates nonalcoholic steatohepatitis by reprogramming cholesterol homeostasis in hepatocytes”的研究論文中使用了漢恒生物提供的AAV8-TBG-miR30-shRNA（Stard4）-mcherry特異性敲低小鼠肝臟中Star相關(guān)脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4（Stard4）表達(dá)以研究G蛋白偶聯(lián)受體35（GPR35）在非酒精性脂肪性肝病的作用（NAFLD），使用AAV8，用肝臟特異性啟動(dòng)子TBG，尾靜脈注射，檢測(cè)肝臟中Stard4的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)其蛋白水平明顯降低（見(jiàn)圖3）。

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圖3 Stard4?WB結(jié)果圖

文章鏈接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/36970193/

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沈陽(yáng)藥科大學(xué)的吳春福教授的研究團(tuán)隊(duì)在題為“Hyperactive neuronal autophagy depletes BDNF and ?impairs adult hippocampal neurogenesis in a corticosterone-induced mouse model of depression”的研究論文中使用了漢恒生物提供的AAV-hSyn-miR30-shRNA（Atg5）特異性敲低神經(jīng)元中自噬相關(guān)基因5（Atg5）的表達(dá)來(lái)研究神經(jīng)元自噬對(duì)抑郁癥的影響，為抑郁癥治療提供了新的思路。

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文章鏈接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/36793868/

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綜上，miR30結(jié)構(gòu)是實(shí)現(xiàn)特定組織基因沉默的有力工具，若對(duì)組織特異性干擾有疑問(wèn)，歡迎咨詢漢恒生物！

標(biāo)簽：RNAi基因干擾mir30