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? ? ? ?在我們培養(yǎng)細(xì)胞的過程中，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代是一項(xiàng)常規(guī)的操作，傳代可以幫助我們擴(kuò)大細(xì)胞培養(yǎng)的數(shù)量，同時(shí)也避免了因細(xì)胞進(jìn)入平臺(tái)期乃至衰亡期而大量死亡的窘境。

一、什么是BHK-21細(xì)胞

? ? ? ?BHK-21細(xì)胞是指幼年敘利亞地鼠腎細(xì)胞，其特點(diǎn)是可連續(xù)傳代。BHK-21細(xì)胞系可以用于多種病毒的增殖和純化，如口蹄疫病毒、腦心肌炎病毒、呼腸孤病毒等。目前，BHK-21細(xì)胞系已被廣泛應(yīng)用于口啼疫疫苗的生產(chǎn)。

二、BHK-21細(xì)胞的形態(tài)

? ? ? ?BHK-21是從敘利亞鼠腎組織中分離培養(yǎng)獲得的成纖維型貼壁細(xì)胞系，需要貼壁生長。成纖維細(xì)胞胞體呈梭型或不規(guī)則三角形，中央有卵圓形核，胞質(zhì)突起，生長時(shí)呈放射狀。顯微鏡下，其胞質(zhì)可見豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、游離核糖體和發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體。處于成熟期或稱靜止?fàn)顟B(tài)的成纖維細(xì)胞，胞體變小，呈長梭形，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體均不發(fā)達(dá)。它具有較強(qiáng)的分裂增殖能力，適應(yīng)性強(qiáng)，是最容易培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞類型之一。

三、BHK-21的傳代

? ? ? ?對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

? ? ? ?如果細(xì)胞密度達(dá)到80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1）棄去培養(yǎng)上清液，用不含鈣，鎂離子的PBS緩沖液清洗細(xì)胞1-2次；（因?yàn)殁}離子和鎂離子會(huì)影響胰酶的消化能力，導(dǎo)致胰酶消化能力下降。）

2）加 2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 分鐘，隨后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓且脫落即可。隨后加2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化。

3）輕輕打勻細(xì)胞后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，隨后去除上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻細(xì)胞。

4）將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

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