人源化CD3單克隆抗體

延緩糖尿病2年進(jìn)展，這一看似不可能完成的任務(wù)近日已經(jīng)被?Tzield (teplizumab-mzwv) 注射劑完美攻克。Tzield注射劑是全球首個(gè)獲得批準(zhǔn)的可以延緩1型糖尿病發(fā)病的藥物，它是一款人源化抗CD3單克隆抗體，主要通過與效應(yīng) T 細(xì)胞表面的 CD3 結(jié)合，能夠阻止CD3-TCR復(fù)合物形成，抑制T細(xì)胞攻擊胰島β細(xì)胞，從而降低對(duì)胰島 β 細(xì)胞的破壞作用。

CD3單抗再一次擴(kuò)展了自身的治療版圖，在抗體療法飛速發(fā)展的同時(shí)，CD3也因?yàn)槭谦@批藥物數(shù)量?jī)H次于PD-1的熱門靶點(diǎn)而為大眾所熟知【1】。CD3成為如此熱門的靶點(diǎn)也是實(shí)至名歸，畢竟CD3抗體是第一個(gè)在臨床上投入使用的單抗藥物，用于降低器官移植病人急性排斥反應(yīng)的免疫抑制劑。

CD3蛋白是存在于成熟T細(xì)胞表面的跨膜蛋白，具有γ、δ、ε、ζ和η五種肽鏈，可分為膜外區(qū)、跨膜區(qū)和胞質(zhì)區(qū)三個(gè)部分。N端細(xì)胞外域包含兩個(gè)異源二聚體結(jié)構(gòu)域CD3εγ和CD3εδ，而跨膜結(jié)構(gòu)域只有單個(gè)同源二聚體CD3ζζ，通過鹽橋與T細(xì)胞受體(TCR) 的α/β鏈以非共價(jià)鍵組成TCR-CD3復(fù)合體。TCR-CD3復(fù)合物總共產(chǎn)生10個(gè)ITAM（免疫受體酪氨酸活化基序），使得TCR-CD3復(fù)合物對(duì)抗原結(jié)合非常敏感。

因此在體外活化刺激T細(xì)胞， TCR/CD3與抗原提呈細(xì)胞（APCs）表面特異的MHCⅡ抗原肽復(fù)合物結(jié)合產(chǎn)生的特異性抗原刺激信號(hào)是最重要的信號(hào)之一，這也是CD3蛋白最常見的用途。但是在如今競(jìng)爭(zhēng)激烈的免疫領(lǐng)域，“單打獨(dú)斗”不如“合作共贏”帶來(lái)的效果更讓人驚喜?？茖W(xué)家創(chuàng)造性的將CD3與另一當(dāng)紅遞送系統(tǒng)脂質(zhì)納米顆粒LNP，結(jié)合起來(lái)創(chuàng)造出CD3 靶向脂質(zhì)納米顆粒 aCD3-LNP【2】。CD3雙特異性抗體能夠?qū)D3+T細(xì)胞重定向至腫瘤部位，是治療血液系統(tǒng)惡性腫瘤和實(shí)體瘤的一種極具潛力的免疫治療策略。

研究小組將AntiCD3-LNP/CAR19、LNP/CAR19 + shIL6和 AntiCD3-LNP/CAR19 + shIL6轉(zhuǎn)染T細(xì)胞，然后與靶細(xì)胞孵育48?時(shí)，證明了強(qiáng)大的細(xì)胞毒性；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，AntiCD3-LNP/CAR19+shIL6能穩(wěn)定地轉(zhuǎn)染T細(xì)胞，并在90天內(nèi)保持產(chǎn)生CAR-T殺傷腫瘤。顯著延長(zhǎng)了白血病模型小鼠的存活時(shí)間，證明了制備的aCD3-LNP具有與傳統(tǒng)體外制備的CAR-T細(xì)胞相同的抗腫瘤作用。這么明顯的實(shí)驗(yàn)結(jié)果得益于CD3抗體強(qiáng)大的腫瘤細(xì)胞定向作用，在最大限度上提高了有效載荷的細(xì)胞殺傷作用。

靜脈注射aCD3-LNP后，CD3指導(dǎo)載體到達(dá)病灶處，使之可以直接在體內(nèi)產(chǎn)生CAR-T細(xì)胞，而不需要使用目前復(fù)雜的體外過程。此外，IL-6的表達(dá)被沉默，這將有助于減少CRS，提高CAR-T治療的安全性。CD3單抗利用自身的定向優(yōu)勢(shì)明顯提高了CAR-T技術(shù)使用的方便性，有助于進(jìn)一步推動(dòng)CAR-T的臨床應(yīng)用。其實(shí)早在2017年Fred Hutchinson癌癥研究中心的研究人員就在Nature Nanotechnology 雜志上發(fā)表文章，他們將T細(xì)胞靶向的抗CD3e f(ab’)2片段偶聯(lián)到可生物降解的納米顆粒表面。

這些納米顆粒因?yàn)橛辛薈D3的指向，可以選擇性地使T淋巴細(xì)胞能夠通過受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用來(lái)實(shí)現(xiàn)，然后采用含有運(yùn)輸相關(guān)序列（MTAS）和核定位信號(hào)（NLS）的肽段對(duì)聚合物進(jìn)行功能化，使CAR基因快速進(jìn)入細(xì)胞核中。以不同比例的顆粒孵育小鼠脾細(xì)胞。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)靶向CD3的納米顆?？梢赃x擇性地結(jié)合T淋巴細(xì)胞，而與非目的細(xì)胞的相互作用很低。這為后續(xù)的研究如何進(jìn)一步利用CD3加入“組合戰(zhàn)隊(duì)”提供了靈感，CD3的定向可以解決藥物作用效果差以及副作用大等亟待解決的難題。

CD3從被發(fā)現(xiàn)至今，已從“單打獨(dú)斗”漸漸轉(zhuǎn)化為“團(tuán)隊(duì)協(xié)作”。除了我們介紹的aCD3-LNP顆粒，目前最為火熱的雙特異性抗體領(lǐng)域中，CD3依然作為熱門靶點(diǎn)，尖端藥企們紛紛布局其他靶點(diǎn)和CD3的協(xié)同合作。CD3雙特異性抗體能夠?qū)D3+T細(xì)胞重定向至腫瘤部位，是治療血液系統(tǒng)惡性腫瘤和實(shí)體瘤的一種極具潛力的免疫治療策略。這一切都說(shuō)明CD3是充滿挖掘價(jià)值的免疫治療寶庫(kù)，希望科學(xué)家在未來(lái)可以更好的利用這個(gè)全能武器。

同立海源精品推薦

北京同立海源生物GMP級(jí)抗人CD3單克隆抗體（Cat. No. GMP-TL101）將原有CD3 單克隆抗體（OKT3）做人源化改造，在保持了OKT3單抗對(duì)T細(xì)胞激活能力的前提下，最大程度消除了鼠源性抗體的免疫原性，在此基礎(chǔ)上利用CHO細(xì)胞表達(dá)人源化改造后的抗體能更好地應(yīng)用于臨床細(xì)胞藥物的研發(fā)。相對(duì)于其他采用雜交瘤技術(shù)制備的CD3單克隆抗體，同立海源抗人CD3單克隆抗體生產(chǎn)過程完全使用化學(xué)限定的無(wú)血清培養(yǎng)基，真正做到無(wú)血清、無(wú)動(dòng)物源、無(wú)任何外源因子，完全避免了傳統(tǒng)雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)的CD3單克隆抗體對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)可能產(chǎn)生的不利影響，大大提高了產(chǎn)品的穩(wěn)定性和安全性。

并且該產(chǎn)品已正式完成美國(guó)FDA的DMF II型備案，全力支持新藥申報(bào)客戶在向FDA提交申請(qǐng)注冊(cè)文件中直接引用DMF備案號(hào)，簡(jiǎn)化IND申報(bào)流程，加速相關(guān)藥品申報(bào)進(jìn)程。

一、產(chǎn)品信息

*?該產(chǎn)品可根據(jù)客戶需求定制生產(chǎn)5mg大包裝。

二、GMP放行標(biāo)準(zhǔn)

純度SDS-PAGE＞95%

內(nèi)毒素＜0.01EU/ug

宿主細(xì)胞DNA殘留≤100pg/mg

宿主細(xì)胞蛋白殘留≤100ppm

細(xì)菌、支原體陰性

其他理化性質(zhì)合格

三、產(chǎn)品性能

〡高結(jié)合率

〡高純度

〡高活性

參考文獻(xiàn)：

【1】?Lyu X, Zhao Q, Hui J, Wang T, Lin M, Wang K, Zhang J, Shentu J, Dalby PA, Zhang H, Liu B. The global landscape of approved antibody therapies. Antib Ther. 2022 Sep 6;5(4):233-257.

【2】?Zhou JE, Sun L, Jia Y, Wang Z, Luo T, Tan J, Fang X, Zhu H, Wang J, Yu L, Yan Z. Lipid nanoparticles produce chimeric antigen receptor T cells with interleukin-6 knockdown in vivo. J Control Release. 2022 Oct;350:298-307.

【3】?Smith TT, Stephan SB, Moffett HF, McKnight LE, Ji W, Reiman D, Bonagofski E, Wohlfahrt ME, Pillai SPS, Stephan MT. In situ programming of leukaemia-specific T cells using synthetic DNA nanocarriers. Nat Nanotechnol. 2017 Aug;12(8):813-820.

關(guān)于同立海源

北京同立海源生物科技有限公司，成立于2011年，專注細(xì)胞和基因治療（CGT）上游GMP級(jí)原料試劑研發(fā)，致力于為生命科學(xué)提供可靠的產(chǎn)品與服務(wù)。產(chǎn)品涉及細(xì)胞分選磁珠試劑，真核/原核重組蛋白、無(wú)血清培養(yǎng)基、細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒、轉(zhuǎn)染試劑、基因編輯工具酶等。為細(xì)胞和基因治療藥物、抗體藥物開發(fā)、細(xì)胞儲(chǔ)存等生物制藥和IVD領(lǐng)域提供核心原料試劑與服務(wù)。

公司建有2000㎡的研發(fā)實(shí)驗(yàn)室及GMP級(jí)潔凈車間，包括真核與原核蛋白表達(dá)工程平臺(tái)、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)開發(fā)平臺(tái)、體外診斷試劑生產(chǎn)平臺(tái)，通過ISO13485和ISO9001雙認(rèn)證，部分產(chǎn)品已獲美國(guó)FDA DMF備案。