丙二醛(MDA)elisa檢測試劑盒對MDA的檢測具有高靈敏度和良好的特異性。沒有顯著的交叉反應性或觀察到MDA和類似物之間的干擾。注：受現(xiàn)有技能和知識的限制，Biomatik很難完成交叉反應性檢測，因此，MDA和所有類似物之間可能仍然存在交叉反應。

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艾美捷丙二醛(MDA)elisa檢測試劑盒#EKF60157樣品采集和儲存（通用）：

血清：將全血樣品在室溫下放置2小時，或在2-8°C下放置過夜，以約1000×g離心20分鐘，收集上清液并立即進行測定。采血管應該是一次性的、無熱原的、無內毒素的。

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血漿：使用EDTA-Na2或肝素作為抗凝劑收集血漿。在收集樣品后30分鐘內，在2-8°C下，以1000×g離心15分鐘。收集上清液并立即進行測定。避免溶血、高膽固醇樣品。

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組織勻漿：由于溶血性血液與測定結果有關，有必要通過用預冷卻的PBS緩沖液（0.01M，pH=7.4）清洗組織來去除殘留的血液。稱重后將組織切碎，并在PBS中勻漿（體積取決于組織的重量。正常情況下，9mL PBS適用于1克組織片。建議將一些蛋白酶抑制劑添加到PBS中），并在冰上使用玻璃勻漿器。為了進一步破壞細胞，你可以用超聲波細胞破壞器對懸浮液進行超聲處理，或者對其進行凍融循環(huán)。然后將勻漿以5000×g離心5分鐘以獲得上清液?？偟鞍诐舛韧ㄟ^BCA試劑盒測定，每個孔樣品的總蛋白濃度不應超過0.3mg。

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粘附和懸浮細胞培養(yǎng)：使用三個T25燒瓶或一個T75燒瓶進行細胞培養(yǎng)，細胞數(shù)量（1x107）；

1.懸浮細胞：以2500rpm在2-8℃下離心5分鐘；收集澄清的細胞培養(yǎng)上清液；

2.粘附細胞：直接收集上清液；在2-8℃下以2500rpm離心5分鐘；收集澄清的細胞培養(yǎng)上清液以立即檢測或在-80℃下單獨儲存

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細胞裂解物的制備：兩種類型的細胞裂解物如下所述。

1.懸浮細胞裂解物：以2500rpm在2-8℃下離心5分鐘；然后將預冷卻的PBS加入收集的細胞中，輕輕混合。通過重復離心重新收集細胞。加入0.5-1ml RIPA裂解緩沖液（由于干擾抗原抗體反應，不建議使用NP-40裂解緩沖液或Triton X-100表面活性劑）。添加合適的蛋白酶抑制劑（如PMSF，工作濃度：1mmol/L）。在冰上溶解細胞30分鐘-1小時。在裂解過程中，使用移液器吸移或間歇搖動離心管以完全裂解蛋白質?；蛘?，通過超聲波細胞分裂器使細胞破碎（300W，3~5秒/次，30秒間隔，4-5次）或超聲波發(fā)生器（14μm，30秒）。裂解液或超聲波破碎結束時，以10000rpm在2-8℃下離心10分鐘。然后，將上清液加入EP管中，并在-80℃下儲存。

2.粘附細胞裂解物：吸收上清液，加入預冷PBS一次。然后，加入0.5-1ml RIPA裂解緩沖液（由于干擾抗原抗體反應，不建議使用NP-40裂解緩沖液或Triton X-100表面活性劑）。添加合適的蛋白酶抑制劑（如PMSF，工作濃度：1mmol/L）。用細胞刮刀輕輕刮去附著的細胞。將細胞懸浮液加入離心管中。在冰上溶解細胞30分鐘-1小時。在裂解液處理過程中，使用尖端移液或間歇性搖動離心管以完全裂解蛋白質?；蛘?，通過超聲波發(fā)生器（14μm，持續(xù)30s）或超聲波細胞破壞器（300W，3~5s/次，間隔30s，4-5次）對細胞進行破碎。裂解物/超聲波破碎結束時，在2-8℃下以10000rpm離心10分鐘。然后，將上清液加入EP管中，并在-80℃下儲存。

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其他生物流體：在2-8°C下，以1000×g離心樣品20分鐘。收集上清液并立即進行測定。

丙二醛(MDA)elisa檢測試劑盒試劑制備和儲存：

使用前，將所有試劑和樣品置于室溫下20分鐘。

1、洗滌緩沖液：

如果濃縮液中形成晶體，可以用40°C水浴加熱（加熱溫度不應超過50°C）并將其輕輕混合，直到晶體完全溶解。溶液在使用前應冷卻至室溫。

用去離子水或蒸餾水將30ml（對于48T為15ml）濃縮洗滌緩沖液稀釋至750ml（對于48T為375ml）洗滌緩沖液

（去離子水或蒸餾水的推薦電阻率為18MΩ）。將未使用的溶液放回2-8°C。

2、標準：

1). 將1ml樣品稀釋緩沖液加入一根標準管（標記為零管）中，使管在室溫下保持10分鐘并充分混合。

注：如果標準管濃度高于試劑盒的范圍，請稀釋并標記為零管。

2). 用1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64和空白分別標記7根EP管。向每個樣品中加入0.3ml樣品稀釋緩沖液

管將0.3ml上述標準溶液（來自零管）加入第一管，并充分混合。從第一個轉移0.3ml管至第二管，并將它們充分混合。將0.3ml從第二管轉移到第三管，并將其充分混合，以此類推。樣品空白對照使用稀釋緩沖液。

注意：最好在2小時內使用標準解決方案。

3、生物素標記抗體工作液的制備：

在實驗前1小時內準備好。

1） 計算所需的工作溶液總體積：0.05ml/井×井數(shù)。（允許比總體積。）

2） 用抗體稀釋緩沖液以1:100稀釋生物素檢測抗體，并將其充分混合。（即將1ul生物素標記的抗體加入99ul抗體稀釋緩沖液中。）

4、HRP-鏈親和素偶聯(lián)物（SABC）工作溶液的制備：

在實驗前30分鐘內準備好。

1） 計算所需的工作溶液總體積：0.1ml/孔×孔數(shù)。（允許比總量多0.1-0.2ml體積）

2） 用SABC稀釋緩沖液以1:100稀釋SABC，并將其充分混合。（即在99ul SABC稀釋液中加入1ul SABC緩沖區(qū)。）